三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血病K-562细胞凋亡的实验研究

目的阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测,观察HT对K562细胞株的作用方式,进一步用RT-PCR方法研究bcr/abl基因在转录水平的改变。结果0.01～100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。随着药物作用时间的延长,bcr/abl基因的转录下调。结论低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达,诱导K562细胞凋亡。     

人外周血、羊水及绒毛细胞染色体的研究和应用

我院妇产科自1979年建立细胞遗传实验室以来,开展了外周血、羊水及孕早期绒毛细胞染色体的研究和临床应用。到1988年10月底,共培养外周血890例次,羊水细胞225例次,绒毛细胞培养和直接压片制备染色体217例次,以及少量骨髓细胞的培养。除采用常规制片法外,还用G显带、C带和姐妹染色单体交换等技术进行临床病例的染色体研究和应用。为我科和我院兄弟科室解决了不少疑难病例的诊断问题,产前诊断问题及配合他人科研课题的协作工作,有力的支持了全院的医疗、科研和教学工作。     

大鼠壁细胞的黏膜刮取式分离方法

采用黏膜刮取式方法，分离大鼠胃黏膜细胞。用相差显微镜、HE染色、电镜、荧光显微镜、免疫细胞化学染色等方法，对壁细胞进行观察和鉴定，并测定了壁细胞直径。结果成功地分离了大鼠胃黏膜细胞，同时证实，壁细胞在所分离的细胞中直径最大。     

用荧光原位杂交技术快速诊断孕早期胚胎染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在快速产前诊断孕早期胚胎染色体数目异常中的价值.方法采用13,18,21,X和Y染色体特异性DNA探针,对46例孕47～65 d高危孕妇的绒毛间期细胞进行FISH检测,同时行常规染色体核型分析平行诊断.结果与染色体核型分析结果一致的染色体数目正常43例,异常3例(47,XY 21;47,XY 18和45,X).3例异常核型胚胎经治疗性流产后再分别对其绒毛行常规染色体核型分析,结果与产前诊断相符.结论FISH技术用于产前诊断孕早期胚胎染色体数目异常具有快速、准确等优点.     

间期荧光原位杂交检测核心结合因子相关急性白血病的初步研究

目的应用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)检测初诊急性白血病患者中核心结合因子(CBF)受累的染色体异常情况并对治疗后患者的微小残留病(MRD)进行监测,同时对I-FISH与常规染色体G显带的灵敏度进行比较。方法在骨髓形态学初筛的基础上,应用常规染色体G显带技术对15例急性髓系白血病(AML)进行核型分析,应用I-FISH对患者可能受累的CBF相关靶基因进行检测,其中7例患者治疗后进行了MRD监测。结果(1)正常对照组中,CYTOCELL公司提供的3种探针(AML1/ETO易位探针、MYH11基因断裂点双色探针和ETV6/AML1易位探针)的正常分界值分别为4.13%、1.95%和2.12%。(2)常规染色体G显带分析,15例患者中有6例伴有潜在累及CBF基因的染色体异常,其中8例AML-M2中5例伴t(8;21),2例AML-M4EO中1例伴inv(16),5例儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)未检出相应的异常。I-FISH检测15例患者发现有12例累及CBF基因,其中8例AML-M2患者均为AML1/ETO融合基因(+),2例AML-M4EO病人CBFβ/MYH11融合基因均为(+),5例儿童B-ALL中2例ETV6/AML融合基因(+)。(3)3例AML-M2患者中2例MRD阳性;2例M4E0患者治疗后MRD监测结果均阴性;2例B-ALL患者1例阴性,1例阳性。结论I-FISH较常规染色体G显带技术能够更灵敏地检测出累及CBF的急性白血病,在初诊时联合应用这两种     

荧光定量PCR对伊马替尼治疗后慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因变化的检测效果研究

目的 应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)患者应用伊马替尼治疗后bcr/abl融合基因的水平,并比较RQ-PCR与荧光原位杂交(FISH)在检测CML微小残留病方面的敏感度.方法 采用RQ-PCR技术检测初诊CML患者30例,以及应用伊马替尼治疗1年、2年的CML患者各8例,观察骨髓细胞中bcr/abl融合基因转录本的表达情况,并与荧光原位杂交(FISH)结果进行比较.结果 RQ-PCR检测bcr/abl融合基因的敏感性可达到10个拷贝.初诊CML患者bcr/abl融合基因水平为68.18%±26.67%,而经伊马替尼治疗1年、2年后的水平分别为0.16%±0.15%、0.04%±0.02%,与治疗前相比,分别下降了2.82和3.36个对数级.当FISH结果为阴性时,RQ-PCR的检测结果仍为阳性.结论 RQ-PCR检测bcr/abl融合基因的敏感性比FISH更高,对于监测伊马替尼治疗过程中分子水平的变化、提示病情发展具有重要的应用价值.     

