人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立SERPING1^-/-猪胎儿成纤维细胞(PFFs)系，为构建遗传性血管性水肿模型提供细胞实验材料。方法 首先比较人/猪SERPING1氨基酸同源性。其次，分析猪SERPING1基因有效的编码区，据此选择第八外显子为敲除靶点，设计并合成靶向猪SERPING1的单导向RNA(sgRNA),连接到含有Cas9核酸内切酶的pX330载体上，构建SERPING1打靶载体pX330sgRNA,将其转染至猪胎儿成纤维细胞中，G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后，用T7E1酶切实验检测靶点编辑情况，测序验证单克隆细胞基因型。结果 生物信息学分析结果提示人/猪SERPING1蛋白氨基酸同源性较高，氨基酸比对相似性达到65.87%。成功构建打靶SERPING1的载体，并转染到细胞，药物筛选获得SERPING1基因敲除的单克隆细胞，测序确认了突变的基因型。结论 人/猪SERPING1蛋白同源性较高，适合用于构建遗传性血管性水肿模型。构建的Cas9/sgRNA表达载体实现了SERPING1基因编辑，获得基因敲除的单细胞克隆，为后续SERPI...