精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的初步研究

目的探讨精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的可行性。方法正常精液标本上游处理后,进行常规冷冻和冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻,复苏后分别从活力参数及电镜下超微结构等指标比较两种冷冻方法的效果。结果两种方法冷冻后精子存活率、活动率之间差异无显著性(48%∶48%;44.5%∶43.5%,P>0.05),但均较未冷冻的89%和88.5%明显下降(P<0.001)。超微结构亦较未冷冻时发生了一定的改变,但核结构基本保持完整。结论精子冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻是一种简单、方便而行之有效的冷冻方法。     

经皮附睾穿刺取精精子冷冻复苏后卵细胞胞质内单精子注射治疗无精子症的初步研究

目的:回顾性分析27例无精子症患者经皮附睾穿刺取精术(PESA)所获精子冷冻复苏后行卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)治疗后的效果及妊娠结局。方法:将诊断性附睾穿刺以及PESA治疗周期ICSI后所剩余活精子以常规方法加以冷冻,将复苏后找到了足量活精子并行ICSI的病例归为冻精组,而采用新鲜PESA活精子ICSI的病例则归为对照组。比较冻精组与对照组的受精率、种植率、临床妊娠率,同时分析两组间的妊娠并发症、新生儿出生及畸形等情况。结果:冻精组15个周期、对照组100个周期分别注射MⅡ期成熟卵子163、1 157个,受精率冻精组显著高于对照组(84.05%vs73.29%,P<0.05),种植率、临床妊娠率则两组间差异无显著性(23.07%vs15.73%;53.33%vs37.00%,P>0.05),新生儿出生体重差异亦无显著性(P>0.05)。冻精组共妊娠8例,已分娩5例,继续妊娠3例。对照组妊娠37例,已分娩30例,1例死胎;继续妊娠3例;流产4例。两组均未出现重大的妊娠并发症及新生儿畸形。结论:采用PESA冷冻精子ICSI是治疗男性无精子症的一种经济、有效、安全的方法;但PESA冻精复苏率有待于进一步提高。     

表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究

为观察表皮生长因子受体单克隆抗体 (EGFR Mc Ab) egf/ r3对肺癌的治疗作用 ,采用 MTT法进行体外细胞增殖抑制实验 ,裸鼠体内移植瘤采用同时治疗 (T1组 )与延后治疗 (T2组 )两种方案 .结果 egf/ r3Mc Ab对高表达 EGFR的 SPC- A1和 A5 49肺癌细胞体外均具有增殖抑制作用 ,并呈剂量依赖性 :以 SPC- A1进行裸鼠皮下移植做体内实验 ,至治疗结束 ,T1组 5 0 %成瘤(3/ 6 ) ,对照组 10 0 %成瘤 (6 / 6 ) ;至实验结束 ,T1组与 T2组瘤体抑制率分别为 75 %与 6 7% ,瘤重抑制率分别为 6 5 %与 47% .病理切片显示治疗组肿瘤组织局部坏死 ,电…     

大鼠急性肺栓塞后hnRNP-E1的表达及胶原代谢的变化

目的 研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1, hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响.方法 建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21 d开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常大鼠为对照组,采取半定量RT-PCR的方法研究hnRNP-E1在mRNA水平表达的变化;采用Western blot方法进一步验证hnRNP-E1在蛋白水平表达的变化.采用Northern blot法分析大鼠肺组织中Collagen α1(Ⅰ)(COL1A1)和Collagen α1(Ⅲ)(COL3A1)在肺栓塞后mRNA水平的表达变化;采用羟脯氨酸(HYP)和Masson染色观察急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积状况.结果 在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,hnRNP-E1的mRNA水平和蛋白水平的表达均有显著升高.大鼠急性肺栓塞后肺组织中COL1A1的mRNA表达水平有明显升高,但是COL3A1的mRNA表达水平无显著变化.HYP分析和Masson染色均显示急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积明显增加.结论 大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-E1的表达升高,可能促进了COL1A1的蛋白表达和胶原在肺部的沉积.     

针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用

目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响. 方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2/neu的mRNA表达,Western blot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长. 结果:肺腺癌细胞系SPC-A-1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPER-siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P＜0.05). 结论:成功构建了HER2/neu RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.     

