PGE1 abolishes the mitochondrial-independent cell death pathway induced by D-galactosamine in primary culture of rat hepatocytes

Background and Aim:  PGE₁ reduces in vivo and in vitro D-galactosamine (D-GalN)-induced cell death in hepatocytes. The present study was undertaken to elucidate the intracellular pathway by which D-GalN induces cell death in cultured hepatocytes. In addition, we evaluated if PGE₁ was able to modulate different parameters related to D-GalN-induced apoptosis in cultured rat hepatocytes.
Methods:  Hepatocytes were isolated from male Wistar rats (225–275 g) by the classical collagenase procedure. PGE₁ (1 µM) was administered 2 h before D-GalN (5 mM) in primary culture of rat hepatocytes. Apoptosis was determined by DNA fragmentation and caspase-3, -6, -8 and -9 activation in hepatocytes. Caspase activation was evaluated by the detection of the related cleaved product and its associated activity. Cell necrosis was determined by the measurement of lactate dehydrogenase (LDH) activity in culture medium. To elucidate the role of mitochondria, we measured neutral (nSMase) and acid (aSMase) sphingomyelinase, as well as the expression of cytochrome c in mitochondria and cytoplasm fractions from D-GalN treated hepatocytes.
Results:  D-GalN induced caspase-3 activation and DNA fragmentation in hepatocytes. This apoptotic response was not associated with the activation of caspase-6, -8 or -9. The use of specific inhibitors confirmed that only caspase-3 was involved in D-GalN-induced apoptosis. D-GalN did not modify nSMase and aSMase activities, nor mitochondrial cytochrome c release in hepatocytes.
Conclusions:  D-GalN induced apoptosis through caspase-3 activation but without modification of the activity of caspase-6, -8, -9, SMases or cytochrome c release. PGE₁ appears to prevent D-GalN-induced apoptosis by a mitochondria-independent mechanism.     

18α甘草酸对D-氨基半乳糖引起的大鼠急性肝损伤治疗作用

目的观察18α甘草酸(18α-GA)对D-氨基半乳糖(GalN)引起大鼠急性肝损伤的治疗作用。方法 SD大鼠60只,随机分为6组,除阴性对照组外,所有动物同时腹腔注射10%GalN溶液500 mg/kg,给药组于GalN处理前3 d分别腹腔注射18α-GA 15、30、60 mg/kg,每日一次,GalN处理30 h后取血测定血清ALT、AST,并取肝左叶作病理组织学观察。结果 18α-GA能明显抑制急性肝损伤大鼠血清转氨酶的活力,并减轻肝脏病理损伤。结论 18α-GA对GalN引起大鼠急性肝损伤具有防治效果。     

采用免疫型肝硬化大鼠建立慢加急性肝衰竭模型方法的研究

目的对人血清白蛋白免疫诱导型肝硬化大鼠给予不同急性打击，探索建立与人慢加急性肝衰竭组织病理表现相似、实用性、重复性好的实验模型、方法用人血清向蛋白免疫诱导建立肝硬化大鼠模型，至肝纤维化达4级时随机分组，组一（n=6）给予1．2g／kg的D．氨基半乳糖腹腔注射；组二（n=6）给予30mg／kg脂多糖尾静脉注射；组i（n=6）给予D-氨基半乳糖400mg／kg＋脂多糖100trg／kg同时腹腔注射；组四（n：4）继续给人血清白蛋白静脉注射，计算每组动物自然生存时间及死亡率、观察各脏器组织病理变化。结果组一5只大鼠给药后39～52h之内死亡，肝组织病理显示肝硬化基础上发生弥漫大小泡脂肪变性，仅见小片坏死灶；组二大鼠均存活良好，给药后3天后处死肝组织未见坏死性病变。组三5只大鼠在13～19h内死亡，肝脏病理表现为再生结节大块或亚大块坏死，肝细胞凋广明硅，增生的纤维间隔完整保留。结论对人血自蛋白免疫诱导型肝硬化大鼠给予D-氨基半乳糖／脂多糖联合急性攻击可建立慢加急性肝衰竭模型，而单独给大剂量D-氨基半乳糖或脂多糖不能使肝硬化大鼠发生肝脏大块或亚大块坏死。     

