一种初步快速甄别总肠道病毒的基因分型方法

目的 建立并验证总肠道病毒5’-非编码区(5＇-non coding region,5＇-NCR)PCR扩增测序并在NCBI数据库比对进行生物信息分析的方法,为手足口病的早期快速诊断提供敏感、高效的总肠道病毒分子分型检测方法. 方法 收集165例临床检测阳性的标本,提取总RNA扩增人肠道病毒A、B、C和D型5＇端非编码区用于总肠道病毒初步基因分型,PCR产物测序并在Genbank中进行BLAST分析.结果 成功从临床咽拭子标本中扩增了5＇-NCR用于基因分型.165例总肠道病毒阳性标本中鉴定出12种肠道病毒类型,有77例人肠道病毒(enterovirus type 71,EV-71),37例人柯萨奇病毒(coxsackievirus,CV)CV-A16,31例CV-A4,20例其它型别. 结论 5＇-NCR PCR测序是总肠道病毒基因分型和监测的敏感、简单、早期、快速的检测方法.     

人乳头状瘤病毒感染妇女的年龄及其亚型分析

目的分析广州地区人乳头状瘤病毒(HPV)感染阳性妇女的年龄及其亚型分布,为预防HPV感染及宫颈癌的发生提供依据。方法采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术进行HPV分型检测,根据芯片上HPV基因亚型分布图进行阳性或阴性及单重或多重感染判断。结果 4 210例HPV阳性病例中,HPV感染年龄段分布前5位依次为26³0、2130、21²5、3125、31³5、3635、36⁴0、4140、41⁴5岁,分别占25.89%、20.07%、17.91%、13.63%、8.08%;感染率排在前10位的HPV亚型依次为HPV52、16、58、6、11、CP8304、53、68、18、33,分别占阳性病例数的25.44%、17.86%、13.14%、12.71%、9.86%、9.17%、9.05%、6.53%、5.99%、5.82%;其中,单一和多重感染率分别为70.14%、29.86%;随年龄的增长,HPV52、16、58感染率逐渐增加,HPV6、11亚型感染率逐渐下降。结论 HPV感染阳性妇女主要集中在2145岁,分别占25.89%、20.07%、17.91%、13.63%、8.08%;感染率排在前10位的HPV亚型依次为HPV52、16、58、6、11、CP8304、53、68、18、33,分别占阳性病例数的25.44%、17.86%、13.14%、12.71%、9.86%、9.17%、9.05%、6.53%、5.99%、5.82%;其中,单一和多重感染率分别为70.14%、29.86%;随年龄的增长,HPV52、16、58感染率逐渐增加,HPV6、11亚型感染率逐渐下降。结论 HPV感染阳性妇女主要集中在21⁴0岁年龄段,HPV52、16、58、6是最主要的感染亚型,HPV感染以单一亚型感染为主,不同年龄段HPV感染的优势亚型有所不同。     

脐血中CD34+CD38+细胞含量对急性白血病患者移植后造血重建的影响

为了探讨非亲缘脐血移植中CD34+ CD38+ 细胞回输量对造血重建的影响 ,采用流式细胞术分析复苏后的CD34+ CD38+ 细胞数 ,并对 2 0例急性白血病患者的体重、中性粒细胞 (ANC)和血小板 (Plt)恢复时间进行测定。结果表明 :2 0例接受的CD34+ CD38+ 细胞输入量为 (9.85 - 32 5 .71)× 10 4/kg ,其ANC恢复 >5× 10 8/L的中位时间为 18 5 (11- 32 )天。在 19例患者中Plt恢复 >2× 10 10 /L的中位时间为 4 5 (12 - 118)天。CD34+ CD38+ 细胞输入量与ANC和Plt恢复时间存在相关 ,r值分别为 - 0 .5 77(P <0 .0 1)和 - 0 .5 0 3(P <0 0 5 )。结论 :CD34+ CD38+细胞含量与造血恢复时间相关 ,足量输入CD34+ CD38+ 细胞可能使植入提前     

