胃腺癌伴淋巴结转移的蛋白质组学分析

目的筛选出参与胃腺癌淋巴结转移过程的相关蛋白。方法标本来源:2例中分化腺癌,淋巴结未侵及;1例低分化腺癌,1例低分化腺癌局灶伴印戒细胞癌分化,胃小弯侧淋巴结可见癌转移。裂解液、超声破碎法提取胃腺癌组织总蛋白,经双向电泳后获得胃腺癌组织蛋白质图像,运用PDQuest软件进行图像分析,找到胃腺癌伴淋巴结转移和胃腺癌不伴淋巴结转移的差异蛋白质。应用四级杆飞行时间电喷雾串联质谱(Q-TOF)鉴定差异表达的蛋白质。最后用Mascot数据库进行检索。结果与胃腺癌不伴淋巴结转移相比,胃腺癌伴淋巴结转移中有2个蛋白质点高表达,质谱鉴定结果为胃蛋白酶A(pepsin A)、巨噬细胞加帽蛋白(macrophage-capping protein);在胃腺癌不伴淋巴结转移中有1个蛋白质点高表达,质谱鉴定结果为免疫球蛋白κ链恒定区(Igκchain C region)。结论巨噬细胞加帽蛋白在伴淋巴结转移胃腺癌组织中高表达,推测其可能在胃腺癌淋巴结转移发生中发挥着一定作用。     

表面不同修饰的两种多壁碳纳米管引起RAW264.7细胞蛋白质差异表达

目的：比较表面不同修饰的两种多壁碳纳米管［经酸化处理的多壁碳纳米管（acid-treated multi-walled carbon nanotubes, aci-MWNTs）和牛磺酸表面修饰的多壁碳纳米管（taurine-modified multi-walled carbon nanotubes, tau MWNTs）］ 引起小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞蛋白质表达的差异。方法：两种碳纳米管均以20 mg/L的剂量,24 h的时间染毒细胞,并设置空白对照组;运用尿素裂解、冰浴超声的方法破碎细胞,提取细胞全蛋白,运用二向凝胶电泳分离细胞全蛋白,寻找银染凝胶图像上表达差异蛋白点,对差异蛋白行质谱分析鉴定,在蛋白水平上探究两种MWNTs对细胞作用的机制。结果：两种碳纳米管处理的细胞,表达有显著差异的蛋白点共13个,功能包括凋亡相关、钙结合、细胞周期相关、DNA合成、蛋白质折叠和能量代谢等方面,并与本课题组前期研究观察到的MWNTs对细胞凋亡诱导及线粒体损伤等细胞毒性结果相吻合。结论：两种MWNTs均能引起RAW264.7细胞蛋白表达的变化,表面不同修饰的MWNTs作用有差异,高通量蛋白质组学方法有望用于碳纳米管生物学效应及毒性机制研究。     

电脉冲裸基因肌肉注射胰岛素样生长因子-1介导的小鼠肺纤维化病理观察

目的：观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)所致小鼠肺纤维化的病理变化。方法：应用电泳冲裸基因肌肉注射法，观察注射截短型IGF1后2，3，4及8周组小鼠肺组织病理学变化。结果：2周组小鼠肺间质充血水肿。3周组肺泡隔明显增厚，大量肺泡上皮细胞，巨噬细胞及成纤维细胞增生。4周组肺间质大量胶原沉积，肺纤维化样改变。8周组肺纤维化病变明显减轻，肺泡结构渐趋恢复。结论：IGF-1可直接导致肺纤维化发生。IGF-1介导的肺纤维化早期病变可以逆转。     

人重组趋化素样因子1在果蝇S2细胞中的表达和功能研究

目的 在果蝇S2细胞中表达人趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1),并对其分泌形式进行功能研究.方法 构建pMT/V5-His-CKLF1表达质粒,转染S2细胞,筛选并鉴定阳性细胞克隆,用兔抗人CKLF1多肽抗体对其培养上清进行Western blot检测,并分析其趋化活性和促C2C12细胞增殖活性.结果 RT-PCR证明CKLF1在S2细胞中高效转录;通过Western blot在细胞培养上清中可检测到表达的重组CKLF1蛋白;其对人外周血中性粒细胞和淋巴细胞有较弱的趋化活性,对C2C12细胞具有增殖促进作用.结论 在果蝇S2细胞中成功表达了人重组CKLF1,并证实其存在分泌形式且具有趋化活性和促C2C12细胞增殖活性.     

