许旺细胞提取与纯化的新方法

背景:幼年动物脂肪组织中前脂肪细胞的生物学行为与肥胖的发病和防治关系密切,而采用细胞生物力学实验方法直接观测力学振荡对前脂肪细胞生物力学行为变化可为推拿按摩治疗单纯性肥胖原理研究提供更直接的实验证据.目的:通过对体外培养的幼鼠前脂肪细胞实施不同频率的机械力刺激,观测细胞活力、增殖与细胞凋亡的变化.方法:体外培养SD幼鼠前脂肪细胞.对细胞进行鉴定后,通过细胞恒温培养振荡器对前脂肪细胞实施动态机械力学刺激.根据不同处理频率分别分为0(空白对照).1.5和3 Hz共3个组,每组振荡时间均为30 min,每12 h振荡1次,共处理3 d.观察细胞活力、增殖与凋亡率的变化.结果与结论:培养初期细胞形态似成纤维细胞,油红O染色后,细胞内出现红染颗粒,证明体外培养的幼鼠细胞经鉴定为前脂肪细胞.随实验振荡力的刺激,前脂肪细胞的活力和增殖有显著抑制(P<0.05或P<0.01),但力学振荡刺激对前脂肪细胞的凋亡与空白对照组比较差异无显著性意义(P>0.05).结果提示推拿防治青少年单纯性肥胖的细胞生物学机制可能主要是通过抑制前脂肪细胞的活力和增殖而作用的.     

SD大鼠许旺细胞提取及纯化:乳鼠和成年鼠的对照(英文)

背景:许旺细胞是神经创伤修复的种子细胞,获取大量高纯度、高活性许旺细胞是研究的关键.目的:比较乳鼠和成年鼠许旺细胞的体外培养、纯化和形态学的差别,探讨简单可行的、可以获得高纯度许旺细胞的培养方法.方法:出生1～3 d SD大鼠20只和成年大鼠10只(体质量150～200 g),实验按细胞的来源分为新生组和成年组.双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞;倒置显微镜观察细胞形态、贴壁速度;细胞计数,纯度计算;MTT法检测细胞增殖能力,绘制两组许旺细胞的增殖曲线,判定增殖速度;S-100免疫化学法鉴定细胞.结果与结论:乳鼠的许旺细胞贴壁速度快于成纤维细胞,成鼠的许旺细胞贴壁速度慢于成纤维细胞,两组许旺细胞纯度均达96%以上;MTT法检测两组许旺细胞增殖均活跃,由增殖曲线显示乳鼠许旺细胞增殖更快(P < 0.05);S-100免疫化学反应均呈阳性.提示双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞,可以获取纯度高、活性良好的许旺细胞;乳鼠许旺细胞的增殖、贴壁能力更强.     

胶原酶和胰酶对胎鼠端脑神经干细胞培养的影响*☆

背景：神经干细胞为神经发育和神经功能重建的研究带来了广阔前景,其体外培养已成为神经科学的一个研究基础。 目的：比较胶原酶和胰酶对体外培养神经干细胞的作用。 方法：取孕14 d的SD大鼠,无菌条件下取胎鼠端脑,剪碎后分别用含EDTA的胰酶和Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞。 结果与结论：胶原酶消化得到的神经干细胞呈单层贴壁生长,而用胰酶消化得到的则形成聚集体;Nestin免疫荧光鉴定细胞为阳性;获取的神经干细胞纯度大于99%。提示用胶原酶可以简单而快速地获得原代单层化贴壁生长的神经干细胞。关键词：胰酶;胶原酶;神经干细胞;细胞培养;鉴定;胎鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.14.019      

五味子乙素B对人胃癌细胞MGC－803增殖和迁移能力的影响

目的：观察五味子乙素B（ Schisandrin B , Sch B）对人胃癌细胞MGC－803增殖、迁移能力及基质金属蛋白酶－9（matrix metalloproteinase 9, MMP－9）mRNA表达的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：采用CCK－8法检测50、100、200、400和800μmol／L Sch B对胃癌细胞增殖的抑制作用;光镜观察细胞生长状态变化,并计数细胞分裂指数;细胞划痕实验检测200μmol／L Sch B对细胞迁移能力的影响;定量PCR检测细胞MMP－9 mRNA的表达。结果：CCK－8结果显示,Sch B对胃癌细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;胃癌细胞经不同浓度Sch B处理24、48、72 h,光镜下可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核质浓缩及凋亡小体形成,细胞分裂指数随Sch B剂量增加和作用时间延长而降低;200μmol／L Sch B作用24、48、72 h,细胞迁移率分别为（39．57±9．14）％,（56．57±10．04）％和（68．21±11．43）％,明显低于对照组（P＜0．05）;PCR结果显示,胃癌细胞中MMP－9 mRNA表达显著低于对照组。结论：Sch B对胃癌细胞的增殖抑制呈剂量和浓度依赖性,并降低胃癌细胞迁移能力,可能与下调MMP－9基因的表达有关。     

