中波紫外线对人血小板线粒体DNA影响的初步观察

目的:观察中波紫外线对人血小板线粒体活性及线粒体DNA的影响,探讨其作为评测光损伤敏感系统的可行性。方法:以不同能量的中波紫外线照射人血小板,观察血小板线粒体活性及线粒体DNA光化产物环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量的变化。结果:接受不同能量中波紫外线照射的血小板,线粒体活性明显降低(P<0.05),环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量则明显增加(P<0.05)。结论:人血小板线粒体活性与环丁烷嘧啶二聚体含量对中波紫外线的照射敏感,并与其剂量呈依赖关系,可很好反映中波紫外线对生物体光损伤作用。     

HSV 2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

目的构建单纯疱疹病毒2型（HSV 2） 多功能蛋白感染细胞多肽27（ICP27）真核表达载体pCDNA3.0 ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞（Vero）中的表达。方法提取病毒株HSV 2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0 ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero 细胞,经RT PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果pCDNA3.0 ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT PCR 和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV 2 多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0 ICP27,并能在Vero 细胞中表达。     

中波紫外线对人血小板线粒体活性影响的初步观察

目的:观察中波紫外线对人血小板线粒体活性的影响,探讨其作为评测光损伤敏感系统的可行性.方法:以不同能量的中波紫外线照射人血小板,观察血小板计数(PLT)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板细胞活性、线粒体活性的变化.结果:接受不同能量的中波紫外线照射血小板,其血小板计数、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板生物活性均无明显变化(P＞0.05),而线粒体活性则明显降低(P＜0.05).结论:人血小板线粒体活性对中波紫外线的照射敏感并与其剂量呈依赖关系,可很好反映中波紫外线对生物体光损伤作用.     

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响

目的 研究单纯疱疹病毒2型 （HSV-2）潜伏相关转录体（LAT）开放读码框3（ORF3）对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）凋亡的影响。方法 构建重组质粒pEGPF-ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察凋亡小体,Giemsa染色检测细胞核形态,噻唑蓝法（MTT法）检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSS13.0进行分析,各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。 结果 成功克隆HSV-2 333株ORF3基因,构建pEGFP-ORF3真核表达载体,RT-PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP-ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色,显示胞核蓝染,胞质淡浅,细胞形态正常。MTT 法分析显示,细胞增殖在转染pEGFP-ORF3组（2.56 ± 0.21）与未经任何处理的正常对照组（2.66 ± 0.13）比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组（1.65 ± 0.11）和pEGFP-C2组（1.56 ± 0.18）,差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）;流式细胞仪分析细胞凋亡率,转染pEGFP-ORF3组（4.03% ± 1.04%）与正常对照组（2.13% ± 0.09%）比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,但低于空质粒pEGFP-C2组（19.45% ± 2.05%）,且差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论 HSV-2 LAT ORF3在Vero 细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。     

三种方法检测生殖器疱疹病毒的比较

近年来生殖器疱疹发病率逐渐上升,1其临床表现多样,且无症状者多见,有症状时,传染性强;无症状感染者及复发性生殖器疱疹复发的间歇期存在排毒,也可能具有传染性.2我们采用ELISA、细胞培养和PCR法对84份生殖器疱疹标本进行了检测,现将结果报道如下.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP27对Vero细胞凋亡作用的研究

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型转录前蛋白ICP27对Vero细胞凋亡作用及其参与细胞凋亡的可能途径.方法 用前期构建成功的pcDNA3.0-ICP27质粒瞬时转染Vero细胞,MTT法检测pcDNA3.0-ICP27转染Vero细胞的活性,Giemsa染色及流式细胞术检测转染后ICP27在细胞凋亡中的作用,实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNAs的变化和对凋亡执行蛋白Caspase-3的活性的检测以探讨ICP27参与细胞凋亡的途径.结果 pcDNA3.0-ICP27转染Vero细胞后,MTT法检测发现其活性明显低于转染pcDNA3.0及空白转染的Vero细胞活性;Giemsa染色后发现转染pcDNA3.0-ICP27的Vero细胞变圆,细胞核破裂,流式细胞检测发现pcDNA3.0-ICP27转染的Vero细胞发生的凋亡率更高.凋亡执行蛋白Caspase-3的活性明显高于转染pcDNA3.0及空白对照;荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNAs的变化,转染重组质粒的Vero细胞中Bax mRNAs表达量上调,Bcl-2 mRNAs表达降低,Bax/Bcl-2明显高于正常培养的Vero细胞及转染pcDNA3.0质粒的Vero细胞.结论 ICP27对Vero细胞有促进细胞凋亡的作用.而这种作用可能是使Bax及Bcl-2在细胞中的比例发生变化而导致的.