超声微泡增效骨髓干细胞移植效率的实验研究

目的在动物水平研究超声联合微泡增效骨髓干细胞(BMSCs)心肌移植的作用,为临床上提高心肌梗死后BMSCs移植效率提供一种新的思路。方法12只中国家猪分别体外分离纯化BMSCs,超顺磁性氧化铁颗粒标记;介入法建立急性心肌梗死模型,成功后14d经冠状动脉注入自体BMSCs;实验组先注入微泡后再注入BMSCs,同时行超声辐射。术后行磁共振检查;心肌做病理切光镜、透射电镜观察。结果①两组在心肌梗死区和梗死周边区磁共振上均见SPIO标记的BMSCs形成的低密度区;②实验组较对照组普鲁士蓝染色阳性细胞明显增多(P<0.01);③两组心肌超微结构无差异,但B1组见血管内皮间隙增宽。结论超声辐射微泡可增加自体BMSCs心脏的移植效率。     

组织多普勒检测心肌工作指数在冠心病中的临床应用

目的:探讨利用组织多普勒(TDI)检测心肌工作指数(MPI)评估冠状动脉病变程度与心脏整体功能状态的关系。方法:拟诊冠心病患者122例,行常规各项心脏超声指标及MPI检测,根据冠状动脉造影(CAG)结果,按冠脉病变Gensini积分分为4组,即正常组(0分,n=15)、轻度狭窄组(1～40分,n=56)、中度狭窄组(41～80分,n=56)和重度狭窄组(≥81分,n=9)。观察Gensini积分与MPI有无相关性。结果:重度狭窄组、中度狭窄组MPI指数较其它组高,重度狭窄组高于其他各组,Gensini积分与左、右心室MPI存在正相关关系(r=0.72,P<0.01;r=0.68,P<0.01)。结论:MPI与冠状动脉病变程度有关,冠状动脉狭窄程度越重,MPI升高越明显,提示冠心病患者随着冠脉病变严重程度的增加,心脏整体功能下降。     

血管内超声指导下行冠状动脉左主干介入治疗

目的探讨应用血管内超声(IVUS)对冠状动脉无保护左主干(ULMCA)检查并行介入治疗的效果及安全性。方法在IVUS指导下植入支架治疗ULMCA病变21例(A组),未行IVUS检查经冠脉造影确诊行支架植入术49例(B组),比较两组患者近期疗效及术后6个月的随访结果。结果两组患者住院期间病死率、非致死性心肌梗死率、急诊冠脉旁路移植术率均无显著性差异,胸痛复发和再狭窄率A组低于B组(P<0.05)。结论应用IVUS指导ULMCA支架植入有助于选择适应证和合适的支架、实时评价支架扩张的满意度以达到最佳植入效果,且相对安全。     

超声联合一氧化氮微泡对大鼠心肌组织的生物学效应

目的:本研究旨在探讨超声联合一氧化氮(NO)微泡的作用对大鼠心肌组织局部基质衍生因子-1(SDF-1)的影响,及其对心肌组织作用的安全性?方法:将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,每组8只?第1?2?3组分别经尾静脉输入1 ml的NO微泡?普通脂质微泡以及PBS,并采用频率为1 MHz?强度为1 W/cm2的超声辐照大鼠心前区,辐照时间为10 min;第4组为空白对照组?4 h后每组处死4只大鼠,留取心肌组织进行HE染色,观察局部的炎症反应情况;同时留取血清标本用于检测肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(TnI)的含量?1周后处死剩余大鼠,取心肌组织进行RT-PCR和Western blot分别检测SDF-1的基因及蛋白相对表达量?结果:辐照4 h后留取心肌组织行HE染色显示各组均可见少量炎性细胞浸润,组间没有明显差异;血清学指标检测显示,第1组与第2组血清CK和LDH高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);第1组血清TnI低于第2组,但高于第3组和第4组,且差异有统计学意义(P < 0.05);辐照1周后留取的心肌组织行RT-PCR和Western blot分析结果均显示第1组SDF-1相对表达量最多,各组间进行两两比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:超声联合NO微泡辐照大鼠心肌组织,与内含全氟显气体的普通脂质微泡一样,对心肌组织无明显破坏;但能使大鼠心肌组织SDF-1表达增加,其程度高于应用超声联合普通脂质微泡,因此,NO微泡应用于干细胞归巢将优于目前普通脂质微泡?     