硫普罗宁钠与硫普罗宁对小鼠急性肝损伤预防和治疗作用的比较

目的观察并比较硫普罗宁钠(MPG-Na)及硫普罗宁(MPG)对急性肝损伤的预防和治疗作用。方法采用D-氨基半乳糖(Gal)(800mg.kg-1,ip)制备小鼠急性肝损伤模型。预防性给药时,分别ip给予小鼠MPG-Na或MPG37.5,75和150mg.kg-1,共7d,于最后一次给药后30min,用Gal染毒造模。治疗性给药时,在Gal染毒造模30min后分别ipMPG-Na或MPG37.5,75和150mg.kg-1,共2d。预防性给药小鼠Gal染毒24h、治疗性给药小鼠染毒48h后,检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和Alb/球蛋白比值(A/G)。取肝脏组织,常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察肝脏组织病理变化。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清GPT和GOT活性明显升高,肝脏组织出现明显的脂肪变性、肿胀或肝细胞变性坏死。预防性给予MPG-Na150mg.kg-1小鼠血清GPT和GOT活性与模型组比较显著降低,治疗性给予MPG-Na3个剂量血清GPT活性与模型组比较均明显降低,TP,Alb和A/G比值均无明显变化。预防性和治疗性给药后,肝脏组织病理损伤均明显减轻。另外,预防性和治疗性给药2种条件下,MPG-Na的作用与MPG相当。结论MPG-Na对Gal引起的急性肝损伤具有预防和治疗作用,与MPG作用相当。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠急性凋亡性肝损伤的效应

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对氨基半乳糖(GalN)/细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠急性凋亡性肝损伤的作用及其分子机制。方法设置生理盐水(NS)组、GalN/LPS组、PDTC+GalN/LPS组和PDTC组。每组10只小鼠被用于观察LPS处理后72h内的动物死亡情况;每组6只小鼠经LPS处理后1.5h被取血、处死并留取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织TNF-αmRNA表达水平,用EMSA分析肝脏NF-κB结合活性,每组12只小鼠于LPS处理后8h取血、处死并留取肝脏,测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)活力,用TUNEL技术检测肝脏细胞凋亡,并对肝组织切片行常规HE染色。结果GalN/LPS共处理升高小鼠血清ALT活力;肝脏组织病理学检查发现,GalN/LPS组小鼠肝脏严重充血、坏死并伴有大量炎性细胞浸润,肝脏组织TUNEL阳性细胞增多;在GalN/LPS共处理72h内有90%小鼠发生死亡,所有死亡小鼠均伴有肝脏严重充血。PDTC预处理抑制GalN/LPS诱导的肝脏NF-κB激活和TNF-α表达,但PDTC预处理反而加重GalN/LPS引起的小鼠肝脏细胞凋亡、进一步升高血清ALT活力、加重肝脏充血和坏死并加速小鼠死亡。结论NF-κB抑制剂PDTC通过抑制肝脏实质细胞NF-κB介导的抗凋亡机制加重GalN/LPS诱导的小鼠急性凋亡性肝损伤。     

