转染癌基因的骨髓基质干细胞体外分化特征

目的:观察转染癌基因的骨髓基质干细胞在体外分化情况,为肝细胞癌的细胞源研究提供实验依据。方法:实验于2003-05/2004-06在南方医科大学药理教研室实验室完成。①两步法获取大鼠肝细胞,梯度离心法分离大鼠骨髓基质干细胞。②单基因转染是单独将c-myc或K-ras癌基因瞬时转染大鼠骨髓基质干细胞,6孔培养板中培养,24h后荧光显微镜下观察骨髓基质干细胞转染结果。双基因转染步骤相同,只是将c-myc和K-ras癌基因同时转染大鼠骨髓基质干细胞。③c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组常规培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基,于37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱培养,每24h半量更换培养液。④c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组将已转染癌基因的骨髓基质干细胞,置于叠加的培养板半透膜的上方(细胞密度均为1×105个/cm2),再将肝细胞置于半透膜的下方(每孔细胞密度为3×105/cm2)进行共培养,其余步骤同常规培养。⑤通过反转录聚合酶式反应和细胞免疫组化检测骨髓基质干细胞分化情况。结果:①癌基因转染24h骨髓基质干细胞检测结果:单独转染c-myc或K-ras癌基因的细胞,其绿色荧光蛋白呈均匀一致分布;双基因转染的细胞,绿色荧光蛋白呈点片状分布。②各组骨髓基质干细胞向肿瘤细胞分化检测结果:c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组的骨髓基质干细胞,均未向肿瘤细胞分化;c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞,均向肝细胞癌发展;空白对照组骨髓基质干细胞细胞均为阴性。此外,双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞分化增殖迅速,反转录聚合酶式反应和免疫组化检测发现,培养第7天出现甲胎蛋白表达,并迅速增加,而第7天出现的白蛋白和细胞角蛋白18表达迅速减弱,第14天消失。结论:转染癌基因的骨髓基质干细胞,在向肝细胞诱导的条件下,部分癌基因可以使干细胞分化为肝癌细胞;多癌基因转染时,更易于使干细胞分化为肝癌细胞。     

同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内的定居能力

背景：骨髓间充质干细胞具有极强的自我复制能力和多向分化潜能，但当体外分离培养的骨髓基质干细胞移植到体内后，其分布和定居情况不明，这关系到骨髓基质干细胞是否可以作为靶细胞治疗应用于临床。 目的：探索绿色荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞（MSCs），经不同途径移植到同种异体大鼠，其定居于肝脏的能力。 设计：析因设计。 单位：广东省第二人民医院普外科／中山大学博士后科研基地，南方医科大学珠江医院普通外科，中山大学附属第三医院器官移植科。 材料：实验于2003—01／2004-12在解放军第一军医大学基础部药理教研室完成。选取清洁级成年SD大鼠36只，随机分为5组：CCL4＋门静脉移植组（6只）、门静脉移植对照组（6只）、CCL4＋尾静脉移植组（6只）、尾静脉移植对照组（6只）、混合组（12只）。 方法：①从大鼠骨髓中分离培养获取骨髓间充质干细胞，以绿色荧光蛋白进行标记，体外扩增后，以细针移植骨髓间充质干细胞悬液，移植量为0．5mL／100g。②CCL4＋门静脉移植组：骨髓间充质干细胞移植前3d，每天按20g／L的CCL4 2．5mL／kg体质量灌胃饲养，首次计量加倍，标记的骨髓间充质干细胞从门静脉移植。门静脉移植对照组：骨髓间充质干细胞移植前正常饲养，标记的骨髓间充质干细胞从门静脉移植。CCL4＋尾静脉移植组：骨髓间充质干细胞移植前3d，每天按20g／L的CCL4 2．5mL／kg体质量灌胃饲养，首次计量加倍，标记的骨髓间充质干细胞从尾静脉移植。尾静脉移植对照组：移植前正常饲养，标记的骨髓间充质干细胞从尾静脉移植。混合组：前4组条件下，各设2只大鼠移植未标记的骨髓间充质干细胞；另设CCL4喂养3d和正常喂养大鼠各2只，不行骨髓间充质干细胞移植。③于移植后的第3，7天，通过荧光定量     

荧光标记在埃博拉出血热院感防控中的应用

目的加强医务人员培训和考核,提高埃博拉出血热医院感染防控水平。方法医务人员穿戴防护用品后,在手套、面罩、防护服、鞋套外层用荧光粉和荧光笔进行标记,脱摘防护用品后用紫外线手电筒进行检查。用荧光笔标记埃博拉隔离病区高频接触率物体表面,清洁消毒后,用紫外线手电筒进行检查和评估。结果穿脱防护用品易发生荧光污染的部位依次为手(8.16%)、颈背侧(6.12%)和前额、小腿(4.08%);隔离病区床头柜、输液架和监护仪的荧光标记清除率较高(96.67%),电视按键、设备带和墙面的清除率较低,分别为55.23%、51.77%、51.77%。结论运用荧光标记的方法,能较科学、客观地检验医务人员个人防护水平和隔离病区清洁消毒的落实情况,值得在埃博拉出血热医院感染防控中推广应用。     

