白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用

目的建立一种新的快速诊断巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的方法并初步用于肾移植受者。方法采用抗ＣＭＶ抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素－生物素标记法对外周血白细胞核中ＣＭＶ抗原（即刻早期抗原和早期抗原）进行染色，诊断ＣＭＶ感染。结果共检测肾移植受者７２例，ＣＭＶ活动性感染率为４７％（３４／７２），ＣＭＶ病发病为１８％（１３／７２）。ＣＭＶ抗原阳性细胞数在ＣＭＶ活动性感染者中平均为１１．５／５万ＷＢＣ，在ＣＭＶ病者为２０．５±１７．８／５万ＷＢＣ。同时检测１０名健康人，结果均为阴性。结论该法具有快速、简便、成本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对ＣＭＶ感染的早期快速诊断。     

小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞与格列本脲共孵育的反应

目的:观察磺酰脲类药物格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)酶活性的影响.方法:实验于2003-06/2005--07在华中科技大学同济医学院实验中心完成.①用组织贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,采用两步超速离心法制备低密度脂蛋白后,运用CuCl2氧化法制备氧化低密度脂蛋白,采用100 mg/L的氧化低密度脂蛋白作用于平滑肌细胞72 h.建立泡沫细胞模型.②在平滑肌细胞和泡沫细胞分别加入格列本脲,使终浓度为200μmol/L,孵育24 h,用放射性同位素标记法检测ACAT1酶活性.结果: ①平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACAT1酶活性上升(P<0.05).②平滑肌细胞被格列本脲干预后,ACAT1酶活性无明显变化(P>0.05);肌源性泡沫细胞加入格列本脲后,ACAT1酶活性下降(P<0.05)结论:格列本脲能抑制肌源性泡沫细胞内ACAT1的酶活性,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,有可能成为防止动脉粥样硬化的有效药物.     

全麻病人应用喉罩盲探逆转插法在临床中的应用

喉罩通气（LMA）作为一种新型的气道处理技术，由于其操作简便，插入喉罩过程中不会像插入气管导管那样引起心率和血压的明显改变，以及术后咽喉痛发生率低等优点，已经越来越广泛地应用于临床。对于喉罩的插入方法，多数用盲探手指引导插入法和明视下插入法，而对于喉罩盲探逆转插法少有报道。近年来作者采用喉罩逆转插法用于全麻病人，收到了满意的效果。     

UV法测定克林霉素磷酸酯注射剂含量

克林霉素磷酸酯(Clindamycin phosphate)为化学半合成的克林霉素衍生物，它在体外无抗菌活性，进入机体后迅速水解为克林霉素而显示其药理活性。故抗菌谱、抗菌活性及治疗效果与克林霉素相同，但它的脂溶性及渗透性比克林霉素好，可静脉注射和静脉滴注给药。本品主要对革兰氏阳性球菌及厌氧菌有很强的抗菌活性。本品在紫外区没有吸收，故不宜采用紫外分光光度法测定其含量。目前多采用高效液相色谱法测定。本文利用其分子结构中含有甲硫基团，有机硫化物很容易完全被氧化生成亚砜(R2SO)并进一步形成砜(R2SO2)的原理，将克林霉素磷酸酯在酸性条件下用碘酸钾氧化硫原子释放出定量游离的碘，后者定量萃取至环己烷中呈紫红色，在520mm波长处有最大吸收，用分光光度法测定其含量。结构，重现性好。     