广州地区6493例女性生殖道人乳头状瘤病毒检测结果分析

目的了解广州地区妇女生殖道人乳头状瘤病毒感染状况和基因亚型分布。方法 2006年10月至2010年2月,采用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术(HybriMax)对广州地区6493例女性进行人乳头状瘤病毒检测,并对HPVDNA亚型、感染率和年龄分布进行分析。结果 6493例女性中检出HPV阳性1947例,阳性率为29.99%。阳性感染者中,单一型感染最多,为1436例,占73.75%,其中高危单一型感染者1143例,占58.71%,低危单一型感染者293例,占15.05%;混合型感染者511例,占26.25%,主要为双重感染,占19.41%。15个与宫颈癌密切相关的HPV高危亚型阳性率为25.24%,6个低危亚型HPV感染阳性率为7.98%。排在前十位的亚型分别是HPV52(25.22%)、HPV58(14.20%)、HPV16(13.56%)、HPV6(9.76%)、HPV11(8.32%)、HPV53(7.70%)、HPV33(6.73%)、CP8304(6.68)、HPV68(6.63)、HPV18(6.52%)。在各年龄组中,小于20岁女性感染率最高,为52.5%,各年龄组HPV感染差异有统计学意义...     

改良原代培养方法提高人胎盘绒毛膜间充质干细胞的产量

目的 建立获得大量P0代人胎盘绒毛膜间充质于细胞(hpcMSCs)培养方法.方法 从胎盘绒毛膜分离出hpcMSCs,经初次培养和再次培养7d后,将原培养瓶中培养基、未贴壁组织和冲洗生理盐水离心后分别进行再次培养和第3次培养.用倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8测定细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面标记,成脂、成骨诱导分化试剂盒鉴定细胞的分化潜能.结果 获得的hpcMSCs均为成纤维细胞样贴壁细胞,每例胎盘获得(25.54±3.38)×106个P0代细胞,初次培养、再次培养和第3次培养获得的细胞数分别为(11.73±2.09)×106、(11.12±1.42)×106和(2.69±0.71)×106,培养时间分别为(12.00±0.64)d、(8.87±0.63)d和(12.33±0.80)d.再次培养时间和获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养的时间差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有时间延迟的趋势.3次培养的每培养瓶获得细胞数分别为(1.12±0.15)×106、(2.10±0.16)×106和(1.04±0.16)×106,再次培养获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养获得细胞数差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有细胞数量减少的趋势.3次培养的细胞生长曲线和表面标记的表达率无差异,成骨、成脂诱导分化检测均呈阳性.结论 一份绒毛膜标本,通过3次培养,获得的P0代hpcMSCs细胞数量比初次培养翻倍,本方法可为再生医学提供足够的种子细胞.     

尖锐湿疣患者宫颈高危型人乳头状瘤病毒分布

目的 分析广州市区尖锐湿疣(CA)患者宫颈高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染分布情况.方法 采用核酸扩增、快速导流杂交和低密度基因芯片分型检测HPV亚型.结果 249例CA患者宫颈标本HPV检出率100％,除1例仅HPV43阳性外,都可以检出HPV6或HPV11亚型;单1、2、3种和≥4种亚型感染分别为154例占61.85％,68例占27.31％,19例占7.63％和8例占3.21％,CA组合并感染高危亚型HPV者76例占30.52％,最常见合并的高危HPV亚型依次是HPV-52、16、59、18、33、39、58和68;2039例普通生殖道感染(RTI)患者宫颈标本中,单1、2、3种和≥4种亚型感染者,分别为484例占23.74％,114例占7.95％,34例占1.67％和14例占0.69％,与RTI组比较,CA组的HPV检出率较高,平均年龄较小,而且感染高危亚型的比例更高(P＜0.05).结论 CA患者应选择敏感的试验方法进行HPV分型,需注意潜在宫颈病变追踪.     