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌移植瘤生长的作用

目的:检测Survivin反义寡核苷酸(ASODN)在人肝癌耐药细胞株裸鼠皮下移植瘤中的表达情况．方法:将30只裸鼠建立人肝癌耐药细胞系 SMMC-7721／ADM皮下移植瘤模型,随机分成6组:空白对照组(A)、脂质体转染对照组 (B)、正义链对照组(C)、200(D)、400(E)和 600 μg/L(F)反义链组(ASODN组),用不同的转染液注射后2,4,8,12,16,20 d,用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印迹法检测治疗后各组肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白表达的变化．结果:注射后20 d,ASODN组肿瘤细胞生长明显抑制,空白对照组、脂质体转染对照组和正义链对照组裸鼠的mRNA和蛋白表达无明显差异,而ASODN组mRNA和蛋白表达随着时间和浓度的增加,Survivin表达减弱,E,F组与其余个组(A,B,C,D)相比有显著差异(mRNA: 0．33±0．04,0．28±0．03 vs 0．82±0．02,0．78± 0．05,0．72±0．04,0．57±0．03,P<0．05;蛋白: 34．9±3．89,21．2±3．65 vs 72．14±6．53,69．31 ±5.34,68．29±4．98,53．8±5．23,P<0．05)．结论:Survivin反义寡核苷酸能够下调 Survivin mRNA和蛋白的表达,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长．     

同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内定居能力初步研究

目的 探索绿色荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经不同途径移植到同种异体大鼠后其定居于肝脏的能力。方法 从大鼠骨髓中分离培养获取MSCs,以绿色荧光蛋白进行标记,体外扩增后,分别从大鼠尾静脉和门静脉注入同种异体正常和肝脏损伤大鼠体内,于移植后的第3、7天通过荧光定量PCR检测移植的MSCs在大鼠肝内的表达情况。结果 所有大鼠移植同源异体MSCs后全部存活,无意外死亡。从门静脉、尾静脉注入MSCs,在大鼠肝脏受损时其定居量大于非肝脏受损大鼠(P<0.05)。在肝细胞受损大鼠,从门静脉注入MSCs与从尾静脉注入比较肝脏定居量差异不显著(P>0.05)。非肝脏受损大鼠,从门静脉注入MSCs与从尾静脉注入比较细胞定居于肝脏量差异显著(P<0.05),并与移植后时间有关。结论 干细胞定居于肝脏的时间与细胞数量可能与肝脏是否受损伤关系密切,与移植途径关系不密切;在正常动物干细胞可定居于肝脏,定植的细胞量与移植途径和移植后时间有关。     

射频消融对复发性肝细胞癌外周血循环肿瘤细胞的影响

目的:探讨射频消融术治疗复发性肝细胞癌对外周血肝癌细胞的影响.方法:分别采集23例复发性肝细胞癌患者射频消融治疗前、后和5位健康对照者外周血,免疫磁珠技术分离血中游离肝癌细胞,常规病理和AFP免疫组化染色验证分离到的肝癌细胞.结果: 23例复发性肝癌患者,术前外周血肝癌细胞阳性15例(65.22%),射频消融治疗1次后第1、3天,外周血肝癌细胞阳性分别为13例(56.52%)和6例(26.09%).射频消融治疗前和治疗后1 d的阳性率比较,差异无统计学意义;而治疗前和治疗后3 d、治疗后1 d和3 d的阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:射频消融治疗复发性肝癌可以有效地预防或阻止肝癌血行播散.     

热疗联合MMC诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2表达

近年来许多学者逐渐认识到凋亡与肿瘤关系是当今肿瘤研究的热点,因为恶性肿瘤的产生和发展,不但是由于细胞的无限增殖,还由于细胞内部控制细胞死亡通道即凋亡(apoptosis)的机制障碍或二者失去平衡所致。我们应用流式细胞仪、电镜和琼脂糖DNA电泳,研究热疗联合MMC对诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2基因表达的作用,并初步探讨其机制。 1 材料和方法 1.1 材料人大肠癌细胞株(LoVo)由第一军医大学病理教研室提供。丝裂霉素C为日本东京协和发酵工业株式会社产品。碘化丙锭(propidium iodide,PI)是美国Sigma公司的产品。RNA酶为中国科学院生物化学研究所产品。 1.2 方法 LoVo细胞常规贴壁于37℃,50mL·L~(-1)CO_2孵箱     

肝胆管结石首次手术治疗的时机选择

目的探讨临床诊断肝胆管结石的患者的手术时机选择,对治疗效果及其术后并发症的影响。方法回顾性分析1996～2005年本院收治的85例肝胆管结石患者的手术时机选择,手术方式与术后并发症及结石残留等的关系情况。结果术前4周内曾有胆管炎发作症状(急症期)而行手术治疗31例中,术后结石残留率38.7%(12/31);术前胆管炎控制以后4周(择期手术)才行手术治疗54例中,术后结石残留率20.4%(11/54)。急症期与择期手术组结石残留率比较差异具有统计学意义(p<0.05)。结论根据肝胆管结石的临床表现,严格掌握手术指征,选择手术时机,避免急症期内被动手术和减少再次手术率,可减少术后并发症和残留结石发生,提高疗效。     

肠梗阻导管在腹部术后早期炎性肠梗阻治疗中的应用

目的探讨经鼻型肠梗阻导管在腹部术后早期炎性肠梗阻治疗中的作用。方法对我院2004年6月至2006年6月期间40例腹部术后早期炎性肠梗阻患者,随机分成经鼻型肠梗阻导管组和鼻胃管组。观察腹胀改善情况(腹围)、胃肠减压量、腹部X线平片、气液平面消失时间等指标,对结果进行分析比较。结果经鼻型肠梗阻导管组患者的胃肠减压量(1021.2±265.4)ml/d较鼻胃管组(642.5±325.4)ml/d明显增多,且腹围(15.2±5.5)cm减少较鼻胃管组的(5.7±3.6)cm更明显,气液平面消失时间(10.3±8.5)d较鼻胃管组的(15.6±11.7)d明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经鼻型肠梗阻导管能更有效胃肠减压,减轻腹胀,促进肠蠕动,治疗腹部术后早期炎性肠梗阻作用显著。