实时荧光定量RT-PCR监测恒河猴体内人/猴免疫缺陷病毒载量在传代过程中的变化

目的为分析中国SHIV/猕猴AIDS模型的病毒载量变化趋势,建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒的定量检测方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqManEZRT-PCR试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的TaqMan探针和引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。提取126份来自SHIV-CN97001感染恒河猴血浆病毒RNA并定量检测。结果利用梯度稀释的RNA标准品对反应体系进行优化,标准曲线下限达到2×102拷贝/ml,相关性(r>0.99)及重复性(CV=4.14%)均能达到测定要求。病毒载量的检测结果表明SHIV-CN97001在猴体内传代过程中病毒载量有先升后降的趋势,病毒载量通常在接种病毒或感染猴的全血后第14天达到高峰。血浆载量可达到105~106拷贝/ml。结论成功地建立了一步法定量SHIVRNA的实时荧光定量RT-PCR,为SHIV/恒河猴AIDS模型的建立与应用提供了灵敏的病毒载量检测方法。SHIV-CN97001的体内繁殖能力在猴体内传代过程中有所增强。     

泡沫病毒的研究进展

泡沫病毒(Foamy Viruses,FV),属逆转录病毒科(Retrovidae),泡沫病毒亚科(spumavirinae)^[1]。逆转录病毒的另两个成员：肿瘤病毒亚科(Oncovirinae)、慢病毒亚科(Lentivirinae),是人类及各种动物疾病的病原,始终为人们所关注及重视。泡沫病毒在自然界也广泛存在,有着较广泛的宿主范围．可从多种哺乳类动物中分离出来,包括人类、非人灵长类、牛、猫、狗、仓鼠、海狮等。     

滇西亚种树鼩微卫星分子标记的筛选

目的 筛选出适用于滇西亚种树鼩种群遗传质量控制的特异性微卫星分子标记。方法 首先从树鼩全基因组序列中筛选出约700个微卫星位点, 择优选出约100个位点设计引物, 去除有不良因素的, 最后保留33对和文献报道的13对引物对滇西亚种树鼩DNA进行 PCR扩增, 根据琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳结果筛选保留, 进行STR扫描再次筛选适于树鼩遗传检测的微卫星位点组合。结果 筛选出树鼩微卫星位点22个, STR基因扫描有明显Stutter峰。比较备选位点和最终筛选出的位点, 普通树鼩位点中选取5个, 2个可用, 与滇西亚种的重合率是40%;印度小树鼩位点中选取5个, 2个可用, 重合率是40%;中缅树鼩的位点中选取3个, 2个可用, 重合率约70%。结论 筛选出的22个微卫星位点适用于滇西亚种树鼩的遗传检测, 为树鼩种群的遗传质量监测提供科学依据。     

树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

目的 对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定。方法 取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发育进化树。结果 形态学观察表明树鼩体内的鞭毛虫为三毛滴虫;测序分析表明树鼩鞭毛虫序列18S rRNA与已报道的胎儿三毛滴虫18S rRNA(AY754332.1)同源性高达99%。结论 树鼩体内可感染胎儿三毛滴虫,研究结果为树鼩的寄生虫学质量控制提供依据。     

血管新生调节因子VEGF及其受体在恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘中的表达

目的:研究血管新生调节因子VEGF及其受体Flt-1、KDR在恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘组织中的表达。方法:用免疫组化方法检测妊娠30天的恒河猴上述蛋白在胎盘中的表达。结果:VEGF蛋白主要表达于胎盘绒毛和子宫内膜,在母胎界面和子宫内膜血管中显著高表达;KDR蛋白的表达模式与VEGF类似;Flt-1蛋白在两组胎盘中的表达无显著差异。VEGF和KDR在药物流产胎盘中的表达量明显低于正常妊娠胎盘。结论:VEGF、Flt-1及KDR在恒河猴妊娠早期参与子宫内膜和胎盘发育过程中的血管新生,在胎盘绒毛的浸润以及腺上皮细胞分化及其分泌等过程中也发挥着重要作用;流产药物可能通过下调VEGF和KDR蛋白的表达,影响了血管发生和胎盘发育,增加了流产机会。     

