大胚龄人神经干细胞长期冻存后的复苏培养

目的探讨长期冻存后的大胚龄人胚神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的生长及其生物学特性。方法分别于冻存后6、12及24个月,快速解冻复苏胚龄为16～20周的胎脑细胞,采用无血清培养液悬浮培养,观察培养细胞的活性及成球时间,采用免疫细胞化学方法鉴定这些细胞球及其分化成熟后的细胞表面标志。结果培养传代的细胞透亮﹑成球时间短,与取自新鲜胎脑的神经干细胞无明显区别。细胞球Nestin染色阳性,成熟分化后神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及2＇,3＇-环腺苷酸-3＇-磷酸二酯酶（CNPase）抗原呈阳性。结论长期冻存后的人大胚龄神经干细胞仍具有较强增殖能力及多分化潜能。     

转染癌基因的骨髓基质干细胞体外分化特征

目的:观察转染癌基因的骨髓基质干细胞在体外分化情况,为肝细胞癌的细胞源研究提供实验依据。方法:实验于2003-05/2004-06在南方医科大学药理教研室实验室完成。①两步法获取大鼠肝细胞,梯度离心法分离大鼠骨髓基质干细胞。②单基因转染是单独将c-myc或K-ras癌基因瞬时转染大鼠骨髓基质干细胞,6孔培养板中培养,24h后荧光显微镜下观察骨髓基质干细胞转染结果。双基因转染步骤相同,只是将c-myc和K-ras癌基因同时转染大鼠骨髓基质干细胞。③c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组常规培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基,于37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱培养,每24h半量更换培养液。④c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组将已转染癌基因的骨髓基质干细胞,置于叠加的培养板半透膜的上方(细胞密度均为1×105个/cm2),再将肝细胞置于半透膜的下方(每孔细胞密度为3×105/cm2)进行共培养,其余步骤同常规培养。⑤通过反转录聚合酶式反应和细胞免疫组化检测骨髓基质干细胞分化情况。结果:①癌基因转染24h骨髓基质干细胞检测结果:单独转染c-myc或K-ras癌基因的细胞,其绿色荧光蛋白呈均匀一致分布;双基因转染的细胞,绿色荧光蛋白呈点片状分布。②各组骨髓基质干细胞向肿瘤细胞分化检测结果:c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组的骨髓基质干细胞,均未向肿瘤细胞分化;c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞,均向肝细胞癌发展;空白对照组骨髓基质干细胞细胞均为阴性。此外,双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞分化增殖迅速,反转录聚合酶式反应和免疫组化检测发现,培养第7天出现甲胎蛋白表达,并迅速增加,而第7天出现的白蛋白和细胞角蛋白18表达迅速减弱,第14天消失。结论:转染癌基因的骨髓基质干细胞,在向肝细胞诱导的条件下,部分癌基因可以使干细胞分化为肝癌细胞;多癌基因转染时,更易于使干细胞分化为肝癌细胞。     

低分子量硫酸葡聚糖对Beagle狗外周血造血细胞动员作用的研究

为研究可供人体应用的造血干细胞动员剂，将低分子量硫酸葡聚糖（ＤＳ）给Ｂｅａｇｌｅ狗静脉注射，观察其对造血干细胞的动员作用。结果显示，注射ＤＳ１５ｍｇ／ｋｇ后１小时，外周血中ＷＢＣ、单个核细胞（ＭＮＣ）和ＣＦＵ－ＧＭ计数开始升高，３小时达到峰值，每升血中的数量分别为给药前的１．６，２．１和４．５倍。外周血中ＷＢＣ、ＭＮＣ计数随ＤＳ剂量增加而增加，注射ＤＳ６０ｍｇ／ｋｇ时ＷＢＣ、ＭＮＣ数分别为给药前的２．１和４．０倍。以１５ｍｇ／ｋｇ或３０ｍｇ／ｋｇ组狗外周血中各系祖细胞升高幅度最大，每升血中ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｍｅｇ、ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ计数分别为给药前的９．０，６．８，１０．３和１３．０倍。     

