阿霉素肾病大鼠不同病理时期自噬体的形成及自噬相关蛋白的表达及分布情况及其与肾组织损伤、肾脏疾病进展的关系分析

目的探讨阿霉素肾病(AN)大鼠自噬体在不同病理时期的形成和自噬相关蛋白表达、分布及其与大鼠肾脏疾病进展、肾组织损伤程度的相关性。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(于鼠尾静脉注入生理盐水)与实验组(于鼠尾静脉注入阿霉素6. 5 mg/kg),两组各20只。密切监测并比较两组大鼠15 d、30 d、45 d、60 d时血清尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、总胆固醇(TC)、白蛋白(Alb)及24 h尿蛋白定量(24 h UPQ)水平的变化情况,观察两组大鼠足细胞结构和自噬体的形成及肾脏组织病理学变化情况。采用免疫荧光染色法对自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ在两组大鼠肾组织中的分布情况进行检测,并用Western蛋白印迹法对三种蛋白表达水平进行检测。结果实验组第15天时血清Alb明显降低,24 h UPQ显著增高,第30天时TC显著增高,与对照组相比存在显著性差异(P 0. 05);实验组第30天时血清BUN和SCr出现轻度增高,第45天时肾功能损伤加重,且出现进行性加重,与对照组相比存在显著性差异(P 0. 05)。光镜下观察实验组大鼠肾脏组织病理改变可见早期由微小病变肾病逐渐进展为局灶节段性肾小球硬化。透射电镜下观察大鼠早期存在系膜细胞增生,细胞器(如溶酶体等)分布和形态异常改变,足突增宽且出现弥漫性融合的现象,晚期观察可见足突消失和核固缩现象。免疫荧光染色结果可见对照组大鼠肾组织自噬能力较差,但在实验组中,随着肾脏疾病的进展,大鼠自噬能力进一步提高,且保持在较高水平。经Western蛋白印迹法检测结果所示,随着肾脏疾病的进展,实验组大鼠自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达明显提高,且与对照组相比存在显著性差异(P 0. 05)。结论随着AN病情程度的进展,大鼠肾功能损伤加重,且出现进行性加重,同时自噬能力进一步提高,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达明显增高。提示自噬在AN大鼠肾组织损伤和蛋白尿的产生过程中可能起到重要作用,且与AN大鼠肾脏疾病进展程度可能存在密切关系。     

载巯基化阿霉素的中空金纳米粒的制备与光热性能研究

目的 制备一种载阿霉素（DOX）的中空金纳米粒（HGNPs）载体。方法 合成巯基化阿霉素（DOX-SH）,通过质谱（MS ESI）和核磁共振氢谱（1H-NMR）对其结构进行表征,再将其以金硫键共价结合方式负载到中空金纳米粒表面。通过粒径、等离子共振吸收（SPR）、透射电子显微镜（TEM）、近红外（NIR）激发的光热转化实验和细胞毒性实验对制备的中空金纳米粒载药体系进行评价。结果 质谱显示,合成的巯基化阿霉素的分子量为616,核磁共振氢谱所示的结构也与目标产物相符。阿霉素-中空金纳米粒复合载药体系(HGNPs-DOX)的粒径为70 nm左右;等离子共振吸收最大吸收波长为800 nm左右,具有良好的光热转化能力;透射电子显微镜显示,其为中空圆球形结构,壳厚4~6 nm;细胞毒性显示,在高浓度时,阿霉素-中空金纳米粒复合载药体系能显著减小阿霉素的毒性。结论 成功合成了阿霉素-中空金纳米粒复合载体,其具有良好的结构,良好的光热转化能力,较小的细胞毒性,未来可成为有研究前景的新一代化疗联合光热治疗的递送载体。     

舒尼替尼耐药内皮细胞HMEC-su与EndMT的关系及其耐药特性

目的：研究舒尼替尼（sunitinib）耐药内皮细胞HMEC-su细胞的耐药特性,并对其与内皮间质转化（EndMT）之间的关系进行初步探讨。方法：结晶紫染色法观察HMEC-su细胞的形态学变化;MTT法检测HMEC-su细胞对阿霉素（DOX）的敏感性,并计算耐药指数（resistance index,RI）;罗丹明123（rhodamine 123,Rho 123）外排实验评价HMEC-su细胞的耐药性;流式细胞仪检测细胞周期分布;划痕修复实验评价细胞的迁移能力;Western blot实验检测HMEC-1和HMEC-su细胞中EndMT相关蛋白血管内皮细胞钙黏素（VE-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达差异。结果：与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞的形态发生明显变化,增殖速度减慢;HMEC-su细胞对DOX产生交叉耐药,RI为2.15（P<0.01）;Rho123蓄积实验显示,与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞内Rho123荧光强度明显降低（P<0.01）,给予维拉帕米（verapamil,VRP）处理1 h后,HMEC-su细胞中Rho123荧光强度明显升高（P<0.01）;与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞G₀/G₁期的细胞比例显著降低（P<0.01）,然而S期和G₂/M期显著增加（P<0.01,P<0.05）;划痕修复实验表明HMEC-su细胞的迁移能力明显高于HMEC-1细胞（P<0.01）;Western blot实验表面,与HMEC-1细胞比较,HMEC-su细胞中VE-cadherin表达显著降低（P<0.01）,α-SMA蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论：HMEC-su细胞对DOX产生了交叉耐药,其细胞形态和周期分布存在着明显变化,初步确定EndMT与HMEC-su细胞耐药性的产生有关。     

