吡拉格雷钠对氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞水肿及AQP4表达的影响北大核心CSCD

目的探讨氧糖剥夺并复氧培养后星形胶质细胞水肿及其水通道蛋白4(AQP4)表达的变化以及吡拉格雷(TSF)对其表达变化的影响。方法体外培养原代星形胶质细胞,建立氧糖剥夺/复氧细胞水肿模型,并随机分为正常组、氧糖剥夺/复氧损伤(OGD/Reox)组、奥扎格雷钠(Ozagrel)阳性对照组和TSF治疗组,在氧糖剥夺/复氧损伤后6、12、24和48 h 4个时间点测定细胞体积变化,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测细胞损伤及存活情况,Western blot法检测各组细胞膜AQP4蛋白的表达水平,RT-PCR法检测各组细胞AQP4 m RNA的转录水平。结果星形胶质细胞经缺氧再复氧处理,随着复氧时间的延长细胞损害加重(P<0.05,P<0.01);TSF治疗组的细胞体积明显低于OGD/Reox损伤组(P<0.05);给予TSF治疗后细胞在氧糖剥夺/复氧后的LDH漏出率较OGD/Reox损伤组明显降低(P<0.05);TSF治疗组与单纯氧糖剥夺/复氧相比较MTT检测细胞活力明显升高(P<0.05);给予TSF治疗组,AQP4表达明显降低(P<0.05);与Ozagrel相比较差异无显著性。Western blot及RT-PCR检测蛋白及m RNA的表达水平,给予TSF治疗组的AQP4蛋白及m RNA表达均明显降低(P<0.05)。结论TSF治疗能明显减轻体外氧糖剥夺/复氧损伤引起的星形胶质细胞水肿,可能是通过降低氧糖剥夺后AQP4的表达水平而实现。     

吡拉格雷钠对氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞水肿及AQP4表达的影响

目的探讨氧糖剥夺并复氧培养后星形胶质细胞水肿及其水通道蛋白4(AQP4)表达的变化以及吡拉格雷(TSF)对其表达变化的影响。方法体外培养原代星形胶质细胞,建立氧糖剥夺/复氧细胞水肿模型,并随机分为正常组、氧糖剥夺/复氧损伤(OGD/Reox)组、奥扎格雷钠(Ozagrel)阳性对照组和TSF治疗组,在氧糖剥夺/复氧损伤后6、12、24和48 h 4个时间点测定细胞体积变化,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测细胞损伤及存活情况,Western blot法检测各组细胞膜AQP4蛋白的表达水平,RT-PCR法检测各组细胞AQP4 m RNA的转录水平。结果星形胶质细胞经缺氧再复氧处理,随着复氧时间的延长细胞损害加重(P<0.05,P<0.01);TSF治疗组的细胞体积明显低于OGD/Reox损伤组(P<0.05);给予TSF治疗后细胞在氧糖剥夺/复氧后的LDH漏出率较OGD/Reox损伤组明显降低(P<0.05);TSF治疗组与单纯氧糖剥夺/复氧相比较MTT检测细胞活力明显升高(P<0.05);给予TSF治疗组,AQP4表达明显降低(P<0.05);与Ozagrel相比较差异无显著性。Western blot及RT-PCR检测蛋白及m RNA的表达水平,给予TSF治疗组的AQP4蛋白及m RNA表达均明显降低(P<0.05)。结论TSF治疗能明显减轻体外氧糖剥夺/复氧损伤引起的星形胶质细胞水肿,可能是通过降低氧糖剥夺后AQP4的表达水平而实现。     

基因导向个体化用药的伦理学思考

基因导向的个体化用药是未来临床用药的必然趋势,但其推广及应用的同时也可能伴随着一系列伦理问题。个体化用药会因人、因病和因药而异,本文从这3个方面并结合具体的临床治疗实例,分别阐述和讨论基因导向个体化用药过程中可能出现的各种相关伦理问题,并提出针对性的解决方案。     

黄连多糖不同组分抗氧化活性比较研究

目的研究黄连粗多糖和带电量不同的黄连多糖组分的抗氧化活性。方法用二乙氨乙基纤维素(阴离子交换柱层析)分离纯化除蛋白后的黄连粗多糖,用Fenton法、邻苯三酚自氧化法和2,2-二苯基-1-苦味肼基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)分析法测定黄连粗多糖及纯化后带电量不同的多糖组分体外抗氧化作用。结果经阴离子交换柱层析,可获得4种带电量不同的黄连多糖组分,且这4种组分和黄连粗多糖对羟自由基、超氧阴离子和DPPH都有一定的清除作用,其中带电量高的组分对不同抗氧化模型均具有较高的清除作用。结论黄连多糖有一定的抗氧化活性,其抗氧化活性和其带电量具有正相关性。     

