红海榄内生真菌AGR12及其抑菌活性代谢产物

目的 鉴定一株分离自海南文昌红海榄茎的内生真菌菌株AGRl2,分离和鉴定其抑菌活性代谢产物.方法 根据菌株的形态学特征和ITS序列鉴定菌株AGR12.通过硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、制备薄层层析及重结晶等方法分离纯化代谢产物,并根据它们的紫外、质谱、氢谱和碳谱等光谱数据确定化合物结构.结果 菌株AGRl2被鉴定为镰孢霉属木贼镰刀菌(Fusarium equiseti),其在优化后的GMPY培养基中28℃、160r/min振荡培养7d后获得的发酵液具有明显的抑菌活性.从发酵液及菌体中共分离到3个化合物,鉴定为equisetin、epi-equisetin和麦角甾醇(ergosterol),其中equisetin对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制活性,最低抑菌浓度(MIC)均为32Bg/mL;epi-equisetin对枯草芽孢杆菌的生长也具有明显的抑制作用,MIC为32μg/mL.结论 木贼镰刀菌菌株AGRl2为首次从红树植物中分离到的内生真菌,其分泌的代谢产物equisetin和epi-equisetin具有明显的抑菌活性.     

重组鲨肝刺激物质类似物对CCl4诱导的急性肝损伤的保护作用

探讨重组鲨肝刺激物质类似物（r-sHSA）对CCl₄急性肝损伤模型的保护作用。采用CCl₄花生油溶液（0.15%,ip）诱导小鼠急性肝损伤,用改良赖氏法测定血清ALT、AST、MDA水平,并观察病理变化。结果显示r-sHSA能显著降低CCl₄所致小鼠ALT和AST升高,恢复AST/ALT比值,降低MDA的含量。病理切片显示r-sHSA能明显减轻CCl₄对肝组织的损伤。r-HSA对CCl₄急性肝损伤小鼠具有一定的保护作用。     

一株青藏高原来源的链霉菌菌株鉴定及其抑菌活性的初步分析

根据菌株的形态和生理生化特征,结合16srRNA序列分析,将一株分离自中国青藏高原土壤的菌株167-2-28鉴定为链霉菌属放线菌。菌株167-2-28为革兰氏阳性菌,在高氏合成琼脂培养基上,基内菌丝呈红褐色,气生菌丝为灰粉色,产生浅褐色可溶性色素,孢子链为螺旋形,孢子呈椭圆形,大小约为(0.7~0.8)μm×(1.0~1.4)μm。菌株167-2-28的DNA G+C含量为68.3 mol%,以MK-9(H6)为主要呼吸醌,其细胞中主要的脂肪酸为iso-C16:0(18.6%)、anteiso-C15:0(16.6%)、anteiso-C17:0(11.5%)和summed feature 3(C16:1ω7c/isoC15:0-2OH)(14.2%)。对16s rRNA序列的分析结果显示,该菌株与S.novaecaesareae NBRC 13368T(99.57%)、S.phaeoluteigriseus ISP 5182T(99.28%)和S.pseudovenezuelae NBRC 12904T(99.21%)等菌株亲缘关系较近,与菌株S.novaecaesareae ATCC 27452T的主要区别在于:菌株167-2-28在ISP3、ISP4、ISP5和ISP7培养基上可产生气生菌丝,并能产生H2S和利用柠檬酸。初步的活性分析结果表明:菌株167-2-28在高氏合成培养基中培养时,获得的乙酸乙酯提取浸膏对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的生长具有明显的抑制作用,并对黑曲霉有较弱的拮抗活性,其最低抑菌浓度(MIC)分别为32,32,16,50,100μg/m L和>500μg/m L;而对革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌)和真菌(白色念珠菌和禾谷丝核菌)的生长无抑制作用。     