靶向乳腺癌干细胞谷胱甘肽响应纳米粒的构建及其表征

目的以壳聚糖(CS)和泊洛沙姆(P123)为胶束材料,以透明质酸(HA)为靶向配体,以阿霉素(DOX)为模型药物,构建靶向乳腺癌干细胞的谷胱甘肽(GSH)响应纳米粒。方法合成GSH敏感材料P123-DPC-CS-HA,利用红外(FT-IR)、核磁氢谱(~1H-NMR)等方法对其进行表征;通过溶血实验和MTT法评价材料P123-DPC-CS-HA的安全性;通过改变温度、复溶水用量和探头超声时间等筛选DOX@P123-DPC-CS-HA制备工艺;通过紫外分光光度法、Zeta电位及激光粒度分析仪(DLS)和透射电镜(TEM)等方法对DOX@P123-DPC-CS-HA进行表征;采用透析法评价DOX@P123-DPC-CS-HA的体外释药特性。结果波谱学结果表明,P123-DPC-CS-HA为目标化合物;P123-DPC-CS-HA无明显溶血作用,且对MDA-MB-231细胞无明显毒性作用;DOX@P123-DPC-CS-HA平均粒径约为137 nm,载药量为5.69%,TEM显示其为球形;稳定性实验结果显示,DOX@P123-DPC-CS-HA在含有20%胎牛血清的PBS溶液中可以稳定存在5 d;体外释药结果表明,DOX@P123-DPC-CS-HA对DOX的释放具有GSH浓度依赖性。结论胶束材料P123-DPC-CS-HA生物相容性好,其所制备的胶束粒径小、载药量高且具有良好的释药特性,值得进一步的体内外研究。     

共载阿霉素-碳点@磷酸钙脂质纳米粒的制备与评价

目的制备共载阿霉素-碳点@磷酸钙脂质纳米粒(Doxorubicin-carbon dots@lipid coated calcium,DOX-CDs@LCP NPs),并对其载药性能及体外释药行为进行评价。方法采用反相微乳法制备DOX-CDs@LCP NPs,考察钙/磷比值,内水相pH值及搅拌速度对纳米粒外观的影响;并对阿霉素和碳点浓度对制剂载药量的影响进行考察。通过激光散射粒径测定仪测定粒径和电位,采用透射电镜表征纳米粒形态。同时以不含碳点的纳米粒(DOX@LCP NPs)作为对照。比较两种制剂在体外释药行为上的差异。结果 DOX-CDs@LCP NPs带有磷酸钙内核,外层有磷脂包裹,平均粒径为133.9 nm,zeta电位为-20 mV,包封率和载药量质量分数分别为(64.38±2.4)%、(12.22±0.53)%;在生理条件下,DOX-CDs@LCP能够延缓药物释放达29.9%;在酸性环境下,药物释放加速,累积释放量可达78%。结论 DOX-CDs@LCP NPs具有较高的载药量和体外释药性能。     

BADT方案对多发性骨髓瘤的疗效

目的观察硼替佐米、阿霉素、地塞米松、沙利度胺(BADT)方案对多发性骨髓瘤(MM)的疗效。方法选取2015年5月至2018年4月中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院收治的76例MM患者,按照治疗方法分组,两组各38例。对照组接受硼替佐米、地塞米松治疗,观察组接受BADT方案治疗。对比两组疾病总缓解率、治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)水平、骨髓浆细胞比例、不良反应发生率。结果观察组疾病总缓解率(78.95%)高于对照组(55.26%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组血清VEGF水平、骨髓浆细胞比例低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组不良反应发生率(42.11%)与对照组(26.32%)比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BADT方案可提高MM治疗效果,降低患者血清VEGF水平及骨髓浆细胞比例。     

应变率成像评价表阿霉素复合药物心脏毒性对左室心肌局部心功能影响的研究

目的探讨应变率成像技术评价乳腺癌术后患者表阿霉素复合药物心脏毒性对左室心肌局部收缩及舒张功能影响价值。 方法133例乳腺癌患者分为3组：A组45例，给予表阿霉素总剂量180～240mg／m^2；B组48例，给予表阿霉素总剂量≥360mg／m^2；C组为对照组，40例，未给予化疗。对3组患者心脏进行常规超声测量及心肌各节段SR参数测定，包括：收缩期峰值（SRs）、舒张早期峰值（SRe）、舒张晚期峰值（SRa）等。 结果A组与C组间各参数无显著性差异（P〉0．05）；B组与C组间常规超声参数（E／A除外）、收缩期SR（SRs）无显著性差异（P〉0．05），B组参数E／A、舒张早期SR（SRe）、舒张晚期SR（SRa）显著减低，与C组有显著性差异（P〈0．01）；A组的SRe、SRa与B组有显著性差异（P〈0．01），余参数无显著性差异（P〉0．05）。 结论应变率成像可以准确评价乳腺癌术后患者表阿霉素复合药物心脏毒性对左室心肌局部收缩及舒张功能变化。     

