qPCR快速检测金黄色葡萄球菌及MRSA方法的建立及评价

目的建立q PCR法快速检测金黄色葡萄球菌及其mec A基因,以期快速精准诊断金黄色葡萄球菌感染及初步判断耐药情况。方法从NCBI数据库下载金黄色葡萄球菌nuc、atl、ica B、fnb A、hla、srap基因序列用于鉴定标志筛选,mec A基因序列用于MRSA标志筛选;经DNA MAN比对后,选择各基因保守区分别设计1~2套引物、探针,建立单重及双重q PCR,用临床分离株及标准菌株筛选出检测性能最好的基因片段作为检测标志物,建立金黄色葡萄球菌鉴定和耐药双重q PCR检测方法,并进行性能评价。结果经筛选,金黄色葡萄球菌atl基因(CP009361.1:1010217~1010341)、mec A基因(KF058908.1:1715~1843)两片段检测性能最优,将其作为标志物建立双重q PCR法。该方法的检测下限均低至4 copies/反应;扩增线性范围均达2.0×102~8copies/m L。335份金黄色葡萄球菌(含94份MRSA)培养阳性的患者样本中,q PCR法分别检出SA 335份,MRSA 94份;95份金黄色葡萄球菌培养阴性的患者样本中,q PCR法分别检出SA 17份,MRSA 4份,经PCR产物测序,与标准菌株同源性均≥90%。双重q PCR法从样品处理到报告结果≤2.0 h。结论 q PCR法方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可望提高金黄色葡萄球菌感染的诊断能力并实现快速检测,为尽早精准治疗赢得时间。     

高糖高脂饲料喂养时间对建立妊娠期糖尿病小鼠模型的影响

目的探讨高糖高脂饲料喂养时间对妊娠期小鼠体重、糖脂代谢和胰腺、肝脏病理改变的影响。方法 C57BL/6 J雌性小鼠随机分为正常对照组和高糖高脂饲料喂养时间不同组,H1组交配前先后用普通饲料和高糖高脂饲料各喂养1个月,H2组交配前用高糖高脂饲料喂养两个月,而后两组均继续高糖高脂饲料喂养至实验结束。于孕7、10、14和17天测量小鼠体重、摄食量、能量摄入量和血糖水平。孕第17天处死小鼠,进行血清糖脂代谢指标测定和胰腺、肝脏的病理学检查。结果 H1、H2组体重在孕前多个时间点均大于正常对照组;三组体重在孕期多个时间点均表现为:H2组H1组正常对照组。在孕第10天,血糖水平表现为:H2组H1组正常对照组。在孕第17天,三组血糖、胰岛素水平差异不大,但β细胞功能指数逐渐减小。血脂方面,H1、H2组低密度脂蛋白胆固醇水平高于正常对照组。病理学检查发现,正常对照组胰岛和肝脏形态正常,其他两组均存在部分胰岛增生肥大和肝脏脂肪沉积,且H2组比H1组更为严重。结论通过调控高糖高脂饲料的喂养时间可观察到C57BL/6 J小鼠妊娠期糖尿病渐进性发展的过程。     

运动干预对糖尿病前期人群KCNJ11基因多态性与糖脂代谢关系的影响

目的分析运动干预对糖尿病前期人群的钾离子内向整流通道蛋白亚单位11(KCNJ11)基因多态性与糖脂代谢关系的影响。方法于2017年1—3月采用分层整群随机抽样方法,对山东聊城市5个社区46例糖尿病前期人群进行8周的运动干预,在运动干预前后进行KCNJ11基因多态性分析与糖脂代谢指标检测,并探讨两者之间的相关性。结果与运动干预前相比较,运动干预8周后,46例糖尿病前期人群的空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白及血脂均明显改善(P0.05)。KCNJ11基因多态性分析可见,运动干预后rs5219位点的CC基因型人群的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)脂代谢指标变化较TT、CT基因型更显著(t=2.635、3.213和2.048,P=0.012、0.003和0.048),运动干预后rs2285676位点的GG基因型人群的空腹血糖、糖化血红蛋白糖代谢指标变化较AA、AG基因型更显著(t=2.236和2.062,P=0.034和0.049)。结论 KCNJ11基因rs5219位点的CC基因型与rs2285676位点的GG基因型,可作为糖尿病前期人群运动干预时评价糖脂代谢指标变化的优势基因。     

北京海淀区儿童青少年体脂现状及影响因素分析

了解北京市海淀区儿童青少年体脂率现状,为制定儿童青少年肥胖干预措施提供参考.方法 随机选取北京海淀区参加体能测试的807名中小学生进行身高、体重和体质量指数(BMI)测量.根据生物电阻抗法测量人体成分原理,利用人体成分分析仪测得体脂率.结果 体脂率男生为(22.19±8.34)%,女生为(24.65±6.66)%(t=-4.641,P<0.01);13~15岁男生体脂率均低于女生;男生体脂率均值6~12岁逐年增长,13 ~ 15岁逐年减少;女生体脂率均值除15岁外呈逐年增长趋势.不同营养状况下,男、女生体脂率由大到小为肥胖组、超重组和非超重组(F值分别为212.257,128.816,P值均<0.01).多元线性回归分析结果表明,体脂率随BMI增加而增加(β=1.876,P<0.01).结论 北京海淀区儿童体脂率较高,且存在BMI、性别和年龄的明显差异.     

