赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析

目的：对问号赖型钩端螺旋体（赖型钩体）DNA疫苗[包括内鞭毛蛋白基因（flaB2)和质粒DNA表达载体（VR1012）]的CpG基序（CpG motifs)进行分析，为DNA疫苗免疫机制的阐明和提高DNA疫苗的效能奠定基础。方法：以flaB2与VR1012构建重组DNA的免疫原，对flaB2及VR1012全核苷酸序列进行计算机分析（分类、计数和定位）。结果：CpG的“C”的侧翼为两个嘌呤，“G”的侧翼为两个嘧啶，在flaB2中共3个，分别为GACGCT，GACGTC和GACGCC；在VR1012中共11个，分别为GACGTC1个，GACGCT2个，GACGCC1个，GACGTT1个，GGCGTT2个，GGCGCT2个，GGCGCC1个，AACGCT1个，其中特别重要的TGACGTCA4个和TAACGCCA有1个，位于5'端456－463；509－516；592－599；778－785和486－493；4个TGACGTCA和1个TAACGCCA均位于5'端且相对集中。结论：赖型钩体flaB2与VR1012构成的DNA疫苗含有TGACGTCA等CpG，这些基序又称免疫刺激序列，构成了DNA疫苗中的佐剂。     

钩端螺旋体核糖体提取物免疫保护作用的研究

作者对核糖体现有的制备方法进行了部分改进,从黄疸出血群赖型017株钩体中成功地制备了核糖体提取物。该提取物经SPA-ELISA 证实具有免疫原性,对40只受试豚鼠的保护试验结果表明,核糖体提取物对同型毒株的攻击具有明显的保护作用;结果还证明核糖体提取物能诱导机体的体液免疫反应。     

赖型钩端螺旋体重组DNApCX7的特异性鉴定和限制性内切酶谱分析

本实验将赖型钩端螺旋体（简称钩体）ＤＮＡ基因库的克隆ｐＣＸ７制备成￣（３２）Ｐ－重组ＤＮＡ探针，对８个不同血清群的１７株问号状钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃⅠ株以及细螺旋体３０５５株ＤＮＡ进行打点杂交；同时用１５种ＤＮＡ片断进行限制性内切酶谱分析。结果表明，该重组ＤＮＡ具有问号状钩体种（Ｓｐｅｃｉｅｓ）特异性，但与不同问号状钩体之间的同源性程度有差别；限制性内切酶谱分析发现ｐＣＸ７重组ＤＮＡ片段长约１．７ｋｂ，具有１个Ｂｇ１Ⅱ识别位点和３个ＢｓｔＢ１识别位点。     

钩端螺旋体染色新方法及其临床应用

钩端螺旋体具有十分典型的形态结构,其轴丝的化学成份和功能均与细菌鞭毛相似,利用这些特点筛选出了改进的Blenden法及复红美兰鞭毛染色法进行染色,结果表明改进的 Blenden法,增加了热染处理,对钩体的染色较Blenden原法为佳,其阳性率可达92.0％,其形态具有典型的L.S,C形钩体,而复红美兰染色法,方法简便,试剂配制后可以长期保存,     

对钩端螺旋体病黄疸发生机制的一种新认识

钩端螺旋体病黄疸时血清胆红素以结合型的为主(50—80%),其含量在黄疸、非黄疸及对照组间有高度显著性差异(P<0.01)。而SGPT在三组间的差异无显著性(P>0.05)。黄疸组肝细胞膜Na,K-ATP酶活性无显著性(P>0.05)下降。结合型高胆红素血症出现时,与形态结构的改变相应,肝细胞紧密连接对硝酸镧通透,即其通透性增大。由此导致的胆汁渗漏反流及胆汁生成障碍在钩端螺旋体病黄疸的发生中起着重要作用。而微胆管的病变可加剧该病理过程。     

钩端螺旋体基因组大小的初步研究

作者采用脉冲场凝胶电泳技术,对不同属、群(型)的5株钩端螺旋体基因组DNA分子量进行了研究,并用限制性内切酶Not I对基因组DNA进行分析。结果表明:钩端螺旋体基因组大小为2000kb;各株钩体基因组大小无明显差异;限制性内切酶Not I可将钩体基因组消化为11个大片段;钩体基因组DNA被Not I消化后电泳图谱与细菌基因组DNA图谱有很大差异。     

应用胶体金技术对钩体抗原超微定位的研究

作者应用胶体金技术和单克隆抗体1A7E7和2F9D4成功地对钩体抗原进行了超微定位的研究,发现胶全金颗粒主要分布于钩体外膜部位,提示1A7E7和2F9D4所识别的抗原位于钩体外膜,为研究钩体抗原的超微定位提供了可行的方法。     

钩端螺旋体16SrRNA逆转录聚合酶链反应

用ＳｉＯ＿２－高盐吸附法提取钩体ＲＮＡ，以问号状钩体１６ＳｒＲＮＡ基因引物对问号状钩体ｌａｉ型Ｌａｉ株和双曲钩体ｐａｔｏｃ型ＰａｔｏｃⅠ株的ＲＮＡ进行逆转录聚合酶链反应扩增。结果表明，采用本法对ＲＮＡ和ＤＮＡ同时检测时，在琼脂糖凝胶电泳中，可使肉眼检测水平提高约１００倍。     

赖型钩端螺旋体基因文库的构建及重组质粒pDC38的初步研究

应用质粒载体ｐＵＣ１８购建了黄疸出血群赖型钧体的基因文库，重组率８６％，重组子约１２０００个。以ＯｍｐＬ１基因片断作探针从该基因文库中筛出１０个阳性克隆，其中重组质粒ｐＤＣ３８与７型８株致病钩体（黄疸出血群赖型、大型、致热型、秋季型、澳大利亚型、波摩那型、流感伤寒群临海型）ＤＮＡ杂交有杂交信号；与非致病的双曲钩体、细丝体，大肠杆菌和２型问号钩体（爪哇型、拜伦型）ＤＮＡ无杂交信号。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体的调理吞噬活性的检测

作者用人体单层中性粒细胞技术,体外检测了抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体(A_4和D_4)的调理吞噬活性,证明BALB/c小鼠 B细胞杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可显著增强人体中性粒细胞对同型绿脓杆菌的吞噬。