脐带血重建造血潜能的母体及新生儿因素分析

脐带血作为一种备选的移植用造血干细胞,能否成功植入与输入受者体内的总有核细胞（total nucleated cells,TNC）数、CD34＋细胞数及粒-巨噬细胞集落形成单位（colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM）有关。本研究探讨影响脐带血造血潜能的母体及新生儿因素。按照广州脐血库标准化操作常规（SOP）,对脐带血样本进行筛选、处理、检测及冷冻,回顾性分析已保存的4615份脐带血样本的造血细胞参数及其与母体及新生儿特征的相关性。结果表明：脐带血采集量（Mean±SD：95.23±22.42ml;Median：91.85ml）与处理前TNC[Mean±SD：（1.34±0.49）×109;Median：1.25×109]及处理后TNC[Mean±SD：（1.21±0.42）×109;Median：1.14×109]、CD34＋细胞数[Mean±SD：（5.14±4.55）×106;Median：4.08×106]、CFU-GM[Mean±SD：（9.72±8.66）×105;Median：7.53×105]三者均显著相关（p〈0.001）。在供者因素中,只有婴儿出生体重与脐带血采集量及造血细胞参数均呈显著正相关（p〈0.001）,较大婴儿的脐带血在采集量、TNC、CD34＋细胞数及CFU-GM方面均呈现优势（p〈0.001）。母亲年龄与上述各项参数均无显著相关。孕龄与处理前/后TNC正相关（p〈0.001;p〈0.001）,与CD34＋细胞数呈负相关（p=0.04）,而与采集量及CFU-GM均无显著相关。剖宫产时采集的脐带血量虽然高于阴道分娩（Mean±SD：97.05ml±22.23mlvs.92.53ml±22.43ml;Median：94.08mlvs.88.82ml;p〈0.001）,但各细胞参数均低于阴道分娩（p〈0.001）。男婴脐带血的采集量和CD34＋细胞数高于女婴（Mean±SD：96.41ml±22.31mlvs.93.95ml±22.47ml;Median：93.27mlvs.90.14ml;p〈0.001）;[Mean±SD：（5.28±5.04）×106vs.（5.00±3.94）×106;Median：4.18×106vs.3.94×106;p=0.042]、但处理前TNC及处理后TNC均低于女婴[Mean±SD：（1.31±0.50）×109vs.（1.37±0.47）×109;Median：1.22×109vs.1.28×109;p〈0.001];[Mean±SD：（1.18±0.42）×109vs.（1.24±0.41）×109;Median：1.10×109vs.1.17×109;p〈0.001],二者CFU-GM的差异无统计学意义。结论：本研究数据有助于优化脐带血供者筛选及提高脐血库资源利用率。脐血库应侧重选择体重较大、阴道分娩的新生儿供者,优先处理采集量大、TNC高的脐带血样本。     

541例妇女人乳头状瘤病毒多重感染检测结果分析

目的:了解广州市妇女生殖道人乳头状瘤病毒多重感染状况和基因亚型分布.方法:采用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术(HybriMax)对广州地区6 936例女性进行人乳头状瘤病毒多重感染检测,并对HPVDNA亚型、多重感染率和年龄分布进行分析.结果:6936例女性共检出HPV多重感染患者541例,多重阳性率为7.80%.高危混合型、高低危混合型和低危混合型分别是55.45%、41.59%、2.96%.多重阳性感染者中,双重感染最多,为399例,占73.75%.21个亚型中共有20个亚型被检出.在各年龄组中,≤20岁女性多重阳性感染率最高,为22.73%,各年龄组HPv感染差异有统计学意义(x2=65.136,P=0.000<0.05).结论:广州地区女性HPV的多重感染率较低,但以高危混合型为主;用HybriMax法对HPVDNA进行多重感染的检测和分型,对宫颈病变的防治具有重要意义.     

探讨CD34+CD44+细胞输入量对无关脐血移植后造血恢复的影响

目的　研究用无关脐血移植治疗儿童急性白血病时 ,CD3 4 CD44 细胞输入量对中性粒细胞和血小板恢复时间的影响。方法　用流式细胞术分析复苏后的CD3 4 CD44 细胞数 ,并对 18例儿童急性白血病患者在无关脐血移植后的中性粒细胞和血小板恢复时间等进行测定。结果　 18例患者中 ,CD3 4 CD44 细胞输入量为 (5.90～ 2 97.0 2 )× 10 4 /kg(中位数 54.11× 10 4 /kg)。移植后中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L的时间为 11～ 2 3d(中位数为 17.5d) ,血小板 >2 0× 10 9/L的时间为 12～ 118d(中位数 41d)。中性粒细胞恢复时间与CD3 4 CD44 细胞输入量存在相关性 ,γ值为 -0 .657,P <0 .0 1;血小板恢复时间与CD3 4 CD44 细胞输入量也有相关性 ,γ值为 -0 .490 ,P <0 .0 5。结论　CD3 4 CD44 细胞输入量与无关脐血移植后的造血重建有关     

应用荧光原位杂交快速产前诊断唐氏综合征

目的建立稳定的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术并用于唐氏综合征的产前诊断.方法对126例孕17w～24w未培养羊水细胞进行FISH快速产前诊断,以培养羊水细胞常规G显带核型分析作为FISH检测结果对照.结果被检126例羊水未培养细胞均获得诊断结果,发现4例异常胎儿.3例为标准型唐氏综合征;另1例为嵌合体.FISH检测与常规核型分析结果一致.结论FISH用于唐氏综合征产前诊断具有快速、简便、所用样本量少的优势,结果准确可靠,可达到产前诊断要求,有较大临床应用价值.