猕猴结核分枝杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立猕猴结核分枝杆菌PCR快速检测方法。方法根据GenBank中报道的人型结核分枝杆菌标准株H37RV全基因序列，针对其中致病性结核分枝杆菌所特有的保守区域ESAT-6设计一对引物进行TouchdownPCR反应，利用此方法对100份野生来源猕猴全血标本进行检测，并与传统的PPD实验和咽拭子抗酸染色实验结果作比对。结果抽取33份野生来源猕猴的外周血，提取DNA进行扩增，扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比，与GenBank中报道的序列基本相同，检测标本中有4份（4／33）为阳性，其中3份（3／33）标本与结核菌素试验和咽拭子抗酸染色试验结果相符合。结论建立了从猴全血中直接检测猴结核分枝杆菌DNA的TouchdownPCR方法，具有敏感性和特异性高，且简便的优点。     

研究生医学实验动物学教学的实践与思考

医学实验动物学是一门新兴的学科，该课程注重理论与实践相结合，从而将教学延伸到研究生动物实验论文指导，并把课程教学工作与实验动物从业人员资格认可相衔接，丰富了实验动物从业人员资格认可的内容。     

促进人工饲养实验猕猴心理康乐

目的促进实验猕猴心理康乐，既能减少动物异常行为的发生、获得可靠的科学数据，同时也是实现这一珍贵非人灵长类实验动物福利的重要内容。实验猕猴社会化集群、环境优化、婴猴饲养方式是影响动物心理康乐几个较大的因素，本文对其研究进展进行了综述，对推进我国灵长类实验动物福利具有积极作用。     

人工繁育恒河猴婴猴生长发育指标的测定分析

目的建立人工繁殖恒河猴婴猴生长发育指标的标准数据库。方法随机对90只人工饲养繁殖的恒河猴(从100 d至1周岁)进行体重、身长、尾长、前肢长、后肢长发育指标测定。结果测定后的数据,经统计学分析和绘制生长曲线图,发现人工饲养条件下的恒河猴(1周岁前),其生长发育指标基本均匀一致,只有个别出现发育迟缓或发育不良现象。随时间推移,雄性生长速度要快于雌性。结论所建立的恒河猴婴猴正常生长发育生理指标,为提高人工饲养繁育恒河猴技术和不断改善恒河猴营养与发育健康提供了科学数据。     

从临床肺炎死亡树鼩中分离到致病性大肠埃希菌

目的对6例1月内因肺炎死亡的树鼩采样进行病原菌分离培养鉴定分析。方法解剖死亡树鼩,利用无菌刀片切开肺组织,用无菌接种环插入肺内采样接种于营养琼脂培养基,另取两份样品进行细菌涂片革兰氏染色和抗酸染色。培养出来的细菌进行进一步分离和菌落生长情况的观察,并经革兰氏染色、抗酸染色、氧化酶试验、生化编码鉴定和9种药敏试验,初步确定树鼩肺部感染的致病菌及其药敏情况。结果样本革兰氏染色见到大量阴性杆菌,抗酸染色结果显示为非结核分枝杆菌,大小约为0.2μm×2～6μm。营养琼脂培养6例样品中均仅见1株旺盛生长的细菌,进一步分离培养经革兰氏染色为阴性杆菌,抗酸染色为非结核分枝杆菌,大小和染色结果与样本涂片相同,经鉴定为致病性大肠埃希菌。药敏试验表明该菌对头孢哌酮,呋喃妥因,氨苄西林,阿米卡星,氧氟沙星,诺氟沙星,磺胺甲噁唑/甲氧苄定高度敏感;对庆大霉素和青霉素G为低度敏感。结论 6例树鼩死亡原因均为细菌性肺炎,病原菌初步鉴定为致病性大肠埃希菌。药敏实验筛选出的药物可为临床治疗树鼩该类病例用药提供指导。