Box-Behnken效应面法优化大黄素/小檗碱-壳聚糖双载药纳米粒的处方工艺研究

目的优化大黄素(Emo)与小檗碱(Ber)壳聚糖双载药纳米粒的制备工艺和处方,并考察其稳定性及溶出度。方法以壳聚糖(CS)为载体,三聚磷酸钠(TPP)为交联剂,采用离子交联法包载大黄素/羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)和小檗碱,得到载药纳米粒(Emo/HP-β-CD-Ber-CS NPs),以粒径和多分散指数(PDI)为自变量,运用总评归一值(OD)法进行数据处理,采用Box-Behnken效应面法优化处方并进行验证。最后对纳米粒的最佳冻干条件进行筛选,考察保护剂种类和用量。并对制剂进行表征和溶出度考察。结果优化得到的最佳制备工艺为壳聚糖与TPP质量比为3∶1,小檗碱与载体质量比为0.166∶1,Emo/HP-β-CD与载体质量比为0.2∶1。测得Emo/HP-β-CD-Ber-CS NPs的平均粒径为(178.0±2.0)nm,PDI为0.187±0.006,平均OD值为0.9536,实测值与预测值接近。大黄素和小檗碱的载药量分别为0.34%和0.95%。稳定性考察结果表明,纳米粒胶体溶液在9 d内以4℃储存物理性质稳定,以6%葡萄糖为保护剂制得的冻干制剂效果较好,复溶迅速,再分散后的平均粒径为(161.8±4.8)nm,PDI为0.263±0.047。体外释放研究表明载药纳米粒冻干粉溶解度和溶出度显著提高。结论Box-Behnken效应面法所建立的模型能较好的用于Emo/HP-β-CD-Ber-CS NPs制剂的处方优化,精度高,预测效果较好,且Emo/HP-β-CD-Ber-CS NPs制备工艺稳定可行。     

星点设计-响应面法优选菊苣叶干燥方法和炮制工艺

目的以绿原酸和菊苣酸及浸出物含量为指标,建立菊苣Cichorium intybus叶最佳干燥方法;优选菊苣叶饮片的最佳炮制工艺,为菊苣叶的开发应用奠定基础。方法建立菊苣叶中绿原酸和菊苣酸含量测定的HPLC方法,测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为334 nm;采用绿原酸和菊苣酸及浸出物多指标确定菊苣叶最佳干燥方法;采用星点设计-响应面法对菊苣叶切制段长、干燥温度、干燥时间进行考察,以绿原酸、菊苣酸、浸出物含量及色度值、饮片外观性状等按照权重计分为评价指标并进行综合分析。结果菊苣叶最佳干燥方法为远红外干燥法;菊苣叶饮片炮制工艺条件为切制段长7 mm、干燥温度为50℃、干燥时间为17 h。结论优选出的菊苣叶炮制工艺综合评分较高,不仅最大限度保留有效成分,而且饮片色泽好,可重复性强,工艺稳定可靠。     

基于夏枯草不同生长发育时期化学成分的动态监测阐释“夏枯质优”的科学内涵

目的基于紫外(UV)和高效液相(HPLC)全息指纹图谱,化学模式识别技术与多成分定量相结合的方法,整合评价不同生长发育时期的49批夏枯草Prunella vulgaris样品化学成分的变化规律,从而阐明夏枯草由草到药的演变过程,解释夏枯草"夏枯质优"的科学内涵。方法建立不同生长发育时期49批夏枯草样品的UV和HPLC全息指纹图谱,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘法-判别分析(partial leastsquares-discriminant analysis,PLS-DA)对其进行评价,筛选出影响夏枯草分类的特异性吸收波段,并对主要差异性化学成分进行含量测定。结果建立了不同生长发育时期49批夏枯草样品的UV和HPLC指纹图谱,PCA和PLS-DA分析可直观显示夏枯草样品中总的化学组分在不同生长发育时期时动态的变化趋势,其中夏枯草枯萎期可以明显的和其他4个时期区分开来,且其他4个时期有向枯萎期动态渐变的趋势。UV指纹图谱通过PLS-DA筛选出特异性吸收波段为261 nm,HPLC指纹图谱利用PLS-DA的变量因子(VIP)分布图,筛选出VIP值大于1.3的2个色谱峰,经指认为异迷迭香酸苷和迷迭香酸,确定为主要差异性化学成分。对不同生长发育时期的夏枯草差异性化学成分进行含量测定,其中迷迭香酸的含量为0.020%～0.344%;异迷迭香酸苷的含量为0.0016%～0.0988%。多成分定量结果说明,果穗枯萎期中异迷迭香酸苷和迷迭香酸的含量明显增加。含量测定结果与指纹图谱模式识别结果一致,两者可相互验证。结论指纹图谱结合化学模式识别技术与多成分定量,多种分析方法并用,全方位整合的技术手段,实现了对夏枯草从草到药的整个生长发育过程中整体化学信息的动态监测。该方法分析全面、操作简便,为阐明"夏枯质优",规范夏枯草药材采收及全面评价药材质量提供参考。     