软骨细胞接种小孔径聚乳酸-羟基乙酸共聚物支架的方法选择

目的 探讨软骨细胞接种小孔径聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)支架的最佳接种方法. 方法 实验分3组(n=9):注射组、负压组、振荡组,取纤维蛋白原溶液混悬第2代软骨细胞,采用上述3种方法对孔隙率为92％、孔径为50 ～ 100 μm的PLGA支架进行细胞接种.48 h后,Hoechst33258法检测支架内DNA含量;接种并观察支架内含异硫氰酸荧光素的无细胞纤维蛋白原凝胶的分布;硬组织切片、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察支架内细胞分布.7d后,扫描电镜观察支架表面及内部的细胞形态.各组部分支架(n=3)植入裸鼠皮下,以无细胞PLGA支架为空白对照组,术后8周取出支架行甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,并计算累积吸光度(IOD)值. 结果 注射组、负压组、振荡组平均DNA含量分别为(755.79±80.50)、(657.32±89.68)、(650.18±106.33)ng/mg,各组比较差异均无统计学意义(F=1.214,P=0.361).无细胞纤维蛋白凝胶在各组中都均匀分布,DAPI染色显示注射组细胞分布较其他两组均匀.扫描电镜显示负压组和振荡组外周细胞较注射组多,而支架孔隙内仅注射组可见细胞黏附.注射组甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色的IOD值均优于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 对于50 ～ 100 μm的小孑L径PLGA支架,注射法是一种快捷、高效的细胞接种方法.     

扩张型心肌病抗人心肌线粒体抗体的临床研究

目的：检测扩张型心肌病（DCM）患者血清中是否有抗人心肌线粒体抗体存在及其意义,方法：以人心肌线粒体作抗原,应用免疫点印迹（Immuno-dot blot)对24例DCM、20例健康献血者（HBD）进行抗人心肌线粒体抗体检测,用Western blot方法检测其抗原分子量。结果：10例（41．7％）DCM患者抗人心肌线粒体抗体阳性,而HBD组0％;早期患者阳性率（70％）明显高于晚期患者（21．4％）（P＜0．05）;DCM抗体阳性与阴性患者之间心功能指标（左室射血分数、左室舒张末期内径、心径比例）无明显差异（P＞0．05）;人心肌线粒体特异性抗原的分了量为30KD。结论：①在DCM患者血清中存在抗人心肌线粒体抗体,支持DCM与自身免疫有关,对该抗体的检测可作为DCM的辅助诊断手段之一;②该抗体是DCM患者的早期指标,随着病程的进展,逐渐消失;③DCM抗人心肌线粒体抗体的检出率与心功能无明显关系;④该抗体的特异性抗原可能为人心肌线粒体腺苷酸转位酸。     

心脏转录因子Nkx2．5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2．5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2．5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx25为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2．5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx25的PCR产物分别在双酶切后用,T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2．5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2．5基因编码区约1000bp的目的片段。PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2．5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2．5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。     

外周血干细胞冠脉内移植治疗缺血性心脏病初步临床研究

随着冠心病发病率的日益升高，如何更有效地降低由此带来的病死率、病残率日益成为研究和关注的焦点。药物、介入、手术治疗能改善心肌缺血和心衰症状，却无法促使梗死的心肌细胞再生，心脏移植也有极大的局限性。近年来分子生物学和细胞生物工程技术的发展以及对造血干细胞研究认识的深入，     

早发冠心病患者子代胰岛素抵抗和心血管病危险因素聚集性研究

目的探讨早发冠心病患者子代胰岛素抵抗和心血管危险因素聚集性特点及其相关性。方法入选66例早发冠心病患者的子代76例(病例组),收集其临床资料、血糖、血脂和胰岛素测定结果、心血管危险因素,计算空腹胰岛素抵抗指数(Hom a IR),并与70例非冠心病患者的子代81例(对照组)进行对比研究。结果两组平均年龄、性别比例、患高血压及吸烟的比例、空腹血糖、胆固醇浓度差异无统计学意义(P>0.05)。病例组空腹甘油三酯和胰岛素水平、血脂异常比例、体重指数以及Hom a IR均高于对照组[分别为(1.39±0.43)mmol/L比(1.22±0.36)mmol/L,P<0.01;(10.7±2.6)mU/L比(9.6±2.4)mU/L,P<0.05;31.6%vs 9.9%,P<0.01;(23.09±1.85)比(22.49±1.70),P<0.05;(2.5±0.7)比(2.2±0.6),P<0.01],高密度脂蛋白胆固醇低于对照组[(1.20±0.22)mmol/L比(1.32±0.23)mmol/L,P<0.01]。相关分析显示Hom a IR与体重指数、胰岛素、血糖和甘油三酯成正相关(分别r=0.174,P=0.029;r=0.877,P=0.000;r=0.368,P=0.000;r=0.157,P=0.049)。结论早发冠心病患者子代存在胰岛素抵抗,并且与心血管危险因素聚集性相关联。     

工作场所空气中四乙基铅国家标准检测方法的前处理优化研究

目的 对测定工作场所空气中四乙基铅的溶剂解吸-微量酸消解石墨炉原子吸收分光光度法的前处理过程进行优化。方法 选择新的四乙基铅解吸试剂，调整消解时间，通过实验计算前处理优化后的工作场所空气中四乙基铅的检出限、加标回收率、相对标准偏差等，并与国家标准方法进行比较。结果 前处理过程中选择正己烷作为解吸剂，使用10μL浓硝酸消解60 min。前处理优化后，检出限为0.001 3μg/mL，实验平均加标回收率为98.3%，平均相对标准偏差为2.7%，符合实验室质量控制规范的相关要求。与国家标准方法比，浓硝酸用量少、实验空白低，回收率高。结论 改进后的方法操作更简便、试剂空白值低、结果重复性好、样品加标回收率高。