人骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达

背景：人骨唾液蛋白基因在矿化组织以外的易发生骨转移的人乳腺癌中表达。临床观察显示骨转移处的乳腺癌细胞骨唾液蛋白的表达量要高于原发部位的乳腺癌细胞，因此骨唾液蛋白有可能与肿瘤特异性骨转移的关系密切。研究乳腺癌骨转移可为将来临床的预防和治疗提供新的药物靶点。目的：建立骨唾液蛋白的稳定表达乳腺癌细胞系，观察骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移的整个过程中的作用。设计：对照实验。单位：华南理工大学生物科学与工程学院，解放军广州军区广州总医院医学实验中心。材料：实验于2003-11／2004-03在解放军广州军区广州总医院医学实验室完成。质粒、菌种和细胞：pIRES2-EGFP载体质粒，E．Coli．Top10、含有人骨唾液蛋白基因全长的克隆载体pB-hBSP和发生特异性骨转移以及脑转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO和MDA-MB-23lBR。方法：将人骨唾液蛋白基因通过聚合酶链式反应的方法从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆出来，在其5’和3’端分别引入BglⅡ和PsiⅠ限制性酶切位点，定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP，构建重组载体pIRES2-hBSP-EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性脑转移和骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中。主要观察指标：pIRES2-hBSP-EGFP重组表达载体的构建。重组表达载体pIRES2-hBSP-EGFP转染乳腺癌细胞。结果：①成功构建人骨唾液蛋白和绿色荧光蛋白非融合表达的真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP。②成功转染特异骨转移和脑转移的乳腺癌细胞株，可在荧光显微镜下观察到荧光蛋白标记，人骨唾液蛋白得到相应表达。结论：真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP的构建及转染可为骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移中的作用的体内、外研究奠定一定的基础。     

广州地区不良孕产史夫妇外周血异常核型分析

目的观察不良孕产夫妇异常染色体分布类型及其与不良孕产的关系。方法对261对不良孕产夫妇外周血淋巴细胞进行细胞遗传学分析,采用G显带方法。结果 261对不良孕产史夫妇染色体异常80例(15.3%),其中相互易位9例;Turner嵌合体1例;染色体异态70例,包括9号染色体小臂间倒位10例,次缢痕长度增加16例,D组、G组短臂的随体长度增加或减少或双随体共36例,大Y、小Y共8例。结论不良孕产夫妇染色体异常主要为平衡易位和多种染色体异态,后者在不良孕产史夫妇中的高发生率提示其具有一定临床效应。     

基于小波包-交叉频率相干性的肌间耦合特性

人体运动控制系统具有高度的非线性特性,通过量化评价表面肌电(sEMG)信号间的非线性耦合强度,可以得到运动相关肌肉的功能状态,进而探究人体运动控制的机制。本文将小波包分解和n∶m相干性分析相结合,构建基于小波包-n∶m相干性的肌间交叉频率耦合分析模型,探究肌电信号间的非线性耦合关系。在维持30%最大自主收缩力(MVC)的肘部屈伸状态下,采集20名健康成年人的sEMG信号,首先基于小波包分解获取子带分量,然后将子带信号进行n∶m相干性计算,分析肌间耦合特征。结果表明:30%MVC的肘部屈曲运动下,协同肌对和拮抗肌对的线性耦合(频率比为1∶1时)强度高于非线性耦合(频率比为1∶2、2∶1和1∶3、3∶1时);对于肌间非线性耦合,随着频率比的增大,耦合强度随之降低,且频率比为n∶m和m∶n之间没有明显的耦合强度差异;beta和gamma频段内的肌间耦合主要体现在协同肌对之间的线性耦合(1∶1)和低频率比的非线性耦合(1∶2、2∶1)以及拮抗肌对之间的线性耦合上。以上说明:小波包-n∶m相干性方法可以定性、定量地描述肌间非线性耦合强度,为深入揭示人体运动控制机制和运动功能障碍患者的康复评价提供理论参考。     

妊娠合并心脏病111例临床分析

目的:妊娠合并心脏病的发生率及探讨妊娠合并心脏病的产科处理原则.方法:对111例妊娠合并心脏病的病例资料进行分析.结果:2001年1月～2008年2月妊娠合并心脏病的发生率为0.596%.产前检查≥3次者其心衰发生率较无产前检查者低(P<0.01).先天性心脏病患者心房、心室间隔缺损2cm2<缺口<3.5 cm2加强产前监护患者心衰发生率与缺口<2 cm2,比较P>0.5差异无显著性,剖宫产率为68.468%;孕产妇死亡率为0.901%.阴道产组和剖宫产组在分娩期及产褥期新发生的心衰病例分别为15.625%和5.263%.结论:定期产前检查可预防合并症改善母儿预后,对于心房、心室间隔缺损2cm2<缺口<3.5 cm2患者若能加强产前监护仍能获得良好妊娠结局.     

