外周血干细胞冠脉内移植治疗缺血性心脏病初步临床研究

随着冠心病发病率的日益升高，如何更有效地降低由此带来的病死率、病残率日益成为研究和关注的焦点。药物、介入、手术治疗能改善心肌缺血和心衰症状，却无法促使梗死的心肌细胞再生，心脏移植也有极大的局限性。近年来分子生物学和细胞生物工程技术的发展以及对造血干细胞研究认识的深入，     

腹部超声在急腹症诊断中的临床应用价值

目的探讨腹部超声在急腹症中的诊断价值。方法采用回顾性分析方法进行研究,对我院2016年8月至2017年6月接诊的185例急腹症患者临床资料进行观察分析,将患者腹部超声结果与手术结果及治疗过程进行对比,探讨腹部超声在急腹症中的诊断价值。结果经腹部超声与手术结果和治疗结果的诊断结果比较,差异无统计学意义(P0.05),腹部超声在各类型急腹症中的诊断准确率与手术结果和治疗结果比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论腹部超声在急腹症中的诊断中有较高应用价值,具有操作简单,诊断结果准确,可指导临床选择治疗方案。     

DNA修复酶HOGG1在食管鳞癌的表达和临床意义

目的探讨食管鳞状上皮癌组织中DNA损伤修复酶HOGG1表达与8-oxoG氧化损伤的关系及其表达改变的临床意义。方法免疫组化和Western blot检测鳞癌和癌旁组织中HOGG1的表达和8-oxoG氧化损伤,TUNEL试剂盒检测组织的凋亡指数。相关性统计分析鳞癌组织HOGG1低表达与上述两项指标之间的相关性;χ2检验与秩和检验统计鳞癌组织中HOGG1低表达与临床病理特征之间的关系。结果 HOGG1在食管鳞癌患者的组织中均有不同程度的表达,并且存在个体差异,鳞癌组织中HOGG1表达明显低于其癌旁组织(P<0.05),8-oxoG的氧化损伤程度明显高于癌旁组织(P<0.05),鳞癌组织中HOGG1的低表达与该组织8-oxoG氧化损伤程度、细胞凋亡指数呈负相关,与鳞癌的静脉侵犯、淋巴结转移有关,与患者的年龄、性别、鳞癌组织的病理分化程度无关。结论 HOGG1可作为食管鳞癌术后的检测指标,指导患者术后个体化治疗方案的制定。     

小鼠非清髓外周造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注的实验研究

目的:探讨受者皮肤致敏后的供者淋巴细胞输注对受者嵌合状态的影响及供者嵌合比率与混合淋巴细胞反应(MLR)和受者重建的T细胞亚群间的关系。方法:受鼠C57BL/6小(H-2b)第0天接受X射线全身照射,4小时内移植经rhG-CSF动员后的BALB/c小鼠(H-2d)外周血干细胞2×107个,第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106个。结果:移植后第21天模型组小鼠PCR检测结果均呈混合嵌合(MC)状态;致敏后DLI的受鼠60天时转变为完全供者嵌合(CC),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值早期下降,60天时有所升高,仍略低于正常水平,MLR呈现供者特异性低反应性;未致敏的DLI受鼠嵌合率虽稍有上升,仍为MC,CD4+/CD8+比值早期升高,后期降至正常水平,MLR供者反应性亦有所下降。结论:经rhG-CSF动员后可以成功建立非清髓性allo-PBSCT小鼠MC模型;经受者皮肤致敏后的DLI能够诱导稳定的CC,高比率嵌合与供者CD4+/CD8+比值下降及MLR的特异性免疫低反应性间具有良好相关性。     

荧光探针JC-1检测骨髓增生异常综合征细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨荧光探针JC-1在检测细胞凋亡早期线粒体膜电位（△ψm）中的应用。方法2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡，利用新型荧光探针JC-1标记MUTZ-1细胞，在FACS Calibur流式细胞仪（FCM）上检测细胞内JC-1荧光强度的变化；在荧光显微镜下观察和计数细胞内JC-1荧光颜色的改变。结果对照组MUTZ-1细胞线粒体△ψm维持较高，JC-1在线粒体内形成聚合物，发出橘红色荧光；用药组MUTZ-1细胞线粒体△ψm下降，JC-1聚合物分解成单体，发出绿色荧光。MUTZ-1细胞线粒体△ψm的下降随着时间延长而逐渐增强，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；随着药物浓度的增加，细胞线粒体△ψm下降增强，在4μmol／L时线粒体△ψm下降达到最大值，以后线粒体△ψm下降趋势减缓。结论荧光探针JC-1结合FCM和荧光显微镜可以准确、直观地检测凋亡早期线粒体△ψm的变化，为2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡机制的研究提供了重要手段。     