Maculosin对肺成纤维细胞纤维化相关基因表达的影响

Maculosin是从红海榄根际土壤来源的曲霉属真菌菌株CGD12发酵液中分离得到的一种二酮哌嗪类化合物,由L-脯氨酸和L-酪氨酸脱水缩合而成。在本研究中,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测了Maculosin对肺成纤维细胞株的细胞毒性,通过实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)评价了其对纤维化相关基因表达的影响。结果表明:Maculosin能明显抑制由外源转化生长因子-β₂诱导的肺成纤维细胞株的活化,对细胞外基质(ECM)成分的合成有一定的抑制作用。进一步的分析结果显示:Maculosin的抗纤维化作用可能与其抑制炎症相关因子的表达和促进ECM成分的降解过程有关。     

利用秀丽线虫进行纳米材料安全性评价研究进展

鉴于纳米材料易于进入生物体内且已经进入生活环境,有关其生物安全性及相应毒理学研究日益受到关注〔1-2〕。有关纳米材料环境暴露的致生物毒性,利用各种离体(in vitro)与在体(in vivo)生物体系已经证明了环境暴露确实存在安全     

聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

目的:探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用.方法:提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA,逆转录得到cDNA第一链,以此为模板进行PCR扩增,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系.结果:PCR扩增反应在第20～25个循环,起始模板量为0.8～2.4μg时,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系.结论:通过控制起始模板量,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DM银染技术,可以通过比较PCR扩增产物量的变化以分析目的基因表达水平的差异.     

人参白虎汤对糖尿病大鼠心肌中Glu T4基因表达的影响

目的:观察人参白虎汤不同配伍组别及活性部位对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肥大心肌中葡萄糖转运蛋白4(Glu T4)基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠,除正常对照组外,其余大鼠ip STZ(60 mg/kg)造成糖尿病模型后,随机分为9组,治疗组用人参白虎汤不同配伍组别及活性部位治疗共75 d.动物处死后取心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录得到cDNA第一链,以此为模板进行PCR扩增,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析心肌组织中Glu T4的基因表达.结果:与正常对照组相比,STZ诱导的糖尿病大鼠肥大心肌中,Glu T4基因表达下调.经人参白虎汤不同配伍组别(除人参知母组外)及其活性部位治疗后,心脏指数和心室指数与模型组相比均明显下降,Glu T4 mRNA表达上调.结论:人参白虎汤及其活性部位能上调STZ诱导的糖尿病大鼠心肌中Glu T4 mRNA表达,防止糖尿病心肌病变的发生.     

涡虫神经再生的分子机制

涡虫是具有简单中枢神经系统的模式动物之一,其神经再生过程包括受损细胞的替换以及细胞的再生过程.本文阐述并讨论了近年来利用涡虫进行神经再生研究取得的研究进展.目前,参与涡虫神经再生相关基因的时空间表达图谱己被相对清晰地勾勒出来.骨形成蛋白和Wnt信号通路已被鉴定参与神经再生的调控.在神经再生过程中,保守的轴突导向机制为神经系统网络的正确形成所必需.此外,细胞凋亡在控制细胞数量、消除多余组织和细胞以及重新塑造再生的神经系统中发挥着重要作用.而且,在涡虫中多巴胺能神经元、五羟色胺能神经元和γ-氨基丁酸能神经元可以被有效地予以标记.因此,涡虫为我们提供了一个可以在分子水平考察神经系统再生机制的新颖且具可操作性的实验研究平台.     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)在转基因烟草中的融合表达

构建人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的植物表达载体pCA1302NSF-tPA。将重组载体转入根瘤农杆菌GV3101中，通过叶圆盘法转化烟草。转化植株经PCR鉴定整合有t-PA基因，通过荧光显微镜可检测到绿色荧光蛋白(GFP)的表达。     

SARS冠状病毒半胱氨酸蛋白酶3CLpro的克隆表达及分离纯化

SARS（严重急性呼吸综合征）是由一种新型的人类冠状病毒引起的。由于SARS冠状病毒3CL蛋白酶在病毒的复制翻译中起关键作用，所以成为抗SARS药物设计的关键靶标之一。该研究中，利用以pET28a为载体的高效原核表达系统，克隆表达出SARS冠状病毒3CL蛋白酶，然后由NTA-Ni^2＋亲和层析柱对表达的蛋白进行分离纯化。3CL蛋白酶在大肠杆菌表达系统中的成功表达为今后进一步筛选抗SARS病毒药物奠定基础。