苦参碱固体脂质纳米粒的制备及其体外透皮研究

目的制备苦参碱固体脂质纳米粒(matrine solid lipid nanoparticles,MA-SLN),并考察其药剂学性质与体外透皮给药行为。方法采用微乳-低温固化法制备MA-SLN,以粒径、ζ电位和包封率为评价指标,通过正交试验筛选最佳处方和工艺;扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)观察MA-SLN的形态;差示扫描量热法(DSC)和X射线衍射扫描(XRD)分析苦参碱在MA-SLN中的包埋状态;体外透皮实验考察药物的透皮及释放行为。结果最佳处方工艺制得的MA-SLN包封率可达(56.12±0.82)%,激光粒度仪(DLS)检测MA-SLN的平均粒径为(196.31±6.26)nm,电位为(-37.18±2.36)mV。SEM和TEM显示MA-SLN呈规整的均匀球状或类球状结构;DSC和XRD检测可确定苦参碱可完全包裹在SLN内,苦参碱与SLN骨架材料相容性良好;体外透皮实验显示,9 h时累积透过量(ΔM)达到500μg/cm~2,且可持续释放至24 h,表明MA-SLN能够显著提高苦参碱的透皮吸收效率并具有较好的缓释行为。结论采用微乳-低温固化法制备MA-SLN,其工艺简单、周期短、可控性高,易于产业化推广;且制成的MA-SLN性能优良、透皮吸收率高与缓释行为显著,可为透皮给药制剂提供一种较好的给药模型,为苦参碱进一步开发应用奠定基础。     

Box-Behnken设计-效应面法优化延胡索乙素聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒处方和体外释药行为研究

目的 Box-Behnken设计-效应面法（Box-Behnken design-response surface method,BBD-RSM）优化延胡索乙素（THP）聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA]纳米粒（THP-PLGA-NPs）处方,并进行体外评价。方法 纳米沉淀法制备THP-PLGA-NPs,以包封率、载药量、多分散系数（polydispersity index,PDI）和粒径大小为评价指标,单因素结合BBD-RSM筛选最优处方,采用甘露醇作为冻干保护剂制备成冻干粉,将最优处方进行表征及体外释放实验。结果 最佳处方为PLGA用量为491.8 mg、油水体积比1：5.2、乳化剂质量分数为1.12%。THP-PLGA-NPS包封率为（185.07±1.06）%,载药量为（4.73±0.21）%,粒径为（181.32±7.14）nm,分别与模型预测值接近。体外释药具有明显的缓释特征,释药过程符合Higuchi模型：M_t/M_∞=0.112 4 t^1/2+0.078 0,r=0.987 9。结论 Box-Behnken实验设计可用于THP-PLGA-NPS处方的筛选,且优化后的纳米粒具有缓释作用。     

RGD环肽修饰的姜黄素/黄芩苷靶向共递送纳米脂质体的制备工艺优化及表征

目的 优化RGD环肽修饰的姜黄素（curcumin,Cur）/黄芩苷（baicalin,Bai）共递送靶向纳米脂质体（RGD-Cur/Bai-Lip）的制备工艺并进行表征评价。方法 采用乙醇注入法制备RGD-Cur/Bai-Lip,首先通过Plackett-Burman筛选实验确定超声时间、胆脂比、水合温度作为制备RGD-Cur/Bai-Lip的关键因素,然后采用Box-Behnken响应面法进行工艺优化,以姜黄素包封率、黄芩苷包封率、总载药量为考察指标,采用AHP-复相关系数法-拉开档次法进行多指标组合赋权以确定各指标权重系数并计算综合评分,从而确定RGD-Cur/Bai-Lip的最优处方及关键工艺参数。最后对其形态、粒径电位、稳定性、体外释放度及溶血性等进行表征评价。结果 优选得到的最佳工艺为胆脂比1：12,水合温度60℃,探头超声时间为10 min。RGD-Cur/Bai-Lip外观澄清透明,呈亮黄色,对光可视淡蓝色乳光,透射电子显微镜下观察形态圆整、分散均匀。平均粒径为（101.10±0.62）nm,多分散系数（PDI）为0.191 0±0.014 3,Zeta电位为（1.59±0.07）mV,姜黄素包封率为（94.28±4.51）%,黄芩苷包封率为（76.93±1.35）%,总载药量为（2.27±0.09）%。7 d内稳定性良好,无溶血性,并具有一定的缓释作用。结论 优化处方后制备的RGD-Cur/Bai-Lip包封率高,粒径分布均匀,7 d内较稳定,无溶血性,并具有一定的缓释作用,为RGD-Cur/Bai-Lip的后续抗肝纤维化体内外研究提供了制剂基础。