EBMT积分在异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病中的预后价值

目的 分析慢性粒细胞白血病(CML)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的危险因素,以利于更好地规避移植风险.方法 回顾性研究分析121例接受allo-HSCT的CML患者.预后评估参照EBMT积分,即Gratwohl积分,危险因素包括供者来源、患者年龄、患者移植前疾病状态、供患者性别差异、疾病确诊至移植时间.将患者分为3组:低危组(0～2分)、中危组(3～4分)和高危组(5分).结果 所有患者allo-HSCT后中位随访时间为37(1～126)个月,预期5年总生存(OS)率、无复发死亡(NRM)率及复发(RR)率分别为(56.8 ±5.0)%、(35.6±4.9)%和(12.9±3.7)%.其中低危组患者分别为(66.0±6.1)%、(28.8±6.0)%和(7.8±3.3)%,明显优于中危组[(47.2±8.7)%、(43.6±8.5)%和(18.7±8.1)%]和高危组[(16.8±15.2)%、(66.7±25.5)%和(50.0±25.0)%],差异具有统计学意义(P值分别为0.0015、0.045和0.0053).结论 EBMT危险因素积分系统能全面反映预测allo-HSCT治疗CML的疗效、复发率和移植相关死亡率.

Abstract：

Objective To analyze the risk factors of allogeneic stem cell transplantation (allo-SCT)for chroninc myeloid leukemia (CML) in an attempt to avoid transplant risks. Methods A total of 121 CML patients received allo-SCT were analyzed retrospectively. The risk analysis was based on the EBMT score (gratwohl score) which included donor type, age of patients, disease status before transplantation, donor/recipient sex match and time interval between diagnosis to allo-SCT. Patients were divided into 3 risk groups based on their EBMT score: low risk (score 0-2), inzermediate risk(3- 4 ) and high-risk (5). Results The median follow-up duration was 37(1-126) months. The estimated 5-year overall urvival (5 y-OS),non-relapse mortality (5 y-NRM) and relapse rate (5 y-RR) were (56.8 ±5.0)％, (35.6 ±4.9)％ and ( 12.9 ± 3.7) ％, respectively. The 5y-OS, NRM and RR were ( 66.0 ± 6.1 ) ％, ( 28.8 ± 6.0 ) ％ and ( 7.8 ± 3.3 ) ％ in the low risk group being significantly superior to both intermediate-risk [ (47.2 ± 8.7 ) ％,(43.6±8.5)％and(18.7 ±8.1)％] and high-risk group [(16.8±15.2)％, (66.7 ±25.5)％ and (50.0 ± 25.0) ％ ] (P = 0.0015, 0.045 and 0.0053 for OS, NRM and RR respectively ). Conclusion The EBMT risk score can effectively predict the overall outcome, relapse and transplant-related mortality of allo-SCT for CML patients.     

脐带间充质干细胞移植治疗大鼠重症肌无力的研究

脐带间充质干细胞因其来源广泛,易扩增,低免疫原性等特点被人们越来越多地应用于疾病治疗的研究中。本研究旨在为重症肌无力疾病探求一种新的应用干细胞的治疗方法。将脐带间充质干细胞(UCMSC)移植到重症肌无力大鼠中,应用免疫荧光法观察人源化细胞的分布,ELISPOT法观察MSC对B细胞原位分泌抗体的影响,Transwell试验检测分泌IFN-γ的水平。结果发现,经静脉输注的UCMSC能快速的迁移到炎症部位和局部淋巴结,而且在淋巴结的髓质区也可以检测到人源化的细胞。体外原位检测乙酰胆碱受体(AchR)抗体分泌的试验发现,当MSC与淋巴结来源的淋巴细胞充分接触,能有效地抑制AchR抗体的产生。Transwell试验显示,UCMSC与CD4T细胞直接接触,能有效地降低IFN-γ的产生,在一定程度上缓解重症肌无力体内的Th1/Th2细胞失衡的免疫状态。结论 :在重症肌无力大鼠中,MSC可能通过相互接触或/和释放细胞因子而调节机体的免疫反应,这为重症肌无力提供了一种潜在的治疗新途径。     

