蛙皮素对人胃黏膜上皮永生细胞系GES-1细胞生长作用和机制的研究

目的　观察蛙皮素对人永生细胞系 (GES 1)生长的调节和作用机制。方法　①分子水平观察GES 1细胞胃泌素释放肽 (GRP)受体mRNA的表达。②利用受体化学交联和细胞膜组织化学法观察GRP受体蛋白表达。③观察不同浓度的蛙皮素及其受体拮抗剂对GES 1细胞生长的影响。④观察蛋白激酶C (PKC)抑制剂对蛙皮素促进GES 1细胞作用的影响。⑤观察蛙皮素作用GES 1细胞后 ,细胞内三磷酸肌醇 (IP3 )和PKC活性以及观察蛙皮素对此细胞系作用后GRP受体mRNA表达量的变化。结果　①GES 1细胞表达GRP受体mRNA ,Southern杂交进一步证明表达特异性mRNA。②GRP受体蛋白相对分子质量为 75× 10 3 ,该受体位于细胞膜。③蛙皮素可促进此细胞生长 ,而蛙皮素特异性受体拮抗剂可抑制此促生长作用。④蛙皮素对该细胞的促生长作用可被PKC抑制剂所抑制。⑤蛙皮素可引起细胞内IP3 含量显著增加以及引起细胞内PKC活性自细胞质向细胞膜转移。⑥蛙皮素作用GES 1细胞后可引起GRP受体mRNA表达增加。结论　此研究证明人胃黏膜上皮细胞系GES 1表达GRP受体mRNA和蛋白。蛙皮素对GES 1细胞的促生长作用是通过特异性受体介导 ,引起细胞内IP3增加和PKC活性转移来实现的。蛙皮素作用后引起该细胞GRP受体mRNA表达量增加 ,说明蛙皮素对其自身受体有上调作用     

胰腺内分泌肿瘤临床、分子生物学和遗传学预后指标

胰腺内分泌肿瘤(pancreatic endocrine tumors，PETs)又称胰岛细胞瘤，是一组少见或罕见的肿瘤，年发病率一般不超过2．0新病例／百万人口。根据PETs的临床和病理可将其分为功能性PET和无功能性PET两大类，功能性PET共有十种，即：胃泌素瘤(gastrinomas)又称卓一艾综合征     

胰高血糖素受体突变所致α细胞增生、高胰高血糖素血症和胰腺内分泌肿瘤

美国UCLA Cedars-Sinai医学中心于润(Run Yu)博士等在2008年首次报道了一例极为罕见的病例,该患者病例特点是以α细胞增生为主的弥漫性胰岛增生(nesidioblastosis)同时合并胰高血糖素微腺瘤和无功能胰腺内分泌肿瘤,虽然患者有高胰高血糖素血症(hyperglucagonemia)却无相应的胰高血糖素瘤综合征的临床表现[1].该病例为伊朗移民,女性,60岁.2003年因上腹痛,CT检查意外发现胰头占位及胆总管扩张.磁共振检查发现胰腺呈弥漫性增大,胰头占位约2.3 cm ×2.5 cm ×2.4 cm,肝脏有血管瘤.患者血浆胰高血糖素高达59 284 ng/L(正常上限为150 ng/L),同时胰多肽也明显升高为735 ng/L(正常范围为10～311 ng/L),但是无皮肤红斑、体重下降、胃炎和高血糖等胰高血糖素瘤综合征的临床表现.空腹血浆嗜铬粒素A、神经元特异性烯醇化酶、胰岛素、胃泌素、血管活性肠肽和钙调素均在正常范围内.患者曾患有胃食管反流、十二指肠溃疡、贫血、焦虑和抑郁等.     

微管相关蛋白2在胰腺神经内分泌肿瘤组织中的表达及预后意义

  目的   探索微管相关蛋白2（microtubule-associated protein 2,MAP2）与微管相关蛋白1B（microtubule-associated protein 1B,MAP1B）在预测胰腺神经内分泌肿瘤（pancreatic neuroendocrine tumors,PNETs）患者预后中的意义。   方法   收集1999年12月至2016年12月来自于北京协和医院、中山大学附属第一医院、复旦大学上海癌症中心和Cedars-Sinai医学中心（洛杉矶）193例患者的193个原发肿瘤标本。免疫组织化学染色法分别检测193例、120例PNETs组织中MAP2、MAP1B的表达,随后分析蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系。   结果   MAP2和MAP1B在PNETs患者中的阳性率分别为45.6%（88/193）和64.2%（77/120）。MAP2表达阳性的患者的总生存好于阴性患者（P=0.012）。另外,MAP2阳性Ⅱ、Ⅲ期患者的总生存也优于阴性者（P=0.017）。然而,MAP1B的表达与肿瘤大小、转移、肿瘤组织学分级、临床分期、总生存、无病生存均无相关性（P > 0.05）。   结论   MAP2为潜在的预测PNETs患者预后的指标。      