霍乱毒素B亚单位与热休克蛋白65功能表位融合蛋白皮下免疫加剧动脉粥样硬化

目的　研究热休克蛋白65　B细胞表位经皮下免疫高脂膳食动物对动脉粥样硬化（As）斑块生成的影响。方法　利用HSP65上与炎症性自身免疫性疾病相关的两段功能表位P1（179-190）、P2（31-46）,以CTB为载体蛋白构建高效表达载体pET28a-CTB-p117,提取纯化获得可用于动物实验的蛋白,皮下免疫新西兰大白兔,比较抗HSP65抗体、血液总胆固醇含量变化与主动脉粥样硬化斑块的生成情况。结果　能够诱导产生抗HSP65的抗体,血液中总胆固醇含量与对照组比较显著提高,并且能显著增加主动脉As斑块生成（P<0.05）。结论　HSP65相关表位蛋白以CTB为载体蛋白,在弗氏不完全佐剂条件下,经皮下免疫能显著加重As斑块生成,分析是因为抗HSP65抗体生成,促进炎症反应,脂类代谢变化进而促进As斑块的形成。可基于此,利用以上表位,改变免疫方式,设计出可用于降低斑块生成的抑制As斑块生成的免疫调节剂。对于CTB单独皮下免疫也致As斑块加重的结果需进一步实验考察验证。     

联苯类PD-L1抑制剂的设计合成及生物活性评价

目的设计并合成新型联苯类PD-L1小分子抑制剂。方法以BMS-1018为先导化合物,通过变换苯环上取代基的相对位置,按照生物电子等排原理,结合分子对接技术,设计了3个系列联苯类目标化合物。采用均相时间分辨荧光法评价目标化合物对PD-1/PD-L1结合的抑制活性。结果与结论合成了10个未见文献报道的联苯类目标化合物,结构经~1H-NMR、ESI-MS谱确证。生物活性评价结果表明,大多数目标化合物对PD-L1显示不同程度的抑制活性。其中4个化合物A-1、A-3、A-4和C-2的活性较为突出,值得进一步研究。     

丙型肝炎病毒感染者F基因区变异临床意义的初步研究

目的探讨丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）F基因区变异的临床意义。方法以78例未治疗慢性丙型肝炎患者为研究对象,采用单链构象多态性分析对HCV-F基因区进行准种分析,实时荧光定量聚合酶链反应对HCV RNA进行定量检测,利用酶联免疫吸附试验分别对患者血清中的抗F蛋白抗体、Th1（IL-12,IFN-γ）和Th2（IL-5,IL-10）细胞因子水平进行检测分析。结果 78例慢性丙型肝炎患者中有46例为抗HCV-F抗体阳性,阳性率为59%。HCV1b亚型患者F基因区准种数目高于非HCV1b亚型（P=0.002）。F基因区SSCP条带数与HCV RNA载量及ALT/AST水平呈正相关（均有P〈0.05）。另外,与F基因准种数量≤2的患者相比,F基因准种数量〉2的患者血清中,Th1细胞因子IL-12、IFN-γ水平降低（P=0.023,P=0.010）,Th2细胞因子IL-5、IL-10水平显著升高（P=0.024,P=0.012）。结论 HCV-F基因区准种多样性与病毒复制、肝损伤和机体Th2优势应答有关,具有一定的临床意义。     

CRISPR/Cas9基因组定点编辑技术在病毒性及遗传性疾病治疗中的应用及其进展

第3代基因组定点编辑技术(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat(CRISPR,成簇规律间隔短回文序列))介导的Cas9核酸酶系统,已被用于真核细胞的基因组编辑和基因修饰。CRISPR/Cas9技术有许多潜在的应用,包括对人类基因组进行编辑以治疗遗传缺陷疾病或基因突变疾病;删除病原体基因(如细菌基因组或病毒基因组),消灭病原体,达到消除传染性疾病的目的;也可用于农业生产(包括植物和动物的基因)中农作物的改造。综述基因组定点编辑技术CRISPR/Cas9在病毒感染性疾病和遗传缺陷性疾病中的应用文献,并对其研究进展作了分析。     

红海榄内生真菌AGR12及其抑菌活性代谢产物

目的 鉴定一株分离自海南文昌红海榄茎的内生真菌菌株AGRl2,分离和鉴定其抑菌活性代谢产物.方法 根据菌株的形态学特征和ITS序列鉴定菌株AGR12.通过硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、制备薄层层析及重结晶等方法分离纯化代谢产物,并根据它们的紫外、质谱、氢谱和碳谱等光谱数据确定化合物结构.结果 菌株AGRl2被鉴定为镰孢霉属木贼镰刀菌(Fusarium equiseti),其在优化后的GMPY培养基中28℃、160r/min振荡培养7d后获得的发酵液具有明显的抑菌活性.从发酵液及菌体中共分离到3个化合物,鉴定为equisetin、epi-equisetin和麦角甾醇(ergosterol),其中equisetin对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制活性,最低抑菌浓度(MIC)均为32Bg/mL;epi-equisetin对枯草芽孢杆菌的生长也具有明显的抑制作用,MIC为32μg/mL.结论 木贼镰刀菌菌株AGRl2为首次从红树植物中分离到的内生真菌,其分泌的代谢产物equisetin和epi-equisetin具有明显的抑菌活性.     

浊点系统中红酵母静息细胞生物还原3,5-二(三氟甲基)苯乙酮

以红酵母静息细胞为生物催化剂,在由两种不同浊点的表面活性剂组成的浊点系统中对3,5-二(三氟甲基)苯乙酮进行生物转化,以生产3,5-二(三氟甲基)苯乙醇.分别考察了浊点系统对细胞生长和转化过程的影响.在细胞培养阶段表面活性剂Triton X-114(TX-114)能够大大提高细胞对毒性底物的耐受能力.表面活性剂浓度5％,底物浓度6μl/ml时,浊点系统的产物浓度为5.47 mg/ml,转化率为80.5％,分别比两相系统提高91.3％和78.1％.细胞经4次循环使用,活性仍保持80％以上.