儿童造血干细胞移植后出血性膀胱炎：临床特征与危险因素

背景：出血性膀胱炎是造血干细胞移植后常见并发症之一，探讨其临床特征及发病的危险因素对改善造血干细胞移植效果有重要应用意义。 目的：观察小儿造血干细胞移植后出血性膀胱炎发病情况，并分析其临床特点以及发病危险因素。 设计：病例分析。 单位：中山大学附属第二医院儿科造血干细胞移植中心。 对象：选择1998—10/2004-06在中山大学附属第二医院儿科HSCT中心88例接受脐血移植与外周血造血干细胞移植患儿，男49例，女39例，年龄2-18岁，平均8．0岁。所有患儿家属对治疗知情同意。实验经过医院伦理委员会批准许可。 方法：①患儿预处理方案主要有环磷酰胺（120～200mg／kg）和马利兰（Bu，14-20mg／kg）组成为主的化疗方案。以及环磷酰胺联合全淋巴照射（2—8Gy）或全身照射（2．8Gy）组成的放疗方案。②按文献[7]及[8]标准诊断及对出血性膀胱炎分类：观察患者出血性膀胱炎发生率、临床特征、实验室检查及治疗与转归：分析年龄、性别、供受者人类白细胞抗原配型、移植病种、移植类型、移植方式、急性移植物抗宿主病的发生、巨细胞病毒感染对出血性膀胱炎发生的影响。 主要观察指标：①患儿出血性膀胱炎发生率。②临床特征与实验室检查。③治疗与转归。④出血性膀胱炎发生的危险因素。 结果：纳入患儿88例均进入结果分析。①出血性膀胱炎发生率：16例（18．2％，16，88）患儿发生出血性膀胱炎，其中轻度11例（68．7％），重度5例。②临床特征与实验室检查：患儿均有血尿，其中典型尿频、尿急、尿痛及肉眼血尿8例（50．O％）；肉眼血尿10例（62．5％）：11例蛋白尿（＋～＋＋＋），7例白细胞增高。③治疗与转归：所有出血性膀胱炎患儿均痊愈，病程2～53d。④出血性膀胱炎发生危险因素：受者移植年龄?     

自体外周血造血干细胞支持下大剂量化疗治疗淋巴瘤的护理

我院1997-02至今，对住院高危及复发的非霍奇金淋巴瘤(NHL)16例进行了自体外周血造血干细胞支持下的大剂量化疗(High-dose chemotherapy，HDT），同时开展了一系列的全环境保护及护理，疗效较好，总结如下。     

重组人白细胞介素11加速无血缘关系脐血移植血小板植入的临床研究

目的观察重组人白细胞介素11（rhIL—11）加速无血缘关系脐血移植血小板植入的情况。方法9例患者中成人6例，儿童3例。接受HLA0～2个位点不合的脐血移植。成人给予双份脐血移植，儿童给予单份脐血移植。预处理采用BU／CY或CY／TBI方案，同时加用抗胸腺细胞球蛋白（ATG）。采用环孢素联合短疗程甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病（GVHD）。移植后1天开始皮下注射rhIL-1150mg·kg^-1·d^-1和G—CSF5mg·kg^-1·d^-1促进造血重建。结果9例患者平均年龄22．3岁，平均体重52．3kg。9例患者8例白细胞植入，中性粒细胞〉0．5×10^9／L的中位时间为21．3（14～37）天；7例患者血小板植入，血小板〉20×10^9／L的中位时间为25（18～36）天。急性GVHD（aGVHD）发生率为42．9％，均为Ⅰ度。慢性GVHD（cGVHD）发生率为33．3％，为局限型。死亡3例，死亡主要原因为感染。存活的6例患者，中位随访时间为7个月，均为无病存活。预计1年总生存率为77．8％，2年总生存率为52．2％。使用rhIL-11的8例患者中5例（62．5％）出现渗漏综合征。所有患者在采取包括紫草的综合防治措施后均可耐受rhIL-11的治疗。结论rhIL-11可能有利于加速血小板的植入，降低严重aGVHD的发生率。渗漏综合征是主要的不良反应，在采取包括紫草的综合防治措施后患者耐受较好。     

不同培养条件下兔骨髓间充质细胞成骨特性的比较

目的：观察不同培养的条件下兔骨髓间充质细胞的成骨特性。方法：比较骨髓间充质细胞在普通培养基培养、诱导培养基培养和新鲜兔骨碎粒的共培养3种条件下的成骨分化特性，观察3种条件下细胞的形态及碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素水平，并用免疫组化方法检测Ⅰ型胶原、骨钙素。结果：共培养及诱导培养的间充质细胞同期ALP活性及细胞内骨钙素均显著高于普通培养组(P<0．01)，诱导培养最高；经过诱导培养及共培养的间充质细胞，其Ⅰ型胶原、骨钙素免疫组化阳性；对照组Ⅰ型胶原免疫组化弱阳性、骨钙素免疫组化阴性。结论：诱导培养及共培养条件呈现促间充质细胞向成骨方向转化的特点，诱导培养短期能使ALP、骨钙素达到较高水平。