siRNA抑制HER2/neu过表达肺腺癌细胞生长和增殖

背景与目的：30％NSCLC存在HER2／neu过表达，与肿瘤发生、转移、肿瘤血管形成、抗凋亡及化疗耐药等有关。本文通过RNA干涉抑制肺腺癌细胞SPC—A-1 HER2／neu过表达，观察肿瘤细胞周期、增殖及集落形成能力的变化。方法：构建针对HER2／neu的siRNA重组质粒，稳定转染SPC—A-1，通过RT—PCR和Western Blot检测HER2／neu表达；FCM分析细胞周期；MTT法观察细胞增殖，绘制细胞生长曲线；平板集落形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力。结果：成功构建了HER2／neu的siRNA重组质粒，稳定转染靶细胞后可显著降低HER2／neu表达；与亲代细胞相比，G0／G1期细胞增加17．1％，S期细胞减少12．8％；细胞生长速度减慢，集落S1抑制率达到49．0％。结论：针对HER2／neu的siRNA可以显著降低肺腺癌细胞过表达HER2／neu，肿瘤细胞阻滞于G0／G1期，造成细胞增殖减慢，集落形成能力明显下降。因此，siRNA对过表达HER2／neu肺癌的治疗具有潜在应用价值。     

胚胎培养液中可溶性人类白细胞分化抗原G与胚胎发育

目的了解胚胎培养液中可溶性人类白细胞分化抗原-G(sHLA-G)与胚胎发育及妊娠率、种植率的关系。方法对2006年2月至5月在华中科技大学同济医学院附属同济医院行第一周期体外受精胚胎移植的不孕症患者,采用双抗体夹心ELISA,检测采卵后第3天移植的胚胎培养液中sHLA-G的表达。结果体外受精和卵母细胞单精子注射患者共139例,移植胚胎289枚。sHLA-G阳性组与阴性组的妊娠率为68.6%、10.1%,着床率分别为39.6%、6.2%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。双原核一级、二级和三级胚胎的sHLA-G阳性率分别为41.9%、44.1%、7.5%,一级、二级胚胎sHLA-G阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05),一级、二级与三级胚胎差异有统计学意义(P<0.05)。双原核4～6、7、8、9～12细胞胚胎sHLA-G阳性表达率分别为35.1%、41.0%、43.9%、36.4%,不同细胞数的胚胎sHLA-G的表达差异无统计学意义(P>0.05)。双原核和三原核受精卵发育的一级胚胎sHLA-G阳性表达率分别为43.1%、20.5%,两者差异有显著性意义(P<0.05)。双原核受精卵发育的囊胚培养液中sHLA-G阳性表达率为83.8%。结论第3天移植的胚胎培养液中sHLA-G的表达与胚胎发育有关,与妊娠率和着床率呈正相关。     

第3天移植的胚胎培养液sHLA-G表达与妊娠率和种植率的关系

目的:通过对第3天移植的胚胎培养液sHLA-G的定性分析,了解其与妊娠率和种植率的关系。方法:采用双抗体夹心ELISA,检测胚胎培养液sHLA-G的表达情况。结果:IVF组,98例,移植胚胎204个。A组(sHLA-G阳性):妊娠率67.3%(35/52),着床率38.9%(42/108);B组(sHLA-G阴性):妊娠率8.7%(4/46),着床率6.2%(6/96)。两者比较,有统计学差异(P<0.0001)。其中A组中又分3组,~30岁,妊娠率70.8%(17/24),着床率41.7%(20/48);30~35岁,妊娠率63.6%(14/22),着床率34%(16/47);35~38岁,妊娠率66.7%(4/6),着床率46.2%(6/13),3组比较,无统计学差异(P>0.05)。ICSI组:41例,移植胚胎85个。A组:妊娠率72.2%(13/18),着床率41.7%(15/36);B组:妊娠率13%(3/23),着床率6.1%(3/49),两者比较,有统计学差异(P<0.0001)。结论:第3天移植的胚胎培养液中sHLA-G的表达与妊娠率和着床率正相关。     

物理诊断学教学的体会

诊断学是基础医学与临床医学之间的一门桥梁课,是学习临床医学课程的基础.结合实际工作,从加强教员岗前培训、丰富教学方法、加强学生技能训练及临床思维的培养等几方面入手,系统阐述了如何提高物理诊断学的教学质量.     

卵裂期胚胎中的凋亡征象及其与胚胎形态的关系

目的 评估体外授精的人卵裂期胚胎中是否存在凋亡,探讨卵裂期胚胎的凋亡征象与胚胎形态之间的关系.方法 结合末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)原位检测DNA凋亡和测定Caspase 3的表达水平,检测人卵裂期胚胎中的凋亡.并分析卵裂期胚胎中胞质碎片占胚胎总体积的比例和发育速度与TUNEL阳性率和Caspase 3的表达强度之间的关系.结果 碎片比>20%组胚胎的凋亡率明显高于碎片比≤20%的胚胎(P<0.01),Caspase 3平均荧光强度在碎片比>50%组明显升高(P<0.05).发育正常、迟缓和停滞胚胎之间胚胎凋亡率差异无显著性意义.发育停滞组的Caspase 3平均荧光强度高于发育正常和迟缓组(P<0.05).结论 人体外授精的卵裂期胚胎中存在凋亡征象,凋亡主要与胞质碎片有关,胚胎发育停滞可能是胚胎凋亡的早期表现.