氧化苦参碱防治半乳糖胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

目的 观察氧化苫参碱(oxymatrine,OM)预防及治疗大鼠肝纤维化的疗效并探讨其作用机制。方法 采用半乳糖胺诱导的大鼠肝纤维化模型,观察OM(90mg/kg)干预前后血及肝组织生物化学、羟脯氨酸含量、TGF β_1 mRNA表达水平及病理组织学改变。结果 OM干预组肝组织羟脯氨酸含量 (μg/mg)较模型组显著下降(预防观察组为0.50±0.11和0.99±0.14,t=8.366,P＜0.01;治疗观察组为0.44±0.04和0.70±0.06,t=9.839,P＜0.01);与模型组比较,干预组血清ALT、AST亦显著下降(P＜0.01);病理组织学显示干预组较模型组 Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积减少,纤维间隔纤细,数量减少;干预织肝组织匀浆内超氧化物歧化酶活性(NU/mg)较模型组升高(预防观察组为149.81±15.28和95.22±16.33,t=7.309,P＜0.01;治疗观察组为157.68±19.54和119.88±14.94,t=4.348,P＜0.01), 而丙二醛(nmol/mg)低于模型组(预防观察组为2.06±0.17和4.57±0.37,t=17.529,P＜0.01;治疗观察组为1.76±0.24和3.10±0.17,t=12.697,P＜0.01);PT-PCR显示干预组TGF β_1 mRNA表达水平降低(预防观察组为0.21±0.01和0.50±0.01,t-48.665,P＜0.01;治疗观察组为0.18±0.02和0.38±0.01,t=22.464,P＜0.01)。结论 氧化苫参碱对半乳糖胺诱导的肝纤维化有预防及治疗作用,其部分机制为通过     

束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖(D–galactosamine and lipopolysaccharide combination,D+L)诱导的小鼠肝损伤的保护作用.方法 正常BALB/c小鼠随机分为正常对照组(con)、应激对照组(str)、模型组(D+L)、束缚应激组(D+L+str).con组小鼠常规饲养;str组小鼠给予定时定量的束缚应激;D+L组小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖和脂多糖的混合溶液, 1次/2天;D+L+str 组小鼠腹腔注射等量D+L混合液后,给予与str组相同的束缚应激. 第8周,各组小鼠取血检测血清AST、ALT,肝脏固定后HE及Masson染色观察小鼠肝脏结构、细胞形态及纤维化程度. 结果 第8周D+L+str组与D+L组小鼠相比,血清ALT和AST显著降低(P<0.01),AST/ALT显著增高(P<0.01);HE及Masson染色显示,D+L组小鼠肝小叶结构紊乱,出现结节性增生及大量上皮细胞核浓缩、溶解、坏死,枯否氏细胞浸润,而D+L+str组未见明显病理变化;纤维化程度评分显示, D+L+str组与D+L组小鼠相比,病理评分与纤维显色吸光度值均显著降低(P<0.05). 结论 束缚应激对D+L诱导的小鼠肝损伤具有一定保护作用.     

不同维生素E含量饲料对D-氨基半乳糖致大鼠肝坏死的影响

本文观察了饲以不同VE含量饲料对D-GAL致大鼠肝坏死模型中脂质过氧化和肝损害程度的影响。结果表明:喂养8周后,富含VE饲料组大鼠血和肝VE值显著高于正常VE含量饲料组,而血MDA值则显著降低。在中毒后各个时期富含VE饲料组血和肝VE均保持较高水平,较好地维持了GSH含量及SOD、GSH-P_X活力和HPT活动度,而MDA含量和OCT、m-AST活性则非常显著低于正常VE含量饲料组,肝脏病理改变也显著轻于后者。贫乏VE饲料组大鼠上述各项指标的改变几乎均与富含VE饲料组相反。结果提示,富含VE饲料有较好的肝脏保护作用,这种保护作用可能是通过提高体内VE水平、抑制脂质过氧化而实现的。VE贫乏使肝脏对致伤因子的敏感性显著增强。     

大鼠急性肝功衰竭模型的建立及肝再生刺激因子的救治

作者采用D畔乳糖胺(D-GL)制备大鼠急性肝衰竭(FHF)模型,并观察了肝再生刺激因子(HSS)对大鼠FHF的救治效果.结果表明:D-GL诱发Wistar大鼠FHF的最适剂量为1.6g/kg;大鼠中毒后20h经腹腔注射HSS(总蛋白量为26mg)或生理盐水4ml,治疗组(n=12)大鼠2周存活率为33.3％,与对照组(0,n=12)相差显著(P<0.05)。提示人胎HSS可有效地提高FHF大鼠的存活率,有希望成为一种新的治疗FHF的有效药物。