不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的 通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法 上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.     

不同类型人胃黏膜组织中端粒长度随年龄的变化

目的:探讨不同类型人胃黏膜组织中端粒长度随年龄的变化.方法:选择32例胃癌患者(男12例,女20例;年龄20～岁3例,30～岁7例,40～岁10例,50～岁4例,60～69岁8例;肿瘤直径<3 cm 13例,≥3 cm 19例;高、中分化6例,低分化19例,黏液腺癌或印戒细胞癌7例;肿瘤侵及黏膜层和黏膜下层3例,深肌层11例,浆膜层18例;有淋巴结转移19例,无淋巴结转移13例)手术切除的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织标本,用酚-氯仿法抽提基因组DNA,再经限制性内切酶HinfⅠ酶切后,应用Southern杂交技术检测端粒长度,并分析端粒长度与患者年龄以及临床病理指标的关系.结果:正常胃黏膜组织的端粒长度为(6 728±1 707) bp,且随年龄增长端粒长度缩短(P<0.05);癌旁组织的端粒长度为(5 969±1 659) bp,癌组织的端粒长度为(5 088±1 712) bp,胃癌和癌旁组织的端粒长度均不随年龄增长而缩短(P均>0.05).按正常胃黏膜组织、癌旁组织、胃癌组织的顺序,端粒长度依次缩短(P均<0.05),且胃癌组织端粒长度与性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等病理指标均无相关性(P均>0.05).结论:端粒缩短是胃癌早期发生的分子事件;端粒长度变化不宜作为判断胃癌恶性程度的生物标志.     

纯合子胃壁细胞特异性表达SV40T抗原转基因小鼠品系的建立

目的：建立稳定遗传的纯合子SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠品系。方法：通过定量PCR法比较已知杂合子小鼠和未知阳性小鼠中外源基因的起始模板量来确定小鼠的基因型,并通过测交的方法来验证试验结果。结果：用定量PCR法选育出15只纯合子小鼠,经测交验证它们与野生型小鼠交配所生的后代均为阳性,证明了定量PCR的结果是正确的。通过纯合子之间的全同胞交配建立了6个独立的纯合子品系。结论：定量PCR具有省时、省力及高通量等优点,能够很好地应用于筛选纯合子转基因动物。     

在组织学与胚胎学实验教学中应用数码显微互动实验室的利与弊

数码显微互动实验室的建立,使教师授课更加直观,学生接受教学信息量更大,明显提高了教学质量和教学效率,具有传统教学无可比拟的优点,但也有其不足。文章结合组织胚胎学的学科特点,阐述应用数码显微互动实验室开展组织胚胎学实验教学的利与弊。     

在组织学与胚胎学实验教学中应用数码显微互动实验室的利与弊

数码显微互动实验室的建立,使教师授课更加直观,学生接受教学信息量更大,明显提高了教学质量和教学效率,具有传统教学无可比拟的优点,但也有其不足。文章结合组织胚胎学的学科特点,阐述应用数码显微互动实验室开展组织胚胎学实验教学的利与弊。     

GCSsiRNA载体构建及其对转染人胃癌细胞SGC7901/VCR的作用

根据siRNA设计原则,针对人葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)mRNA序列设计并合成编码siRNA的寡核苷酸序列,并将其克隆入小干扰RNA表达载体,构建重组质粒。将重组质粒转人耐长春新碱的胃癌细胞株(SGC7901/VCR),通过RT-PCR、免疫细胞化学等方法检测转染细胞GCS的表达水平,以生长曲线观察细胞生长情况。结果构建的GCSsiRNA表达载体释放出的片段与预期结果一致;转染SGC7901/VCR细胞后,可使细胞中GCSmRNA及其蛋白表达受抑制,细胞生长减慢。提示GCSsiRNA载体的成功构建及其对GCS表达和细胞生长的抑制,使其可能成为肿瘤基因治疗的一种新手段。     

共刺激分子B7-H1在胃癌中表达上调

目的了解胃癌患者胃黏膜组织中共刺激分子B7-H1的表达情况及其与肿瘤转移和预后的关系。方法应用流式细胞技术、免疫化学染色、免疫荧光染色与Western blot检测胃癌细胞系SGC-7901与新鲜切除的胃癌组织、癌旁组织及其远端正常胃黏膜组织中B7-H1的表达,并对相关数据进行相应的统计学分析,确定B7-H1表达水平与患者临床病理指标的关系。结果SGC-7901细胞中有B7-H1蛋白表达,主要分布在细胞膜,细胞质中少量;胃癌组织中B7-H1阳性表达率为(13/21)62%,癌旁组织中为(7/21)33%,而正常胃黏膜组织中没有B7-H1表达。统计分析显示,胃癌组织中B7-H1表达与肿瘤的浸润深度、周围淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关(P<0.05)。结论B7-H1分子可作为胃癌早期诊断与预后判断的新指标。     

组织型纤溶酶原激活剂cDNA克隆及其乳腺特异性表达载体的构建

目的：克隆组织型纤溶酶原激活剂(tissue—type plasminogen activator,tPA)基因及构建其乳腺特异性表达载体。方法：以PCR技术克隆2．1kb tPA cDNA片段;应用体外连接技术,连接乳腺特异性表达载体pWA和2.1 kb tPA cDNA片段;转化连接产物,以内切酶酶切、琼脂糖电泳及插入片段序列分析鉴定阳性克隆。结果：琼脂糖电泳显示,2．1 kb tPA cDNA片段克隆成功;内切酶酶切片段与预期片段长度一致;插入片段序列与文献报道一致。结论：tPA基因克隆及其乳腺特异性表达载体构建成功。     

成人和成体羊心脏组织动力学比较

目的:比较正常成人和成体羊心脏的组织动力学过程,探讨心脏组织演化的规律.方法:取12只山羊和6例人尸检心脏组织标本及羊心脏传导系统标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成人与成体羊心脏组织演化均包括心内膜-心肌演化体系、房室间区-心肌演化体系和肌层内心肌演化体系,但在羊心内膜-心肌演化体系中的优势演化途径是心内膜细胞-心肌生成单位-心肌细胞演化系,人的优势演化途径是心内膜细胞-非心肌生成单位-心肌细胞演化系;在肌层内心肌演化体系中有细胞重建的重要演化方式.结论:正常成人和成体羊心肌演化总体模式基本相似,但各自具有不同优势演化途径.     

siRNA抑制SOM基因表达的有效序列筛选

目的 研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素（SOM）分泌的抑制效应。方法 设计2条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列，应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823，经RT—PCR，免疫细胞化学法检测SOMmRNA和蛋白的表达水平，筛选抑制效果最佳的序列。结果 转染后24h、48h及72h，SOM基因的表达被抑制，抑制效率有差异。结论 体外合成siRNA可以抑制SOM基因的表达，抑制效率呈现浓度及时间依赖性。