siRNA靶向沉默fbxl20基因对肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响

目的:通过沉默fbxl20基因,以观察基因沉默后对SMMC-7721细胞的增殖、迁移和周期分布的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine2000介导转染SMMC-7721细胞,靶向fbxl20基因的siRNA片段阻低肝癌SMMC-7721细胞株fbxl20 mR-NA表达。结果:siRNA能有效沉默SMMC-7721细胞fbxl20 mRNA的表达,沉默效率为71.49%。MTT试验实验显示:siRNA转染SMMC-7721细胞后,细胞增殖能力显著降低。Transwell小室和划痕愈合实验表明,fbxl20基因被沉默后,SMMC-7721细胞在迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达62.03%。流式细胞术检测细胞周期结果显示:转染48 h后,SMMC-7721实验组细胞G1/G0期比率(81.21%)显著高于阴性对照组(71.49%)和空白对照组(67.90%)。结论:本实验运用RNA干扰技术成功抑制了SMMC-7721细胞中fbxl20基因的表达,并且发现fbxl20基因可能与肝癌细胞的增值和迁移相关。     

小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系?方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ?BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆?将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达?以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量 RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系?结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确?载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率?转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P < 0.05)?结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化?     

siRNA干扰CXCR4基因对T24细胞侵袭力的影响

目的:研究RNA干扰下调CXCR4基因对膀胱移行细胞癌T24细胞体外侵袭力的影响。方法:根据CX-CR4基因特点,设计合成CXCR4特异性小干扰RNA(siRNA),并转染T24细胞,同时设置空白对照(转染时只加脂质体)和阴性对照(采用无关序列RNA转染)组。通过RT-PCR方法检测CXCR4mRNA的表达,采用Westernblot方法检测CXCR4蛋白的表达,用Boyden小室体外细胞侵袭模型检测细胞体外侵袭能力。结果:各组T24细胞的CXCR4mRNA、蛋白水平和穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(F=140.822、473.079和133.247,P<0.001)。siRNA转染组T24细胞的CXCR4mRNA、蛋白表达下调,体外侵袭力减弱(P<0.05)。结论:CXCR4特异性siRNA可降低膀胱移行细胞癌T24细胞体外侵袭力。     

杆状病毒介导的DNMT1 siRNA对人胰腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察介导DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因RNA干扰(RNAi)的杆状病毒载体(Bac-si-DNMT1-D)对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及毒性反应。方法:建立人胰腺癌SW1990细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:空载体组、生理盐水组、低浓度病毒组及高浓度病毒组进行实验。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测DNMT1、Bax和Bcl-2蛋白的表达;病理学及血清学检测裸鼠心、肝、肾功能变化。结果:病毒组肿瘤生长较对照组明显被抑制(P<0.05),凋亡指数显著高于两对照组(P<0.01)。病毒组的DNMT1 mRNA表达量显著低于两对照组(P<0.05)。病毒组DNMT1及Bcl-2蛋白表达低于两对照组,但Bax蛋白表达高于两对照组(P<0.01)。各组间裸鼠心、肝及肾未见异常。结论:杆状病毒介导的DNMT1 siRNA载体可以有效降低人胰腺癌裸鼠移植瘤内DNMT1基因表达,抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,且对裸鼠无明显毒性作用。     

干扰电为主综合康复治疗脊柱手术后疼痛的效果分析

目的:分析探讨干扰电为主综合康复治疗脊柱手术术后疼痛的临床效果.方法:将120例患者随机分为A组(单纯药物治疗组)与B组(干扰电为主联合药物治疗的综合康复治疗组),每组60例,比较两组的临床疗效.结果:两组患者的疼痛感随着时间的延续都得到了改善,但是B组患者的疼痛缓解所需时间较A组的短.治疗3d后A组疼痛度由Ⅲ度减轻为II度的患者明显少于B组(P<0.05).治疗7d后A组疼痛度减轻为I度的患者明显少于B组(P<0.05).治疗14d后A组疼痛度已减轻为I度的患者明显少于B组(P<0.05).结论:干扰电为主综合康复治疗脊柱手术术后疼痛能够明显改善患者术后的疼痛,缩短患者的住院时间,提高患者的生命质量,值得临床广泛推广.     

双酚A与胰岛素抵抗及2型糖尿病关系的研究进展

双酚A(BPA)是工业制造中广泛使用的一种化学物质,主要被用来制造塑料制品.日常生活中,人们通过饮食,呼吸、皮肤接触吸收BPA.BPA具有内分泌的干扰作用,被称为环境内分泌干扰物.BPA可以模拟雌激素的作用机制,影响胰岛B细胞以及雌激素敏感的组织如脂肪细胞、肝细胞、中枢神经系统,影响糖、脂代谢,引起胰岛素抵抗,影响脂肪细胞分化和脂质累积等,从而促进糖尿病的发生和发展.流行病学研究表明,BPA暴露水平过高可促进代谢性疾病,如胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生.根据目前的研究结果,文章对BPA与胰岛素抵抗及2型糖尿病发生和发展的关系进行综述.     

