星点设计-响应面法优选菊苣叶干燥方法和炮制工艺

目的以绿原酸和菊苣酸及浸出物含量为指标,建立菊苣Cichorium intybus叶最佳干燥方法;优选菊苣叶饮片的最佳炮制工艺,为菊苣叶的开发应用奠定基础。方法建立菊苣叶中绿原酸和菊苣酸含量测定的HPLC方法,测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为334 nm;采用绿原酸和菊苣酸及浸出物多指标确定菊苣叶最佳干燥方法;采用星点设计-响应面法对菊苣叶切制段长、干燥温度、干燥时间进行考察,以绿原酸、菊苣酸、浸出物含量及色度值、饮片外观性状等按照权重计分为评价指标并进行综合分析。结果菊苣叶最佳干燥方法为远红外干燥法;菊苣叶饮片炮制工艺条件为切制段长7 mm、干燥温度为50℃、干燥时间为17 h。结论优选出的菊苣叶炮制工艺综合评分较高,不仅最大限度保留有效成分,而且饮片色泽好,可重复性强,工艺稳定可靠。     

肥大细胞在小鼠佐剂性关节炎疼痛中的作用及其机制研究

目的:探讨肥大细胞在完全弗氏佐剂(CFA)诱导的小鼠佐剂性关节炎(AA)疼痛中的作用。方法:实验分为4组:正常对照组(control组)、AA模型组(model组)、AA模型+色甘酸钠(CS)组(CS组)和AA模型+肥大细胞缺失组(W-4Bao组)。每组6只小鼠,前3组均为健康雌性C57BL/6小鼠,W-4Bao组为肥大细胞缺乏的KitW-4Bao小鼠。除control组注射生理盐水外,其他各组小鼠右后足底皮下注射CFA构建慢性AA疼痛模型;CS组于致炎1 d后开始腹腔注射CS(20 mg/kg),其它各组给予等体积生理盐水,每日1次,连续给药14 d。分别于致炎第0、1、3、7、10和14天测量小鼠足掌厚度、机械刺激缩爪反应阈值(PWT)和热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)。14 d后获取各组小鼠踝关节组织,组织切片进行HE和甲苯胺蓝染色,ELISA法检测踝关节组织中组胺(histamine)、类胰蛋白酶(tryptase)、P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的浓度。结果:小鼠致炎1 d后,与control组相比,model组小鼠右后足炎症表现明显,PWT和PWL显著降低(P<0.05),踝关节组织中肥大细胞和脱颗粒肥大细胞数量以及histamine、tryptase、SP和CGRP的浓度显著增加(P<0.05);与model组相比,CS组和W-4Bao组小鼠痛觉过敏减轻,细胞因子与神经肽的释放显著减少(P<0.05)。结论:肥大细胞的活化促进小鼠AA疼痛发生,其机制可能与促进神经肽和相关炎症因子的释放有关。     

由肠道菌群变化研究资木瓜总苷对K/BxN小鼠血清转移性关节炎的治疗作用

为探究肠道菌群改变与RA发生的联系及资木瓜总苷(total saponins of Chaenomelesspeciosa, TSCS)通过其变化对RA的治疗作用,建立K/BxN小鼠血清转移性关节炎模型,ELISA检测关节组织炎性因子水平;Illumina Miseq测序平台对小鼠粪便进行16S rRNA V3-V4区测序,利用GraphPad Prism 6.01软件分析肠道菌群结构差异、丰度变化及其与小鼠关节组织炎性因子水平的相关性。结果显示,TSCS能有效缓解关节炎小鼠踝关节肿胀程度并降低关节局部炎性因子水平;模型组小鼠肠道菌群丰度降低,TSCS组、肥大细胞缺乏组小鼠肠道菌群丰度增高;乳酸杆菌(Lactobacillus)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、梭菌ⅩⅣa(ClostridiumⅩⅣa)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、毛螺菌(Lachnospiracea_incertae_sedis)与炎性因子水平改变有显著相关性。由此,肠道菌群失调或可诱导关节组织炎性因子水平增高,引起疾病的发生,而TSCS通过改善肠道微生态、调节肠道菌群丰度起治疗关节炎的作用。     

