毕赤酵母表达系统

毕赤酵母表达系统是一种优秀的重组蛋白表达系统,近年来被广泛应用于重组蛋白的表达。现就巴斯德毕赤酵母表达系统的特点及其用于外源蛋白表达的基本策略作一综述。     

微课设计在生物化学教学中的应用探讨

以"糖的有氧氧化"微课设计为例,把生物化学的课程内容、医学生自身知识能力和科学精神交互融合进行微课教学设计,采用视频、图片、语音和文字等多种信息整合,进而生动形象表达教学内容,使科研情景、理论知识、知识与实践应用、思考与小结依次呈现,探讨微课设计在生物化学教学中的应用,以期让微课设计在提高生物化学教学质量中发挥积极作用...     

丙戊酸钠下调SH-SY5Y细胞中Bcl-2表达的作用及机制分析

目的 探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)在神经细胞中下调Bcl-2表达的作用及可能机制.方法 用不同浓度的VPA处理SH-SY5Y细胞,定量PCR检测Bcl-2 mRNA与miR-34a水平变化,Western blot检测Bcl-2蛋白水平变化,报告基因系统检测Bcl-2启动子活性变化,联合转录抑制剂处理细胞,分析Bcl-2 mRNA稳定性变化,联合miR-34a模拟物及抑制剂处理细胞,进一步分析miR-34a在VPA下调Bcl-2表达中的作用.Annexin V/PI双染结合流式分析细胞凋亡情况.结果 VPA可浓度依赖性下调SH-SY5Y细胞中Bcl-2的mRNA与蛋白水平(P＜0.05).VPA暴露不改变Bcl-2的启动子活性(P＞0.05),但显著降低了其mRNA的稳定性(P＜0.05).同时,VPA可上调SH-SY5Y细胞中miR-34a的表达(P＜0.05),联合使用miR-34a的抑制剂可逆转VPA对Bcl-2表达的下调作用,且单独的miR-34a模拟物也可以下调细胞中Bcl-2的表达.VPA暴露还可引起SH-SY5Y细胞的凋亡增加(P＜0.05).结论 VPA可通过上调SH-SY5Y细胞中miR-34a水平而抑制Bcl-2的表达.     

开展研讨式生物化学论坛,培养医学八年制学生科研思维能力

在医学基础课程学习阶段形成一定的科研思维体系,对医学八年制学生而言至关重要。笔者在医学八年制生物化学教学中,以理论课所教授知识为基础,引导学生提出问题,在老师的指导下开展研讨式论坛,从而培养学生形成自主科研思维体系,为今后全面提高科研创新能力打下坚实基础。     

认识和预防亚健康状态

随着人们生活水平的提高,生活质量和健康要求越来越受到关注和追求。因此亚健康问题成为很多人的苦恼和困扰。     

以学科兴趣小组培养临床五年制学生科研思维及创新能力

在临床医学五年制学生的培养过程中科研思维及创新能力的培养是学生基本素质和后续长远发展的关键环节,在基础课程阶段开展学科兴趣小组是达到这一目标的有效措施。在五年制学生中通过开展生物化学兴趣小组,可取得较理想的效果,开启了学生的科研思维,培养了其创新能力。     

丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬

目的探讨丙戊酸钠（VPA）对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经 母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用 定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将 含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的 影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进 而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自 噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平（P<0.05）。VPA处理不影响SHSY5Y 细胞中ATG4B的启动子活性（P>0.05）,但显著下调其mRNA的稳定性（P<0.05）。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细 胞中miR-34c-5p的表达水平（P<0.05）。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的 下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平（P<0.05）。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信 号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。     

血管紧张素Ⅱ升高血管内皮细胞中ROS水平并激活自噬通路

目的: 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管内皮细胞自噬的影响及其可能机制。方法: 以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,荧光酶标仪检测AngⅡ(10^-7mol/L)、AngⅡ联合N-乙酰半胱氨酸(NAC,50 μmol/L)作用24 h后细胞中活性氧簇(ROS)水平;用不同浓度(10^-8、10^-7、10^-6mol/L)AngⅡ作用24 h或10^-7mol/L AngⅡ作用不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、36 h)后,通过Western blotting分析微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白变化、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察自噬体形成情况来判断细胞中自噬发生情况;AngⅡ(10^-7mol/L)联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,2 mmol/L)或NAC(50 μmol/L)处理24 h后用同样方法检测细胞中自噬的发生情况。结果: 细胞经AngⅡ刺激后细胞内ROS的水平显著升高(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强(P<0.05),自噬体形成明显增加;3-MA或NAC可显著抑制内皮细胞中AngⅡ诱导的LC3-Ⅱ蛋白表达(P<0.05)与自噬体形成。结论: AngⅡ可以通过升高血管内皮细胞内ROS的水平从而诱导自噬的发生。