p53介导蜕膜化受损致复发性流产的研究进展

复发性流产（RSA）病因复杂,约50%的RSA患者病因不明,其中由于蜕膜化受损所致的胚胎反复丢失成为学者关注的焦点。p53通过参与多种信号通路介导蜕膜化受损从而引发RSA。其中p53/p21信号通路过度激活可干扰细胞周期调控因子的表达,使细胞周期进入停滞状态,蜕膜多倍体化障碍,转而促进细胞凋亡,影响胚胎着床。而在雌二醇（E2）/p53-白血病抑制因子（LIF）-信号转导和转录激活因子3（STAT3）信号通路中,p53在雌激素的协同作用下促进植入期子宫内膜腺体分泌LIF,并激活JAK/STAT信号通路,为胚胎着床创造有利条件。研究表明,参与调控p53信号通路的长链非编码RNA（lncRNA）功能异常及p53通路基因多态性均可影响p53的活性,从而影响蜕膜化及妊娠结局。现就近年来国内外p53蛋白家族及其通路参与蜕膜化的相关研究进行综述。     

NGAL与妊娠相关疾病的研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）作为脂质运载蛋白lipocalin家族的新成员,是一种脂肪细胞因子,亦是一种炎症因子。NGAL在机体中参与不同的生理、病理过程,涉及胚胎发育、细胞分化、细胞凋亡、肿瘤的发生及发展、炎症免疫反应、糖脂代谢及胰岛素抵抗等。妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）及早产等是常见的妊娠相关疾病,其发生、发展与机体的炎症反应、糖脂代谢及胰岛素抵抗关系密切,这些疾病严重影响妊娠结局和母婴的预后情况。NGAL的生物学功能使其在妊娠期高血压疾病、GDM及早产等妊娠相关疾病中亦发挥重要作用。本文对NGAL及其与妊娠相关疾病的研究进展进行综述。     

欣母沛对前置胎盘剖宫产患者的止血效果及氧化应激水平的影响

目的：探讨欣母沛对前置胎盘剖宫产患者的止血效果及氧化应激水平的影响。方法：回顾性分析2015年1月-2017年2月青海省人民医院前置胎盘行剖宫产产后出血患者98例,依据治疗方法分为对照组（51例）和观察组（47例）,对照组给予宫腔纱条填塞（宫纱填塞）止血治疗,观察组在对照组的基础上给予欣母沛注射液。对2组患者的出血量、氧化应激水平及应激激素水平进行检测。结果：观察组患者术中、产后2 h及产后24 h出血量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2组患者术后活性氧簇（ROS）及丙二醛（MDA）水平均较术前升高,超氧化物歧化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）水平均较术前降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组术后ROS及MDA水平均低于对照组,SOD及CAT水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;2组患者术后去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）及皮质醇（Cor）水平均较术前升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;术后观察组NE、E及Cor水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：欣母沛注射液辅助治疗前置胎盘产后出血效果显著,且能有效降低患者氧化应激水平,减轻应激反应,值得临床进一步推广使用。     

pT67M54稳定单克隆细胞株（系）的建立

将一个拟定的目的重组基因构建转染进入一个具有优异品质的包装细胞，建立组合特定目的基因载体的独一无二的稳定单克隆细胞株(系)是一项极为艰苦、富有挑战而又非常重要的工作。根据研究的需要，我们选择和决定将经过一再测试已成功表达的新构建质粒pM54转染进入pT67细胞以建立能生产逆转录病毒(含特异启动子及目的基因)的稳定单克隆细胞株(系)。     

三七叶的化学成分及其抗氧化活性研究

目的研究三七Panax notoginseng叶乙醇提取物的化学成分及抗氧化活性(ABTS和DPPH)。方法利用硅藻土、硅胶、MCI柱色谱、凝胶柱色谱、中压制备液相色谱和制备液相等色谱技术进行分离纯化,并应用质谱、核磁共振等波谱技术鉴定化合物结构。初步考察了这些化合物的抗氧化能力。结果从三七叶95%乙醇提取物的氯仿、丙酮-乙醇(4∶1)和丙酮-乙醇(1∶1)3个洗脱部位中分离鉴定了15个化合物,分别为falcarinol(1)、γ-tocopherol(2)、(5S)-3α-acetyl-2,3,5-trimethyl-7α-hydroxy-5-(4,8,12-trimethyltridecanyl)-1,3α,5,6,7,7α-hexahydro-4-oxainden-1-one(3)、picrionoside B(4)、linarionoside A(5)、viburnolide A(6)、槲皮素(7)、lilyn(8)、茵芋苷(9)、阿彼斯基姆素(10)、daphnin methylether(11)、20(S)-人参皂苷Rh2(12)、人参皂苷F2(13)、20(R)-人参皂苷Rh2(14)、异人参皂苷Rh3(15)。结论化合物3、6、9~11为首次从人参属植物中分离得到,化合物2、4为首次从该植物中分离得到。化合物2、4、7、8具有较强的抗氧化活性。     

基于UFLC-IT-TOF-MS技术的牡荆子中2个木脂素在大鼠体内代谢研究

目的对牡荆子中2个木脂素单体化合物6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-羟甲基-7-甲氧基-3,4-二氢-2-萘醛(VB-1)和vitedoin A(VB-2)在大鼠体内的代谢情况进行研究。方法采用超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱(UFLC-IT-TOF-MS)技术,鉴定大鼠分别ig给予2个木脂素单体化合物后,粪便、尿液、胆汁、血浆中的代谢产物。结果发现并确证了2个木脂素原型及其11个代谢产物在大鼠体内的存在。通过代谢产物鉴定分析了其主要代谢途径,发现在大鼠体内这2个木脂素成分发生了葡萄糖醛酸化、硫酸化、羟化、羟化硫酸化、还原葡萄糖醛酸化和还原硫酸化等代谢反应。结论通过对2个木脂素单体化合物代谢产物的分析,基本阐明了其在体内的代谢过程,为进一步的药理活性及其机制研究提供了依据。