神经中间丝蛋白NF-66与胰岛素瘤良恶性的关系

目的 探讨神经中间丝蛋白NF-66能否作为判断胰岛素瘤良恶性的分子标志物.方法 采用免疫组织化学染色法检测胰岛素瘤组织、瘤旁胰腺组织及3株胰岛素瘤细胞株NF-66蛋白的表达,应用单因素及多因素统计分析胰岛素瘤NF-66蛋白表达与肿瘤病理特征及患者预后的相关性.结果 132例胰岛素瘤组织中102例(77％)表达NF-66蛋白,98例瘤旁胰腺组织均未见该蛋白表达(P=4.86×10-31);3株胰岛素瘤细胞株均高表达NF-66蛋白.118例良性胰岛素瘤中96例(81％)表达NF-66,而14例恶性胰岛素瘤中6例(43％)表达NF-66,恶性胰岛素瘤的表达显著下降(P =0.003).胰岛素瘤NF-66表达与肿瘤大小(以3cm为界)、远处转移、远处并淋巴结转移均呈显著负相关(46％比81％,P=0.009;38％比81％,P=0.013;43％比81％,P=0.010);而与患者性别、年龄、肿瘤复发和生存状态不相关.结论 胰岛素瘤中NF-66表达下调与肿瘤的恶性生物学特征有关,可能成为潜在的鉴别胰岛紊瘤良恶性的分子标志物.     

晚期胃肠胰腺神经内分泌肿瘤靶向治疗进展

<正>神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors,NET)是一类来源于神经内分泌系统(diffuse neu-roendocrine system,DNS)系统的罕见的肿瘤,占所有恶性肿瘤的1%~2%。美国SEER数据显示,近30年内NET发病率增长了5倍,2004年美国NET的发病率为5.25/100 000[1],男性发病率较女     

粪便p53突变检测在消化道肿瘤中的应用价值探讨

目的：探讨粪便p53检测在消化道肿瘤诊断中的潜在价值。方法：收集连续就诊的62例胰腺癌、19例壶腹癌及胆管癌、7例结肠癌及6例胃癌患者的粪便提取DNA,采用聚合酶链反应－单链构象多态（PCR－SSCP）方法检测粪便p53外显子5－8的突变情况;同时按性别、年龄配对选择慢性胰腺炎21例,良性上消化道疾病18例及正常人55例作对照。结果：粪便p53突变率在胰腺癌患者为37．1％（23／62例）,胃癌、结肠癌等消化道恶性肿瘤是46．9％（15／32例）;对照组中,良性消化道疾病为12．8％（5／39例）,正常人为5．5％（3／55例）。消化系肿瘤的突变率明显高于正常人和良性病变组。结论;粪便p53突变检测是一种潜在的无创性消化系良、恶性病变鉴别手段。     

生长抑素抑制酸分泌的机制研究

目的探讨生长抑素-14(SS-14)通过何种受体亚型抑制兔离体壁细胞组胺诱导的酸分泌.方法利用经纯化的离体壁细胞为研究模型,以14C-氨基比林摄取为指标,观察SS-14及某些生长抑素受体亚型特异性激动剂对组胺诱导的酸分泌的影响;用反转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)及原位杂交方法(ISH)研究壁细胞生长抑素受体亚型的表达.结果SS-14、奥曲肽以及生长抑素Ⅱ型受体特异性激动剂NC8-12(10-9～10-7mol/L)均能明显抑制组胺(10-6mol/L)诱导的酸分泌(P《0.01),而生长抑紊Ⅲ、Ⅳ型受体激动剂在相同浓度下对组胺诱导的酸分泌无明显抑制作用(P》0.05);RTPCR方法扩增出了生长抑素Ⅱ型受体(SSR2)的特异片段;用ISH方法确定了离心涂片的壁细胞以及胃黏膜冰冻组织切片的壁细胞上有SSR2基因表达.结论在国内外首次证明SSR2介导生长抑素对兔离体壁细胞组胺诱导的酸分泌的抑制作用;首次证明壁细胞有SSP2的基因表达.     

蛙皮素对人胃黏膜上皮永生细胞系cyclin D1/CDK4的影响

目的 研究蛙皮素对正常胃黏膜上皮细胞的促生长作用及其与细胞调控因子之间的关系。方法 应用人胃黏膜上皮永生细胞株GES－1,经蛙皮素及受体拮抗剂不同处理后,以MTT为指标研究对细胞增殖的影响;流式细胞仪观察对细胞cyclin D1表达的影响;利用Western印迹和增强化学发光法观察CDK4蛋白表达的变化;利用Sepharose微珠免疫沉淀方法检测对CDK4活性的影响。结果 蛙皮素在浓度为10^-7mol/L时对GES－1细胞有明显的促生长作用,对cyclin D1表达有促进作用;蛙皮素受体拮抗剂均抑制这些作用;同时还发现蛙皮素可使人胃黏膜上皮永生细胞系细胞的CDK4蛋白表达及其激酶活性增加。结论 蛙皮素促进人胃黏膜上皮细胞生长是通过使细胞周期调控因子cyclin D1和CDK4蛋白表达升高,CDK4激酶活性增加,促进细胞周期的进展而实现的。