食用植物油种类与酸败对梓油定性结果的影响分析与探讨

目的：分析食用植物油种类与酸败对溴素-乙醚法定性检测梓油结果的影响。方法：用溴素一乙醚法分组定性检测不同种类正常植物油、酸败豆油及梓油阳性对照系列。结果：豆油、棉子油出现假阳性结果，花生油、菜子油出现可疑阳性结果，酸败植物油出现假阳性结果。结论：用溴素-乙醚法定性检测梓油，空白对照应加入与分析样品同种类的正常植物油，同时对检品应进行酸败指标检测，对于酸败的食用植物油样品，梓油定性检测结果应结合现场调查资料进行综合判定。     

高度近视眼黄斑裂孔性视网膜脱离的临床特征和手术疗效分析

目的 分析高度近视眼黄斑裂孔性视网膜脱离的临床特征和手术疗效.方法 采用系列病例研究,对近6年40例(40只眼)高度近视眼黄斑裂孔性视网膜脱离患者临床资料进行回顾性分析,所有患者均屈光不正均≥-6.00 D,不伴有周边视网膜裂孔.结果 40例(40只眼)中,男8例,女32例.年龄33～76岁,平均59.3岁.平均随诊时间12.3个月.视网膜最终复位36只眼(90.0%).术后视力提高30只眼(75.0%),保持稳定5只眼(12.5%),下降5只眼.术后视力较术前视力提高(P=0.000).预示术后视力差的因素:伴有后巩膜葡萄肿(P=0.023),伴有视网膜色素上皮萎缩(P=0.001).术中剥除内界膜17只眼,保留内界膜23只眼,剥除内界膜组视网膜复位率(94.1%),保留内界膜组视网膜复位率(78.3%),两组术后视力提高差异无统计学意义(P=0.240).结论 现代玻璃体视网膜手术治疗高度近视眼黄斑裂孔性视网膜脱离可以使视网膜脱离绝大多数复位,手术后大多数眼能改善或保持视力.     

嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析

目的 分析嗜人性猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retroviruses,PERV)感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法 嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果 嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论 嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.     

人骨唾液蛋白膜靶向表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达

目的构建人骨唾液蛋白（BSP）膜靶向表达载体，并转染人乳腺癌细胞，筛选获得稳定转染细胞，为进一步体内外研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。方法通过PCR的方法从pB-hBSP载体中亚克隆人骨唾液蛋白hbsp基因，定向克隆至细胞膜靶向定位真核表达载体pDisplay^TM中，构建中间重组载体pDisplay-hBSP，再次通过PCR的方法从构建的pDisplay-hBSP载体中亚克隆出膜靶向信号肽、hbsp以及细胞膜定位蛋白基因，定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP，构建重组复合载体pID-kBSP-EGFP，利用脂质体转染特异性骨转移的乳腺癌细胞。结果重组载体pDisplay-hBSP和pID-hBSP-EGFP插入目的片段的测序结果与Genbank中发表的BSP序列基本一致。结论成功构建了人骨唾液蛋白膜靶向表达载体，并且经转染后成功在特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO中表达。为下一步进行体内外试验研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。     

46,XX男性综合征细胞和分子遗传学分析

目的 分析46,XX男性综合征患者的细胞及分子遗传学特征,探讨性分化异常的机制.方法 采用G显带、多重PCR技术对1例男性表型的46,XX男性综合征患者进行染色体核型分析、SRY基因检测、Y染色体AZF基因检测.结果 患者染色体核型为46,XX,SRY基因存在,Y染色体AZF基因检测示AZFa、AZFb、AZFc、AZFd四个区域全部缺失.结论 SRY基因是决定性别和分化的重要基因,通过染色体核型分析和SRY基因检测有利于明确性反转综合征的临床诊断.