阿霉素预处理替代缺血预处理提供鼠皮瓣缺血耐受的实验研究

目的探讨阿霉素预处理提供鼠皮瓣缺血耐受的可能性及其作用机制。方法健康成年SD大鼠24只,雌雄各半,体重250～300 g,随机分为A、B、C 3组(n=8)。于各组大鼠腹部制备以腹壁浅血管-神经束为蒂、大小为6 cm×3 cm的岛状皮瓣,A组不作处理;B组用微血管夹阻断腹壁浅血管血流10 min,松开后再灌注10 min,反复4次;C组经腹壁浅静脉推注阿霉素(1 mg/kg)。24 h后于皮瓣蒂部夹闭腹壁浅血管4 h,再灌注2 h,制备缺血再灌注损伤模型。术后观察大鼠存活情况,于缺血再灌注损伤后0、8、12、24、30 h各组取皮瓣检测丙二醛(malonyldiadehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;于缺血再灌注损伤后7 d测量皮瓣成活率后处死大鼠,取皮瓣行组织学观察。结果实验中共5只大鼠死亡,其中A、B组各1只,C组3只,均给予补充。缺血再灌注损伤后7 d,A组皮瓣成活率为10.10%±0.43%,小于B组91.63%±1.76%及C组92.75%±1.48%,差异均有统计学意义(P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(t=0.29,P=0.77)。缺血再灌注损伤后0 h 3组间MDA和SOD含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);8 h后各时间点A组与B、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。组织学观察示,A组炎性细胞浸润较B、C组明显,纤维增生减弱;B组与C组皮瓣组织学改变相似。结论阿霉素预处理可以提供鼠皮瓣缺血耐受,保护皮瓣减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与诱导内源性保护物质的产生有关。     

黄葵胶囊对阿霉素肾病大鼠肾组织MCP-1表达及对肾组织病理损伤的影响

目的探讨黄葵胶囊对阿霉素肾病(AN)大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达及对肾组织病理损伤的影响。方法选择30只清洁级雄性SD大鼠作为实验动物,分为正常组大鼠10只,剩余的20只为建模大鼠。根据随机数字表法,将这20只大鼠分为模型对照组(n=10)及治疗组(n=10)。分析各组大鼠一般状况、比较各组24h尿蛋白定量变化情况、不同时点血生化指标水平、不同时点肾组织光镜检查结果、不同时点肾组织MCP-1阳性表达情况。结果(1)第2周、第8周模型对照组与治疗组24h尿蛋白定量水平均高于相应时点的正常对照组大鼠24h尿蛋白定量水平(P均<0.05),且治疗组24h尿蛋白定量水平均分别显著小于模型对照组对应时点的24h尿蛋白定量水平(P均<0.05);(2)第2周、第8周模型对照组与治疗组血Scr水平均高于相应时点的正常对照组大鼠血Scr水平(P均<0.05),且治疗组血Scr水平均分别显著小于模型对照组对应时点的血Scr水平(P均<0.05);第2周、第8周模型对照组与治疗组血Alb水平均低于相应时点的正常大鼠血Alb水平(P均<0.05),且治疗组血Alb水平均分别显著高于模型对照组对应时点的血Alb水平(P均<0.05);(3)光镜HE染色结果:经光镜检查,正常对照组大鼠肾小球、肾间质、肾小管等均正常。第2周末时,模型对照组少数大鼠肾小球存在基质与系膜细胞轻度增生,有少量肾小球包氏囊厚度增大,球囊发生粘连现象,少量肾小管出现扩张,剩余大鼠的肾组织无显著异常现象;第8周末时,模型组大鼠肾小球存在局灶节段硬化的现象,出现包氏囊厚度增加以及球囊出现粘连,某些肾小管出现萎缩,部分肾间质出现纤维化现象,且在光镜下可探查局灶性炎症细胞发生浸润反应。在同一时间节点,治疗组大鼠肾脏病变较模型组大鼠要更加轻微;(4)第2周、第8周模型对照组与治疗组MCP-1在肾组织阳性表达指数均高于相应时点的正常大鼠MCP-1在肾组织阳性表达指数(P均<0.05),且治疗组第2中、第8周时MCP-1在肾组织阳性表达指数均分别显著小于模型对照组对应时点的MCP-1在肾组织阳性表达指数(P均<0.05)。结论黄葵胶囊能够降低ADR肾病大鼠24h尿蛋白量、血Scr、MCP-1阳性表达指数及提高血Alb水平,改善大鼠肾组织功能。