RNA干扰沉默CXCR4基因对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰质粒靶向沉默CXCR4基因表达,对人肝癌细胞增殖和侵袭作用的影响及其机制。方法检测不同分化程度的肝癌细胞株CXCR4表达程度。将CXCR4干扰质粒转染肝癌细胞HepG2,经G418筛选出稳定抑制细胞,使用Western blotting和Real time RT-PCR验证干扰质粒对CXCR4基因的靶向沉默效率。MTT法和Transwell小室试验检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的增殖能力和侵袭能力。Western blotting检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,免疫荧光检测MMP-2在细胞内表达。结果不同分化程度的肝癌细胞均有CXCR4表达,其中HepG2细胞表达最强。通过RNA干扰技术靶向沉默CXCR4基因,可高效、稳定地抑制CXCR4表达。CXCR4基因靶向沉默后明显抑制肝癌细胞增殖和侵袭。Western blotting提示CXCR4基因靶向沉默导致MMP-2蛋白表达明显下调。结论 CXCR4基因沉默可以抑制肝癌细胞增殖和侵袭,可能与其抑制侵袭相关分子MMP-2有关,提示CXCR4可能是肝癌治疗的一个有效靶点。     

双酚A暴露对大鼠器官结构及细胞因子表达的影响

目的研究双酚A暴露对大鼠器官结构及细胞因子表达的影响。方法F344大鼠按体重随机分为对照组和低、中、高剂量组,分别给予0、4、40和400mg/kg双酚A,观察脾脏、胸腺、肝脏、肾脏组织形态学的改变,实时定量PCR测量脾脏IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α和胸腺Fas、FasL六种细胞因子mRNA表达的改变。结果与对照组相比,高剂量组体重降低(P<0.05),脾脏白髓减少,脾小体缩小,肾小球缩小,肝脏出现肝细胞浑浊变性和纤维化,其它指标无明显改变。与对照组相比,各剂量组脾脏IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α mRNA表达均显著降低(P<0.01),胸腺Fas表达下降(P<0.01),FasL表达在低剂量组出现一个短暂的下降后(P<0.05),在中、高剂量组明显上升(P<0.01)。结论双酚A,可改变靶器官的生长、发育及生理功能,影响细胞因子的表达,进而影响机体免疫功能。     

菌核净内分泌干扰作用研究

目的研究菌核净内分泌干扰作用(雌激素和抗雄激素活性作用)。方法通过不同实验终点探讨菌核净雌激素样作用:(1)每隔5天腹腔注射给予鲫鱼不同浓度菌核净(0、50、100和200mg/kg)诱导卵黄蛋白原(VTG)的产生,2周后收集雄性鲫鱼血浆和肝脏进行VTG检测;(2)人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)中加入不同浓度的菌核净(10-10～10-4mol/L),作用3天后观察菌核净诱导细胞增殖情况;(3)雌性小鼠去势后给予不同浓度菌核净(0、125、250和500mg/kg),计算子宫脏器系数。Hershberger试验研究菌核净抗雄激素样作用:雄性大鼠去势后给予不同剂量的菌核净(0、30、60和120mg/kg),同时皮下注射雄性激素丙酮酸睾酮(TP),计算雄激素依赖组织的脏器系数。结果100mg/kg和200mg/kg菌核净能诱导雄性鲫鱼血VTG产生,200mg/kg菌核净能刺激雄性鲫鱼肝脏产生VTG,与阴性对照组相比,VTG含量差异均具有显著性(P<0.05);各剂量组菌核净对雄性鲫鱼血钙离子、血和肝总蛋白含量均无影响,但阳性对照E2能增高血钙离子水平;10-8、10-7和10-6mol/L菌核净能诱导MCF-7细胞增殖,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05);菌核净3个剂量组均能增加去势小鼠子宫脏器系数,其中250mg/kg组与阴性对照组比较差异具有显著性(P<0.05);60mg/kg和120mg/kg菌核净均能降低前列腺加精囊腺、肛提肌、球海绵体肌的脏器系数,与模型对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论菌核净具有雌激素和抗雄激素双重内分泌干扰作用。     

硫氧还蛋白还原酶2基因抗砷作用

目的 研究硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase,TrxR2)基因在抗砷细胞(As-ECV304)中的抗砷作用.方法 蛋白印迹法(Western Blot)检测As-ECV304和对照组细胞TrxR2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期分布,化学合成TrxR2基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染As-ECV304细胞,Western Blot验证干扰效率,细胞急性毒性试验检测细胞抗砷性的改变.结果 As-ECV304细胞中TrxR2蛋白水平较对照组细胞高,As-ECV304细胞G0/G1期细胞所占比例高于对照细胞.3个siRNA中有一个能特异性抑制TrxR2基因表达,干扰组细胞的生存率低于阴性对照组和未干扰组,3组细胞的半数抑制率IC50>分别为9.13,15.88和18.52 μmol/L.结论 siRNA干扰TrxR2基因表达后能明显降低抗砷细胞的抗砷性,提示该基因在细胞抗砷机制中发挥了重要作用.