用三苯甲胺简便制备伯胺的方法

伯烷基卤或甲苯磺酸酯在乙腈中与三苯甲胺（有制法）温和反应得到N-取代三苯甲胺。18例收率62％～92％。再与TFA—CH2Ch搅拌10min或1NHC1甲醇中回流几小时脱保护基，蒸干，加1NHC1-CH3OH得标题物。     

经皮治疗仪辅佐治疗小儿支气管肺炎疗效观察

我院自 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 10月 ,应用经皮治疗仪辅佐治疗小儿支气管肺炎患儿 12 0例 ,现报告如下。1　临床资料1 1　病例选择与分组 :选择 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 10月在我科住院患儿中选择肺部听诊有罗音的 12 0例肺炎患儿 ,年龄在 2月～ 12岁。诊断参照诸福堂《实用儿科学》第 6版[1] 的诊断标准 ,随机分为治疗组和对照组各 60例。1 2　观察项目 :治疗前均作X线检查 ,治疗一周后复查 ,治疗开始后每天记录体温、咳嗽情况及肺部罗音变化。1 3　观察方法 :两组病人均常规给予抗生素和化痰止咳等对症处理 ,治疗药物相似。治疗组…     

特发性造血障碍病理机制研究的新进展

本以再生障碍性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿症及骨髓增生异常综合征为中心，根据造血障碍的分子生物学研究结果，探讨这些疾病的病理分析研究的新进展，综述特发性造血障碍研究的现状。     

EIAV减毒疫苗诱导马外周血单个核细胞Th1型细胞因子的转录

目的：探讨马传染性贫血病毒驴白细胞减毒疫苗免疫马后,外周血单个核细胞中Th1型细胞因子转录水平与免疫保护应答的关系,揭示DLV的免疫保护机制。方法：应用分子克隆及实时定量RT-PCR技术,建立了马PBMC中IFNγ-、IL-2、IL-12 mRNA转录水平的定量检测方法,定期观察4组（疫苗免疫组、阴性对照组、强毒株阳性对照组、自然感染组）12匹马外周血PBMC中细胞因子的转录水平及分布特征,同时监测体温变化等指标。疫苗株免疫动物8个月后,用EIAV强毒株攻击,观察攻击前后细胞因子转录水平的变化。结果：DLV免疫马,在免疫后3周外周血PBMC中IFN-γ、IL-2转录量显著高于阴性对照组及自然感染组（P〈0.01）;免疫后用EIAV强毒株攻击,IFNγ-、IL-2和IL-12转录的量明显升高,免疫马获得完全保护;强毒株攻击阳性对照马IFN-γ、IL-2转录量随疾病进展波动,发热期下降。结论：本研究首次证明EIAV减毒疫苗可诱导马外周血PBMC中IFN-γ、IL-2、IL-12基因高效转录,其转录水平与DLV的免疫保护密切相关,此结果在分子水平为阐明DLV的免疫保护机制提供了新的实验依据。     

人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立SERPING1^-/-猪胎儿成纤维细胞(PFFs)系,为构建遗传性血管性水肿模型提供细胞实验材料。方法 首先比较人/猪SERPING1氨基酸同源性。其次,分析猪SERPING1基因有效的编码区,据此选择第八外显子为敲除靶点,设计并合成靶向猪SERPING1的单导向RNA(sgRNA),连接到含有Cas9核酸内切酶的pX330载体上,构建SERPING1打靶载体pX330sgRNA,将其转染至猪胎儿成纤维细胞中,G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后,用T7E1酶切实验检测靶点编辑情况,测序验证单克隆细胞基因型。结果 生物信息学分析结果提示人/猪SERPING1蛋白氨基酸同源性较高,氨基酸比对相似性达到65.87%。成功构建打靶SERPING1的载体,并转染到细胞,药物筛选获得SERPING1基因敲除的单克隆细胞,测序确认了突变的基因型。结论 人/猪SERPING1蛋白同源性较高,适合用于构建遗传性血管性水肿模型。构建的Cas9/sgRNA表达载体实现了SERPING1基因编辑,获得基因敲除的单细胞克隆,为后续SERPI...     

利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系

目的：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因编辑的长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)细胞系,为构建新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 型(se- vere acute respiratory syndrome coronavirus type 2,SARS-CoV-2)不易感猪模型提供实验材料。方法：①利用生物信息学方法对大鼠和鸡的ACE2氨基酸序列进行比对,将大鼠ACE2与SARS-CoV-2 S蛋白相互作用的关键氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计嵌合的ACE2基因并构建ACE2基因敲入供体。②设计并合成靶向猪ACE2基因的sgRNA,克隆到pX330载体上构建ACE2基因打靶载体。③将ACE2打靶载体和ACE2基因敲入供体以及Neomycin抗性质粒共转染至长白猪PFF细胞,筛选G418抗性单细胞克隆并进行测序鉴定。结果：根据氨基酸序列比对结果,将大鼠ACE2蛋白的第19、31、34、35、42、353、354位氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计合成了嵌合的ACE2基因。G418抗性单细胞克隆基因型分析结果显示获得了阳性单细胞克隆。结论：利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源ACE2基因敲除、嵌合ACE2敲入的长白公猪PFF细胞系,为构建SARS-CoV-2不易感猪模型奠定了基础。     

砂炒苍耳子降低毒性的最佳工艺研究

摘要目的探讨砂炒苍耳子降低毒性的最佳工艺。方法采用单因素实验和正交实验,考察砂炒苍耳子的温度、时间、药砂比3个因素对苍耳子中毒性成分含量的影响。结果砂炒苍耳子降低毒性的最佳工艺是温度140 ℃,药砂比1：15（g•g－1）,时间12 min。结论该工艺经济,重复性好,可作为砂炒苍耳子降低毒性的最佳工艺。