梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd的基因型分析及其重组蛋白的免疫原性鉴定

目的　构建梅毒螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体 ,检测其表达产物的免疫原性 ,并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法　从TpNichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因 ,与GenBank登录的序列做blast比较 ,定向克隆构建原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd ,转入大肠杆菌ril表达菌 ,SDS -PAGE分析重组蛋白的表达 ,Western -blot检测重组蛋白的免疫原性。结果　载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Gpd基因序列完全一致 ,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为 98%～ 1 0 0 %。SDS -PAGE检测诱导产物显示有一Mr约为 41kDa的特异蛋白带 ,免疫印迹技术检测其能与梅毒阳性标准血清反应。结论　Tp原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd成功构建 ,且能够在ril表达菌中融合表达 ,为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了一定的实验基础。     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

Apelin/APJ系统在心血管疾病中的生理与病理作用

Apelin/APJ系统在人体组织中分布广泛,通过自分泌和旁分泌等信号途径发挥重要的生物学效应。它具有调节血管舒缩功能、正性肌力作用、调节血管内皮功能、刺激VSMC表型转换和增殖功能、促进血管发生、调节体液平衡等重要生物学功能,参与动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭、心肌梗塞、心房纤颤等多种心血管系统疾病的发生发展。本文对Apelin/APJ系统在心血管疾病中的生理、病理作用进行了综述。     

某院不同标本来源的肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的通过比较不同标本来源的肺炎克雷伯菌耐药性特征,使抗菌药物的使用更具特异性。方法分离湘潭市第一人民医院2016-2017年临床不同部位送检标本的肺炎克雷伯菌,采用VITEK2Compact微生物分析仪对细菌进行鉴定和药敏试验,K-B法作为补充。结果 2016-2017年临床送检的各类标本共检出肺炎克雷伯菌758株,其中痰液检出370株(48.8%),尿液172株(22.7%),血液102株(13.5%),其他各类114株(15.0%);产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)阳性菌株284株(37.5%)。与血液标本分离菌株耐药率比较,痰液和尿液的肺炎克雷伯菌对各种抗菌药物的耐药率均较血液高;其中痰液标本的分离菌株对哌拉西林、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑的耐药率差异有统计学意义(P0.05);尿液标本分离菌株对头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、亚胺培南、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑的耐药率差异有统计学意义(P0.05)。结论按照不同标本类型进行药敏试验,可以更准确反映菌株的耐药性状况,更好地指导临床抗菌药物的选用。     

EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测

为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。     

幽门螺杆菌Tipα通过Wnt/β-catenin通路诱导胃癌细胞EMT

探讨幽门螺杆菌(H.pylori)肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)是否通过Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞上皮-间质转化(EMT)。设置PBS组、Tipα组和通路抑制剂XAV939预处理组,采用Western blot和免疫荧光观察β-catenin磷酸化和核转位情况;qRT-PCR和Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及通路下游靶基因(c-myc和cyclinD1)的表达情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果显示,Tipα能以时间依赖性方式诱导β-catenin Ser675和Ser552磷酸化和核转位,且下调E-cadherin和ZO-1表达,上调N-cadherin和Vimentin表达(P＜0.01);与PBS相比,Tipα增强c-myc和cyclinD1的表达(P＜0.05)以及细胞的迁移能力(P＜0.05)。XAV939预处理抑制Tipα诱导的SGC7901细胞EMT形成及通路下游靶基因的表达。表明Wnt/β-catenin信号通路参与了Tipα诱导的胃癌细胞EMT形成。     

抗生素诱导的肠道菌群失调加重小鼠肺炎支原体感染

目的初步探讨抗生素诱导的肠道菌群失调对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)呼吸道感染的影响。方法C57BL/6J小鼠口服万古霉素和庆大霉素21 d后滴鼻感染Mp。实时荧光定量PCR(qPCR)分析抗生素处理前后小鼠粪便中5个主要菌门的菌量;qPCR检测感染后3 d和7 d肺组织中Mp载量;病理切片和HE染色分析肺组织炎症病理改变;流式细胞术分析小鼠脾脏T淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-4;间接ELISA检测Mp特异性IgM和IgG。结果口服万古霉素和庆大霉素后小鼠粪便中拟杆菌门菌量显著减少,厚壁菌门菌量增多,δ,γ变形杆菌门、放线菌门和软壁菌门菌量亦发生改变;口服抗生素小鼠感染Mp后3 d和7 d肺组织Mp载量和炎症病理评分增加,7 d小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的CD4+T细胞减少。结论抗生素诱导的小鼠肠道菌群失调可加重Mp呼吸道感染。     

结核杆菌Edman株Ag85C基因的克隆表达与鉴定

目的克隆人结核杆菌Ag85C基因并在大肠杆菌中表达,研究其对结核病预防和治疗过程中的免疫保护作用。方法设计一对特异性引物,PCR扩增人结核杆菌Edman株Ag85C基因开放阅读框并定向克隆到原核表达载体pQE30,通过酶切、PCR和测序鉴定重组质粒,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白。结果构建了pQE30-Ag85C重组质粒;在大肠杆菌中表达了一分子量约30kDa的重组蛋白。结论重组质粒pQE30-Ag85C构建成功并在大肠杆菌中高效表达,为Ag85C保护性抗原位点分析和新型疫苗的研制奠定了基础。     

GFP-HPVl8 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础.方法 用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-Cl载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定.结果 阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb、618 bp和243 bp附近的片段.DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确.结论 成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD.     

肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究进展

肺炎嗜衣原体（Cpn）是二十世纪八十年代新发现的一种重要的呼吸系统感染的病原体，它不仅可以引起非典型肺炎，而且还有可能通过直接或间接的机制参与动脉粥样硬化的发生与发展，因而受到了人们越来越多的关注。近年来，Cpn感染的血清学诊断也成为人们关注的焦点之一，目前常用于诊断Cpn感染的抗原有全菌抗原、脂多糖和主要外膜蛋白等属特异性抗原。因此本文就Cpn感染诊断候选抗原的研究进展作一综述。