帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备

目的 利用分子克隆接术在愿核细胞中表达α-共核蛋白（SNCP），并制备免多克隆抗体。方法 从人神母经细胞SH-SY5Y细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列，测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上，在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔，制备特异性抗血清，并对该抗体进行检测。结果 琼脂糖凝胶电泳显示获得SNCP cD-NA序列为420bp。SDS-PAGE和Western blot分析，表达的融合蛋白呈可溶性，相对分子质量约为45000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1：32000，并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论 人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清，为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。     

示波极谱连续测定人发中微量铁、铜

在1.5%KOH—1.5% 乙二胺—0.5%三乙醇胺混合底液中,利用JP—1A型示波极谱仪连续测定人发中微量铜、铁的极谱特征,了解人发中铁、铜的含量,铁在0.5～20μg.10~(-1)、铜在0.5～100μg.10ml~-范围呈线性关系,精密度、准确度良好,结果满意.     

40岁以上高龄妊娠与分娩结局分析(附56例临床报告)

目的 探讨40岁以上妊娠妇女对分娩的影响.方法 回顾性分析1995年12月～2005年12月分娩的40岁以上孕妇56例及同期妊娠的18～34岁孕妇100例,后者为对照组.结果 高龄组不孕史、习惯性流产和子宫肌瘤发生率高于对照组(P＜0.01或P＜0.0 5);高龄组剖宫产率(78.6%)比对照组(38%)高(P＜0.01).但两组的新生儿出生体重、新生儿窒息、新生儿畸形和围生儿死亡率则没有明显差异(P＞0.05).结论 40岁以上妇女妊娠的并发症及剖宫产率增高,但只要重视和加强管理,积极预防和治疗合并症,母儿预后较好.     

一种朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立

目的建立一种类似于PCR的蛋白质扩增方法-蛋白错误折叠循环扩增技术(PMCA),用于朊病毒病脑组织中PrPSc的检测。方法将不同浓度的羊瘙痒因子263K毒株原液与正常仓鼠脑组织匀浆混合,经反复孵育/超声,共10~15个循环。WesternBlot检测扩增产物中蛋白酶K抗性PrPSc信号。结果在本研究试验体系下,263K毒株可以利用仓鼠脑组织为基质在体外迅速复制。所建立的PrPSc-PMCA技术可检测到10-5稀释的毒株原液中的PrPSc。与常规的脑组织免疫印记方法相比,敏感度提高了105~106倍。研究还显示PrPSc还可利用小脑和脑干为基质进行体外扩增复制。结论成功建立了PrPSc-PMCA技术,为朊病毒病的早期诊断和朊病毒生物学特性的研究提供了一种新的手段。     

不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究

目的 研究不同剂量羊瘙痒因子263 K经颅内注射感染仓鼠后,在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关.方法 以胶质纤维酸性蛋白(glial fibrill aryacidic protein,GFAP)作为星形胶质细胞增生的分子标志物,采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达,经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异.结果与正常对照相比,不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高,但各感染剂量组间无显著差异.结论 不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似,与感染剂量及潜伏期无关联性.     

氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立氯霉素乙酰基转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-2T中，在大肠埃希菌DH5α中诱导表达；以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔，得到的CAT抗血清进行生物素标记，并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法，构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒，体外瞬时转染真核细胞，提取胞质蛋白，以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54000；制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白；在不同启动子及调节序列的控制下，利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2-8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性，以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响，使CAT作为报道基因的研究更为简单化。     

超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrP^Sc聚集状态的影响，寻找产生PrP^Sc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物，用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物；以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测PrP^Sc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理(15s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrP^Sc含量1．29～1．58倍；同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量，而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大；对经常规高速离心获得的PrP^Sc的超声处理显示约90％的PrP^Sc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrP^Sc的提取量，利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrP^Sc聚集物，产生小的相对分子质量的PrP^Sc产物。     

抗癌平丸质量标准研究

目的:制定抗癌平丸的质量标准.方法:采用HPLC法测定异嗪皮啶的含量,并鉴别抗癌平丸中的脂蟾毒配基.结果:HPLC法能准确鉴别出抗癌平丸中的脂蟾毒配基.测得异嗪皮啶的线性范围为0.203 6 μg～2.036 μg;含量为0.389 9～0.409 8 mg·g-1;平均回收率为97.93%,RSD为2.2%(n=5).结论:本方法准确、简单、专属性强,能有效地控制抗癌平丸的质量.     

RP-HPLC法测定肺心片中原儿茶醛的含量

肺心片系由丹参、玉竹、虎杖、补骨脂、淫羊藿等 12味中药制成的复方制剂 ,用于治疗慢性肺源性心脏病缓解期及阻塞性肺气肿。丹参是其主药 ,原儿茶醛为有效成分之一。为提高该制剂的质量标准水平 ,本研究建立了用RP HPLC法测定原儿茶醛含量的方法。1　仪器与试药安捷伦 110 0系列液相色谱仪 (G1312A双泵 ,G1313A自动序列进样仪 ,G1316A柱温箱 ,G1315B二级管阵列检测器 ) ;惠普化学工作站 ;安捷伦 110 0系列高效液相色谱仪 (G1310A单泵 ,G1314A可变波长检测器 ) ;TC 10 0柱温箱。原儿茶醛对照品由中国药品生物制品检定所提供 ;肺心片…     

核转录因子-B(p65)在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中变化的研究

目的 研究NF-B（p65）在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中的变化。方法 通过蛋白质免疫印迹法及免疫组织化学的方法检测p65在139A感染的脑组织均浆中的含量变化。利用免疫荧光方法检测p65在神经元及胶质细胞中的分布情况。结果 在139A感染终末期小鼠脑组织均浆中，p65含量下降，差异有统计学意义。对感染不同时间点的动态分析结果显示，p65含量呈先升高随后逐渐降低趋势。免疫组织化学显示，139A感染终末期小鼠大脑皮层p65含量明显下降。免疫组织荧光显示在正常和139A感染终末期小鼠脑组织中，p65与神经元细胞存在共定位现象。结论 NF-B（p65）在小鼠中枢神经系统中主要分布于神经元细胞，在139A感染的小鼠终末期脑组织中，p65总量明显下降，提示在139A感染的小鼠脑组织中，NF-B（p65）出现了变化，在疾病进程中发挥一定作用。