酒萸肉饮片加工炮制一体化工艺

目的:优选酒萸肉产地加工与饮片炮制一体化工艺,缩短酒萸肉饮片的传统加工炮制周期,降低贮藏保管难度,提高酒萸肉饮片质量。方法:以干燥时间、温度、加酒量和蒸制时间为考察因素,采用HPLC同时测定马钱苷、莫诺苷、没食子酸、5-羟甲基糠醛的含量,结合酒萸肉饮片的外观性状,采用正交设计试验方法优选酒萸肉的产地加工工艺。色谱条件为SunFire~? C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B)梯度洗脱,检测波长为218、240 nm,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为30℃。结果:本实验优选酒萸肉产地加工一体化的最佳工艺为:每100 kg去核鲜山萸肉加25 kg黄酒浸润30 min至透,100℃干燥3 h后再蒸1 h,取出,干燥。结论:酒萸肉产地加工与炮制一体化工艺能够提高酒萸肉饮片的质量,减少酒萸肉饮片的加工炮制时间,可为酒萸肉饮片一体化工艺的实际生产提供技术支持。     

五倍子发酵炮制百药煎主要药理作用比较研究

目的研究比较五倍子发酵为百药煎后其抗炎镇痛、止咳化痰等药理作用的变化。方法采用二甲苯致耳廓肿胀法评价抗炎作用,采用热板法和醋酸扭体法评价镇痛作用,采用浓氨水致咳法和酚红模拟化痰药效结合分光光度法分别评价止咳化痰作用,分别对比五倍子发酵为百药煎后其药理作用变化;通过测定二甲苯致耳廓肿胀模型血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、白介素6(IL-6)和白介素1β(IL-1β)含量,探究其抗炎机制。结果百药煎能显著抑制热板和醋酸引起的疼痛反应(P<0.05),作用强于五倍子(P<0.05);显著抑制二甲苯致耳肿胀现象(P<0.05),降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量(P<0.05);显著降低咳嗽潜伏期时间,减少咳嗽次数(P<0.05),而五倍子差异无统计学意义(P>0.05);酚红排出量明显高于五倍子组(P<0.05)。结论五倍子发酵为百药煎后抗炎镇痛、止咳化痰作用增强,其抗炎机制可能与抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放有关。     

GC-IMS法比较不同方法炮制酒当归特异气味成分差异

目的比较酒洗、酒浸、酒炙等不同方法炮制酒当归挥发性特异气味成分差异,为建立当归不同炮制品鉴别方法和进一步研究当归传统方法炮制作用机制提供研究思路。方法气相色谱-离子迁移谱(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)对不同浓度酒洗当归及不同方法炮制当归样品挥发性成分进行检测并比较成分变化;结合SIMCA 14.1软件进行主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)分析和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)分析其挥发性成分的差异。结果 GC-IMS指纹图谱显示不同浓度酒洗当归的挥发性成分存在差异,明确定性的挥发性成分有55种单体及部分物质的二聚体和聚合物;2-辛醇、E-2-庚醛、丙酮、2-戊酮和5-甲基-2-呋喃甲醇等可作为酒洗当归的特征挥发物质;醋酸乙酯、3-甲基-1-戊醇、2-己醇和2-甲基丁酸乙酯等可作为酒浸当归的特征风味物质;糠醛二聚体、3-甲基丁醇和苯甲醛等可作为酒炙当归的特征挥发性物质;PCA结果显示,各组样品分离度良好;PLS-DA分析结果显示,2-十一烯醛、2-丁酮、丙酮等为不同浓度酒洗当归样品差异成分;OPLS-DA分析结果显示,2-十一烯醛、辛酸乙酯及二聚体、丙酮等为不同方法炮制的当归样品主要差异成分。结论 GC-IMS技术结合化学计量学方法证明当归酒洗、酒浸与酒炙挥发性成分存在差异,为进一步挖掘经方中传统炮制方法的研究提供参考。