人卵巢癌相关自然反义转录子的系统筛选

目的 高通量地筛选人卵巢癌相关的自然反义转录子,为深入研究自然反义转录子在卵巢癌发生、发展中的作用奠定基础.方法 以人正常卵巢组织和卵巢癌组织为材料,用RNase Ⅰ保护分析法分离出两种组织中的正-反义转录子双链RNA,经逆转录后用抑制性消减杂交特异性扩增两种组织间的差异片段,最后对差异片段克隆、测序.结果 分离出的两种组织的正-反义转录子经克隆和鉴定后,共获得20个测序结果,其中有3个分子与卵巢癌等肿瘤可能密切相关,说明该方法可用于肿瘤相关NAT分子的系统筛选,并为深入研究卵巢癌相关NAT分子提供了靶标.     

盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。     

开展研讨式生物化学论坛,培养医学八年制学生科研思维能力

在医学基础课程学习阶段形成一定的科研思维体系,对医学八年制学生而言至关重要。笔者在医学八年制生物化学教学中,以理论课所教授知识为基础,引导学生提出问题,在老师的指导下开展研讨式论坛,从而培养学生形成自主科研思维体系,为今后全面提高科研创新能力打下坚实基础。     

噬菌体抗体库技术制备胃癌单抗MGd1的抗独特型抗体

目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件.方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VL DNA,进而连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库.以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定.结果VH、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆.在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-Id ScFv.结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-Id ScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础.     

影响老年患者浅静脉留置针留置时间的相关因素

目前浅静脉留置针已广泛应用于临床,针对老年人具有独特的优势,老年患者血管弹性差,不充盈,脆性增加,皮肤松弛,输液过程中依从性差,病情复杂、变化快,并且在日常治疗中有时每日需多次注射。因此,使用静脉留置针可以减少患者反复穿刺的痛苦,如遇抢救,可避免穿刺耗费时间,为患者及时有效的用药,提高抢救成功率。延长浅静脉留置时间,不仅能为患者减轻痛苦,节约医疗费用,还能减少护理人员针刺伤的发生。自2019年1月至2019年4月,本科共使用浅静脉留置针近200人次,均使用一次性正压无针连接静脉留置针,留置人群多为危重及年老患者,留置时间为0-14d不等。不同护士留置静脉留置针方法及操作习惯均不相同,为了有效延长老年患者静脉留置针的留置时间,特从健康宣教、留置针的选择、血管及部位的选择、穿刺及送管方法等方面进行综述,以统一操作方法,从护理操作方面进行有效干预,以延长留置时间。     

人可溶性APRIL突变体的原核表达与纯化

目的 制备人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation inducing ligand,sAPRIL)的两种突变体,为寻找APRIL 的竞争抑制剂创造条件.方法 采用一步反向PCR法,以人APRIL第186位甘氨酸(186G)和187位谷氨酰胺(187Q)残基为突变位点,构建如下两个突变体DNA,即sAPRIL突变体-1(mutant sAPRIL-1,msAPRIL-1)DNA(186G被赖氨酸残基K置换,187Q缺失)和msAPRIL-2 DNA(186G187Q置换为186K187G);测序后将两突变体DNA分别亚克隆于原核表达载体pQE-80L,继而在大肠杆菌DH5α中表达相应突变体蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定表达产物,经Ni2 -NTA和Sephadex G-75柱层析纯化相应突变体蛋白.结果 一步反向PCR结合DNA测序,得到了与上述设计一致的两个sAPRIL突变体DNA.将两突变体DNA分别亚克隆于pQE-80L后,在大肠杆菌DH5α中成功表达了相应突变体蛋白.经Ni2 -NTA柱层析成功地纯化了两突变体蛋白,经Sephadex G-75柱层析成功获得了两突变体蛋白的三聚体分子.结论 成功制备了sAPRIL的两种突变体蛋白,为寻找基于sAPRIL突变体的抗肿瘤分子奠定了基础.     

重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究

目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌＞JM109＞ATCC25922＞DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.     

双语教学在医学八年制生物化学教学中的改革探索

医学八年制教育模式目标是培养高素质复合型人才,熟练掌握和综合应用专业英语是八年制教学中的重点.生物化学是一门涵盖内容广泛的基础医学必修课程,与诸多医学基础学科广泛联系,相互交叉、相互渗透.在医学八年制生物化学教学中开展双语教学顺应了培养国际化高素质综合型人才的需要,为今后学生能在学习及工作中进行国际交流与合作打下坚实基础.本文从多年的探索及不断改革中探讨双语教学在医学八年制生物化学教学中的应用.     

Androsterone在血管内皮细胞Eahy926中对SR-BI表达的影响

目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)表达的调控.方法 FXR配体androsterone不同浓度处理Eahy926细胞,RT-PCR检测FXR特异靶基因小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)表达量的变化.RT-PCR和Real-time PCR分析经androsterone处理后Eahy926细胞中SR-BI mRNA表达的变化.用Western blot检测SR-BI蛋白表达的变化.结果 经androsterone刺激,Eahy926细胞中SHP的表达明显升高,表明FXR被活化.在经androsterone刺激的血管内皮细胞中,SR-BI在转录水平和翻译水平,表达均显著上升.结论 FXR可在血管内皮细胞系Eahy926中上调SR-BI的表达水平.

Abstract：

Objective To investigate the effect of FXR on scavenger receptor class B type Ⅰ(SR-BI) expression.Methods Human vascular endothelium Eahy926 cells were treated with FXR agonist androsterone,and the specific target gene of FXR SHP mRNA was detected by RT-PCR. SR-BI mRNA and protein were determined using RT-PCR, real-time PCR and Westem blotting. Results The level Of SHP mRNA in Eahy926 cells increased after androsterone treatment at different concentrations for 24 h,demonstrating FXR activation in the cells.RT-PCR,real-time PCR and Western blotting detected increased SR-BI expression at both mRNA and protein levels after FXR activation.Conlusion FXR increases the expression of SR-BI in human vascular endothelium cells.     

以学科兴趣小组培养临床五年制学生科研思维及创新能力

在临床医学五年制学生的培养过程中科研思维及创新能力的培养是学生基本素质和后续长远发展的关键环节,在基础课程阶段开展学科兴趣小组是达到这一目标的有效措施。在五年制学生中通过开展生物化学兴趣小组,可取得较理想的效果,开启了学生的科研思维,培养了其创新能力。