非清髓异基因外周血造血干细胞移植后嵌合体分析

本研究旨在探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植(NAPBSCT)后造血嵌合体的临床意义。采用FBC(氟达拉宾+白消安+环磷酰胺)±阿糖胞苷(Ara-C)预处理方案,对28例血液病患者进行NAPBSCT,采集供者和受者术前外周血及术后不同时间段的序列血样,用STR-PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色和凝胶成像分析技术半定量方法计算供体细胞嵌合率。结果显示:移植后1月,28例患者中1例移植失败,22例形成完全供者造血嵌合体(CC),5例形成混合造血嵌合体(MC);移植后7天时供者细胞即占优势(74.71%),较中性粒细胞(ANC)和血小板(Plt)的平均恢复时间均明显提前;CC组的aGVHD发生率高于MC组(P<0.05),两组cGVHD发生率无显著差异(P>0.05);1例MC患者发生早期移植排斥;CC组和MC组复发率无显著差异(P>0.05),1例在CC状态下复发。3例MC患者经早期临床干预治疗获得CC和完全缓解。结论:造血嵌合体的动态定量检测对判断早期植入,预测移植物排斥、复发和GVHD,以及指导临床干预治疗具有重要意义。     

TBI和环磷酰胺选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞的研究

本研究用全身照射(TBI)和环磷酰胺(CY)选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞,为预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生探索新的手段。以(BALB/c×C57BL/6)F1雌性小鼠(H-2d/b)为受鼠,于第0天接受亚致死量的60Co-γ射线全身照射,总剂量为4Gy,第1天接种P388D1白血病细胞,第2天输注由C57BL/6雄性小鼠(H-2b)为供鼠提供的MHC不匹配的供者脾淋巴细胞,在造血干细胞移植前诱导移植物抗白血病效应(GVL)。第6天腹腔注射环磷酰胺(CY)200mg/kg或再次TBI9Gy,选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞,第7天输注(BALB/c×C57BL/6)F1雄性小鼠(H-2d/b)提供的骨髓造血干细胞。结果显示:以CY和TBI选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生,生存期超过了210天,于移植后第21天出现完全供者嵌合,然后嵌合率下降,第90天表现为混合嵌合体(MC)。对照组的小鼠出现了白血病和GVHD,出血、感染明显,生存期短,为20-36天(P<0.01)。结论:同基因骨髓移植前输注不相匹配的供者脾细胞诱导GVL效应,然后再通过TBI和CY选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞来预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生是可能的。     

汉防己甲素、托瑞米芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

本研究探讨汉防己甲素（Tet）、雌激素受体抑制剂托瑞米芬（Tor）及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。采用噻唑蓝法（MTT）测定阿霉素（ADR）的半数抑制量,RT-PCR法检测MDR1基因mRNA表达水平,FCM检测P-gp的表达和细胞内ADR浓度。结果表明：ADR对K562/A02和K562细胞的IC50分别为57.43和1.16mg/L,Tet（1μmol/L）和Tor（2.5μmol/L）单用及两药联用处理K562/A02细胞时,ADR的IC50值分别为14.12,20.74和9.14mg/L。Tet及Tor单独作用后耐药株MDR1 mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显。Tet及Tor均可降低P-gp蛋白的表达,且具有协同作用。Tet及Tor作用后细胞内ADR浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论：Tet及Tor均可逆转K562/A02细胞多药耐药,联合作用时效果增强。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态与多发性骨髓瘤易感性的关系

国外研究发现亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T多态改变与多发性骨髓瘤（MM）易感相关。由于基因多态与疾病易感的相关性有人种、地域的差异，我们对中国人群进行了相关研究。     

血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨血小板衍生膜微粒（platelet-derived membrane microparticles,PMP）对人脐静脉内皮细胞（hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖和凋亡的影响。用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP,采用流式细胞术检测PMP的释放量,确定制备PMP时凝血酶的最佳应用浓度。以体外培养HUVEC为载体,通过噻唑蓝（MTT）实验和流式细胞术研究不同浓度的PMP对HUVEC增殖和凋亡的影响。结果表明,2、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后PMP的释放率分别为28.7、47.7、50.1和43.9%;HUVEC的增殖与PMP呈剂量依赖关系。在培养液中添加40μg/mlPMP时,HUVEC增殖是空白对照组的1.8±0.3倍;10μl/ml血管内皮细胞生长因子（VEGF）组的HUVEC增殖是空白对照组的1.9±0.5倍,两组之间无统计学差异,（p〉0.05）;PMP能抑制HUVEC的凋亡,40μg/mlPMP组的细胞凋亡率为（3.9±0.4）%,明显低于空白对照组的细胞凋亡率（9.4±0.5）%（p〈0.05）。VEGF（10μl/ml）对HUVEC细胞的凋亡无明显抑制作用,其凋亡率为（8.0±0.8）%。结论：用1U/ml的凝血酶刺激血小板释放的PMP较为均一,且释放量最大,可促进HUVEC细胞的增殖并抑制其凋亡。