双源CT冠状动脉成像的初步研究

目的初步探讨无需口服控制心率药物准备的双源CT冠状动脉成像的扫描技术和图像质量。方法对215例临床怀疑冠心病或冠状动脉早期病变患者进行无需口服控制心率药物准备的双源CT冠状动脉成像。扫描步骤包括平扫和增强扫描。用平扫图像行冠状动脉钙化积分，用增强扫描图像行多平面重组（MPR）、最大密度投影（MIP）及容积再现技术（VRT）重组。总结双源CT冠状动脉成像的扫描技术和后处理方法。将图像质量分为3级，按冠状动脉分段标准评价各个节段的图像质量。结果215例患者钙化积分值中位数为82．2（2．3～1827．9）。增强扫描平均心率为（80．6±15．3）（57～139）次／min，尽可能使冠状动脉良好显示的后处理方法有：（1）多个时相筛选法；（2）2个或多个时相补充法；（3）早搏去除法和心律不齐移位法。共评价3026个冠状动脉节段，其中图像质量为1级者占97．5％（2951／3026），2级者占2．0％（62／3026），为3级者占0．5％（13／3026）；图像质量为2级和3级的节段多由于呼吸伪影所致。215例患者共91例冠状动脉各节段均未见斑块或狭窄，共诊断〈50％冠状动脉狭窄节段112个，≥50％冠状动脉狭窄节段213个。结论双源CT冠状动脉成像在无需口服控制心率药物准备的情况下可获得非常好的冠状动脉各节段图像，心率不再是影响图像质量的关键因素，通过单时相或多时相重组可良好显示冠状动脉主干及分支。     

双色间期荧光原位杂交定量监测治疗中CML患者的肿瘤细胞负荷

目的　研究双色间期荧光原位杂交 (I-FISH)技术监测CML治疗过程中肿瘤细胞负荷的灵敏度及特异性。方法　应用I-FISH、常规细胞遗传学 (CCG)G显带技术和筑巢式逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR)技术对 2 0例治疗中CML患者骨髓中的肿瘤负荷进行检测。结果　对照组骨髓细胞假阳性率为 0 6 %～2 0 % ,分界值为 2 4 5 % ;2 0例患者经IFN -α治疗或骨髓移植后 9/18例(5 0 % )CCG检测到Ph( )细胞 ,阳性细胞率 16 7%～ 10 0 % ;结合正常分界值 ,16 /2 0例 (80 % )经I-FISH检测到BCR -ABL( )肿瘤细胞 ,阳性细胞率 2 8%～ 99 6 %。 16例患者行RT -PCR检查 ,13/16例 (81 3% )融合基因转录本阳性。结论　I -FISH技术可高度灵敏、特异地监测CML患者治疗过程中肿瘤细胞负荷的变化 ,与CCG及RT -PCR相比 ,检测所得结论更加科学、合理和具有说服力。     

用荧光原位杂交技术检测流产绒毛染色体非整倍体畸变

目的　探讨流产病因及评估荧光原位杂交 (FISH)技术在检测流产绒毛染色体非整倍体畸变中的价值。方法　采用18、X和Y染色体着丝粒探针及 13、2 1染色体单一序列探针 ,对 5 8例自然流产绒毛标本同时进行FISH检测和常规染色体核型分析。结果　FISH技术异常核型检出率 2 4 1± 0 12 % ,高于常规染色体核型分析 (15 5 % ) ;常规染色体核型分析检出 2例FISH探针计划检测外的异常核型 4 6 ,XX ,del(2 ) (q2 1)和 4 7,XX , 16。结论　FISH技术能快速、准确地诊断流产绒毛染色体非整倍体畸变 ,与常规染色体核型分析结合运用 ,可为临床流产病因的探讨提供更为准确的依据     

男性抗精子抗体对体外受精一胚胎移植的影响

目的;评价男性抗精子抗体对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法:以ELISA方法测定施行IVF-ET的150对不育夫妇中男方精浆抗精子抗体(AsAb)并分组:AsAb阳性组22例,AsAb阴性组128例。对比分析抗精子抗体及抗体类型对体外受精、卵裂和早期胚胎发育的影响,同时对移植后的妊娠率和流产率进行分析。结果:AsAb阳性组体外受精数明显低于AsAb阴性组(P<0.01),两组的卵裂数则无明显差异(P>0.05),而在阳性组中,不同抗体类型间体外受精、卵裂及胚胎质量无明显差异(P>0.05)。在移植日,AsAb阳性组的I级胚胎较阴性组低,而ⅢⅣ级胚胎和2原核受精细胞(2PN)明显增加(P<0.01)。两组移植后临床妊娠流产率无显著差异(P>0.05)。结论:AsAb能明显降低精子体外受精能力,对早期胚胎发育有损害。精子体处理不能完全清除AsAb对IVF影响。