双向凝胶电泳-质谱技术行卵巢癌血浆标志物分析

目的 探索卵巢癌潜在的肿瘤标志物.方法 抽取2004年8月至2007年10月在北京大学第三医院就诊的卵巢浆液性乳头状囊腺癌20例血浆与对照组妇女20例血浆,去除血浆中的高丰度蛋白(白蛋白/IgG)后,采用离心超滤对两组血浆蛋白脱盐、浓缩;应用双向凝胶电泳-质谱技术(2-DE/MS)分离两组血浆样品,经图像分析软件对比两组间的差异蛋白后,通过液相色谱-质谱技术(LC-MS/MS)鉴定差异蛋白点,并与蛋白质数据库资料进行对比分析.结果 两组共发现11个差异蛋白点(两组间的蛋白表达强度升高或降低200%者定义为差异点),对其中4个分子质量较小的进行了鉴定,与蛋白质数据库对比后,发现为触珠蛋白、血红蛋白β亚基、载脂蛋白C-Ⅲ和甲状腺素运载蛋白.前两者在卵巢浆液性乳头状囊腺癌组血浆中表达上调,后两者表达下调.结论 触珠蛋白、血红蛋白β亚基、载脂蛋白C-Ⅲ、甲状腺素运载蛋白可能为卵巢癌潜在的肿瘤标志物,但尚需做深入研究.     

胰岛素样生长因子1的体内表达对BXSB小鼠发病影响的研究

目的 初步研究人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)对系统性红斑狼疮ＢＸＳＢ小鼠发病的影响。方法 用肌肉介导的电脉冲转基因技术,使得含有hIGF-1cDNA的重组真核表达质粒在小鼠体内表达,然后系统检测自身免疫相关性实验指标。结果 虽然hIGF-1促进雄性ＢＸＳＢ小鼠ＩgG类型抗ＤＮＡ抗体的产生,但是明显阻止其尿蛋白浓度的继续升高,抑制巨噬细胞分泌IL-1以及降低脾脏重量。结论 IGF-1具有减缓雄性BXSB小鼠狼疮性肾炎的作用。其作用机制之一可能与巨噬细胞分泌炎性介质的功能下降有关。     

人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化

目的：核凋亡诱导因子1（Nuclear apoptosis—inducing factorj，NAIF1）是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因，为了通过Polldown实验研究其结合蛋白，在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1（73-327）的截短体。方法：通过PCR方法扩增出NAIF1（73—327）cDNA，并插入pGEX—KG载体，实现插入基因的融合表达，对表达产物进行SDS—PAGE、Western blot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱（ESI—Q-TOF—MS／MS）检测分析。结果：DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX—KG—NAIF1（73-327），并在大肠杆菌中稳定表达，表达产物分子量约为53kD，与预期一致，表达量约占菌体总蛋白的22％，纯化蛋白经Western blot和二级质谱（MS／MS）分析证明表达蛋白为GST—NAIF1（73-327）融合蛋白。结论：获得了重纩GST—NAIF1（73-327）融合蛋白的高效表达，为下阶段NAIFl的结构与功能研究打下了基础。     

大鼠趋化素样因子1对主动脉平滑肌细胞的趋化作用和增殖促进作用

目的:探讨大鼠趋化素样因子1(rat chemokine-like factor 1,rCklf1)对大鼠主动脉平滑肌细胞(aorticsmooth muscle cells,ASMC)的趋化作用和促增殖作用.方法:将rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,收获培养上清液,分析rCklf1对大鼠ASMC的趋化作用.同时,用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)实验分析rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染细胞上清液以及rCklf1在细胞内瞬时超表达对ASMC增殖的影响.结果:rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染的293T细胞培养上清液对大鼠ASMC具有趋化作用,10倍稀释的转染上清液所趋化的细胞数是对照组的2.2倍,这种趋化作用可以被浓度为10μg/L的百日咳毒素(pertussis toxin, .PTX)抑制.同时,rCklf1对ASMC有促增殖作用,10倍稀释的rCklf1真核细胞表达质粒瞬时转染上清液和rCklf1在细胞内瞬时超表达均可以促进ASMC的增殖,光密度值分别为对照组的1.3和1.5倍.结论:rCklf1对大鼠ASMC具有促增殖作用和依赖于Gi蛋白偶联受体(Gi protein coupled receptor,GiPCR)的趋化作用,可能参与动脉粥样硬化的病理过程.     

大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究

目的 探讨大鼠趋化素样因子1和2（rCKLF1，2）对成肌细胞的增殖促进作用。方法 构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体，并瞬时转染293T细胞，收获培养上清，分别以^3H-TdR掺入和MTT比色法，分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用，结果 成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒，并在SV40转化的293T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2，瞬时转染上清能够使C2C12细胞的^3H-TdR的掺入值增加2倍或3倍，MTT比色法分析表明，rCKLF1和rCKLF2的转染上清，对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用。结论 rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖，为进一步探讨CKLF家族分子在骨骼肌细胞增殖分化中的作用提供了实验依据。