白藜芦醇上调BATF2表达及抑制肝癌细胞增殖的研究

目的 初步探讨白藜芦醇对BATF2表达的调控作用及对肝癌细胞(HepG2)增殖能力的影响.方法 用不同剂量的白藜芦醇(终浓度分别为20、40、80 μmol/L)处理HepG2细胞,进行逆转录PCR (RT-PCR)、实时定量PCR (Real-time PCR)、Western blot检测碱性亮氨酸拉链转录因子2(BATF2) mRNA和蛋白水平表达的变化,并采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测对细胞增殖能力的影响.结果 在HepG2细胞中,白藜芦醇能剂量依赖性地诱导BATF2在转录和翻译水平的表达,并抑制细胞的增殖(P＜0.05);基因检测发现白藜芦醇显著诱导BATF2启动区活性,-244～-152区域存在白藜芦醇的可能结合位点.结论 白藜芦醇能增强HepG2细胞中BATF2的表达并抑制细胞的增殖,提示上调BATF2的表达可能是白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖的机制之一.     

MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用

目的 初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用.方法 生物信息学分析,预测LXRβ mRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点.在人肝细胞系HepG2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβ mRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ 3'-UTR报告基因质粒pMIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化.结果 在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P＜0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒pMIR/LXRβ的荧光素酶活性(P＜0.05).同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用.结论 miR-7可通过结合在LXRβ 3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成.     

生物化学与分子生物学实验教学改革初探

为进一步提高生物化学与分子生物学实验课的教学质量,增强学生应用理论知识的能力和综合素质;针对目前实验教学存在的不足,在生物化学与分子生物学实验教学中,丰富教学内容（如更新内容、区分设置实验、增补设计性/综合性实验）、改革教学方式（增加教学手段、教学方法及示教环节）和完善教学评价（兼顾实验报告考核和操作考核）等方面进行了初步探索。通过调查问卷分析,发现学生对实验课学习热情更高,实验技术更熟练,实验教学效果明显提升。现将近年在这些方面实施改革的方法及效果进行小结,以期为医学院校生物化学与分子生物学实验教学提供有益借鉴。     

丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬

目的探讨丙戊酸钠（VPA）对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经 母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用 定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将 含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的 影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进 而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自 噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平（P<0.05）。VPA处理不影响SHSY5Y 细胞中ATG4B的启动子活性（P>0.05）,但显著下调其mRNA的稳定性（P<0.05）。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细 胞中miR-34c-5p的表达水平（P<0.05）。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的 下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平（P<0.05）。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信 号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。     

二氯乙酸盐增强盐酸吡柔比星杀伤肝癌细胞的研究

目的 探讨二氯乙酸盐(Dichloroacetate,DCA)增强盐酸吡柔比星(Pirarubicin,THP)杀伤肝癌细胞的效果及可能机制.方法 用40 μmol/L DCA与不同浓度(0、200、400、600、800 μmol/L)盐酸吡柔比星(THP)联合处理肝癌HepG2细胞24 h,采用CCK-8法检测对细胞增殖的影响.然后用40 μmol/L二氯乙酸盐与600 μmol/L盐酸吡柔比星联合处理肝癌HepG2细胞24 h,用Western blot检测细胞中PARP的表达变化及JNK的磷酸化水平;用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的水平.结果 DCA可显著增强不同浓度THP对肝癌HepG2细胞的杀伤效果,与PBS组相比具有统计学差异(P＜0.05);DCA联合THP处理24 h可显著升高细胞内的ROS水平,与PBS联合THP组相比具有统计学差异(P＜0.05);此外,DCA联合THP可使HepG2细胞中凋亡相关分子PARP的剪切明显增加,并增强JNK的磷酸化水平.抗氧化剂NAC可显著降低DCA与THP联合处理对HepG2细胞中JNK的激活作用.结论 DCA可显著增强THP杀伤肝癌细胞效应,其机制可能与ROS/JNK通路的激活有关.     

生物化学期末考试试卷的分析与评价

分析评价临床医学2008级五年制本科2班学生的生物化学期末考试试卷,考试成绩呈负偏态分布,平均成绩为73.35分,难度为0.78,区分度为0.26,信度为0.88。试卷题型分布合理,试题总体难度适中,区分度尚可,信度高,较好地反映了学生的真实水平。     

下调miR-4443/TIMP2信号通路增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性

目的 探讨下调miR-4443/TIMP2信号通路后肝癌HepG2细胞对索拉非尼敏感性的影响.方法 将HepG2细胞分为对照组(DMSO)与索拉非尼处理组(10 μmol/L),索拉非尼处理HepG2细胞24 h后,RT-qPCR检测miR-4443的变化;脂质体法将miR-4443模拟物与miR-4443抑制剂转染HepG2细胞,通过CCK-8检测转染miR-4443模拟物或抑制剂后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响;生物信息学预测miR-4443的下游靶基因,索拉非尼处理24 h后通过RT-qPCR和Western blot分别检测下游靶基因TIMP2 mRNA及其蛋白水平的变化;转染miR-4443模拟物、抑制剂后,RT-qPCR和Western blot分别检测TIMP2 mRNA以及蛋白含量的变化;在HepG2细胞中通过脂质体法转染TIMP2 siRNA,Western blot检测TIMP2蛋白含量;CCK-8检测敲低TIMP2后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响.结果 与对照组相比,索拉非尼处理组HepG2细胞中miR-4443的含量显著降低(P＜0.05);转染miR-4443模拟物可显著降低索拉非尼对细胞活性的抑制(P＜0.05),而转染其抑制剂则可显著增强索拉非尼的这一作用(P＜0.05);生物信息学预测结果显示miR-4443结合的下游靶基因为TIMP2;索拉非尼处理后HepG2细胞中TIMP2的mRNA及蛋白水平显著升高(P＜0.05);而在HepG2细胞中转染miR-4443的模拟物或抑制剂则可使TIMP2的mRNA表达量相应下降或上升,转染模拟物后TIMP2蛋白表达显著降低(P＜0.05),表明miR-4443 与TIMP2间存在调控关系;用TIMP2 siRNA降低TIMP2表达后,可显著增强索拉非尼对HepG2细胞活性的抑制效果(P＜0.05).结论 下调miR-4443/TIMP2信号通路可以增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性.     

个案管理对乳腺癌患者化疗期间遵医行为及生活质量的影响

目的：探讨个案管理对提高乳腺癌患者化疗期间遵医行为及生活质量的效果。方法：按所在病区将106例乳腺癌术后患者分为观察组和对照组各53例;对照组按照常规护理,观察组接受个案管理护理实践,对两组首次化疗时（护理前）、出院3个月后（护理后）患者遵医行为的执行情况、癌性疲乏及生存质量进行统计学分析。结果：观察组按时复查比例高于对照组（P<0.05）。观察组癌因性疲乏程度轻于对照组（P<0.05）。观察组躯体功能、角色、认知、情绪、社会功能评分均高于对照组（P<0.05）。结论：个案管理有助于提升乳腺癌患者化疗期间遵医行为的执行,有助于减少其癌性疲乏,提升其生活质量。