不同浓度五味子乙素对人胃癌细胞株MGC-803增殖、凋亡的影响

目的：观察五味子乙素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用。方法：用10、50、100、200μmol/L浓度五味子乙素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果：倒置显微镜下,随着五味子乙素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当五味子乙素作用浓度是100μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞。结论：高浓度的五味子乙素可诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡,具有量效依赖关系。     

自体骨髓基质干细胞移植联合EPO治疗脊髓损伤的研究

目的：探讨自体骨髓基质干细胞（MSCs）移植联合促红细胞生成素（EPO）对大鼠脊髓损伤（SCI）治疗的效果。方法：培养与纯化骨髓基质干细胞。80只SD大鼠制备脊髓损伤模型,随机分为4组：干细胞移植组、EPO组、联合组和对照组。采用BBB法进行运动能力评分和组织切片观察来评定修复情况。结果：三个实验组与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）,三个实验组均可明显促进大鼠运动功能和损伤后组织结构的恢复,其中联合组效果更显著。结论：骨髓基质干细胞移植联合EPO具有促进大鼠脊髓损伤后神经功能的修复。     

复方五味子素B及其成分体外抑制胃癌细胞的增殖

目的:筛选复方五味子素组方最佳配比,比较复方五味子素B及其成分对胃癌细胞的增殖抑制作用.方法:采用L_4(2~3)正交设计的方法筛选药物的最佳配比.用MTT的方法观察组方及其成分对胃癌细胞的增殖抑制作用.空白对照组加培养液;阴性对照和阳性对照组分别加DMSO和5-氟尿嘧啶(5-FU).结果:高浓度五味子乙素(100 mg/L)、低浓度芦荟大黄素(50 mg/L)、低浓度黄芪多糖(50 mg/L)组方为复方五味子素B的药物最佳配比.同阴性对照组(0.427±0.018)相比,五味子乙素低浓度(0.296±0.011)和高浓度组(0.260±0.012)、芦荟大黄素低浓度(0.376±0.017)和高浓度组(0.334±0.013),复方五味素B组(0.162±0.007)在波长490 nm处的吸光度A值均显著性降低(P<0.01);增殖抑制率结果显示,五味子乙素低浓度(26.26%±4.65%)和高浓度组(39.11%±5.13%),芦荟大黄素高浓度组(21.78%±3.67%),复方五味素B组(52.06%±9.87%)抑制率均明显增高.结论:合理的中药有效成分组方可能有效提高单纯中药有效成分的作用,将中药有效成分合理组方可能是开发现代化复方中药的有效方法和途径之一.     

骨形态发生蛋白2对14d胎鼠端脑神经干细胞分化为胆碱能神经元的影响

背景:骨形态发生蛋白2可能是参与胆碱能神经元前体细胞分化的细胞外调控因子。目的:观察骨形态发生蛋白2在孕14d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元过程中的作用。方法:取孕14d胎鼠端脑,用含EDTA的胰酶和Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞,种植于涂有多聚赖氨酸的培养板,细胞原代培养24h后半量换液,加入10μg/L骨形态发生蛋白2继续培养。结果与结论:胶原酶消化得到的神经干细胞呈单层贴壁生长;Nestin免疫荧光鉴定细胞为阳性,获取的神经干细胞纯度大于99%;ChAT免疫荧光鉴定骨形态发生蛋白2可以将孕14d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元,细胞纯度大于97%。     

胎鼠端脑神经干细胞原代单层化贴壁培养

目的介绍利用胶原酶消化特点,简单而快速地实现神经干细胞原代单层化贴壁培养的方法。方法孕14d的SD大鼠无菌条件下取胎鼠端脑,剪碎后用含EDTA的Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞,种植于涂有多聚赖氨酸的培养板;Nestin免疫荧光鉴定细胞性质;计算细胞纯度。结果细胞Nestin免疫荧光阳性;获取的神经干细胞纯度>99%。结论本方法可以简单而快速地获得原代单层化贴壁生长的神经干细胞。     

骨形态发生蛋白2对14d胎鼠端脑神经干细胞分化为胆碱能神经元的影响

背景：骨形态发生蛋白2可能是参与胆碱能神经元前体细胞分化的细胞外调控因子。目的：观察骨形态发生蛋白2在孕14d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元过程中的作用。方法：取孕14d胎鼠端脑,用含EDTA的胰酶和Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞,种植于涂有多聚赖氨酸的培养板,细胞原代培养24h后半量换液,加入10μg/L骨形态发生蛋白2继续培养。结果与结论：胶原酶消化得到的神经干细胞呈单层贴壁生长;Nestin免疫荧光鉴定细胞为阳性,获取的神经干细胞纯度大于99%;ChAT免疫荧光鉴定骨形态发生蛋白2可以将孕14d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元,细胞纯度大于97%。