高效价人绒毛膜促性腺激素的制备新方法

目的:研究制备高效价人绒毛膜促性腺激素(HCG)的新方法.方法:运用组合利凡诺沉淀法和BaCO3吸附法纯化低效价HCG.结果:该法可将效价约为3 000IU/mg的HCG纯化为效价为8 000IU/mg左右的高效价HCG,平均活性回收率为63.81%.结论:该方法简便,成本低,便于实际推广.     

Paxillin在大鼠胰腺不同发育阶段的表达

目的:探讨与胰岛形成和功能完善相关的基因在大鼠胰腺发育不同阶段的表达趋势.方法:采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d(E12.5),E15.5,E18.5, 新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR验证桩蛋白(pxn)和actopaxin在不同发育时期的表达情况.结果:与细胞迁移、聚集黏附相关的基因77.8%在胚胎18.5 d高表达,22.2%在新生期高表达;整合素和激酶(ILK)在胚胎18.5 d表达量最高,pxn和actopaxin在胚胎15.5 d表达量达到高峰;成熟胰腺特异性基因多从胚胎18.5 d开始出现明显高表达,调节胰腺细胞分化的相关转录因子表达量多从胚胎18.5 d开始下降.结论:Pxn在胚胎发育中后期的高表达可能与胰岛形成及功能完善有关.     

斑螯素对STZ诱导的1型糖尿病小鼠胰岛功能和形态的影响

目的:探讨斑螯素(Cantharidin,蛋白磷酸酶2A抑制剂)对胰岛β-细胞的影响及作用机制.方法:将小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导成功的1型糖尿病小鼠20只随机分为斑螯素干预组10只和糖尿病组10只,另取10只小鼠为正常对照组,动态观察空腹血糖(FBG)的变化,实验结束时检测空腹血清胰岛素(FINS)值,同时光镜下观察胰腺的组织形态学变化.结果:斑螯素干预组较糖尿病组FBG值明显下降(P＜0.05),FINS值明显高于糖尿病组(P＜0.01).病理学观察发现,斑螯素干预组的胰岛体积明显大于糖尿病组,胰岛数目也较多.结论:斑螯素可以有效地改善STZ诱导的小鼠1型糖尿病残留的胰岛的结构与功能,缓解STZ诱导的小鼠1型糖尿病.     

FSHR部分基因的真核表达质粒构建和生物信息学分析

目的克隆FSHR基因部分片段（145～330bp）（FSHRn）,构建真核表达重组质粒,预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性。方法提取小鼠睾丸组织的总RNA,利用RT—PCR技术反转录成cDNA,按照GenBank中小鼠FSHR N-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pcDNA3．1／myc-His（-）B载体,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定后用Vector NTI9．0软件作生物信息学分析。结果扩增片段长度为186bp,测序结果与已知序列吻合,重组真核表达质粒经PCR和双酶切鉴定获得正确重组子,生物信息学分析其编码蛋白抗原性肽段主要集中在15～20aa、22～27aa、32～36aa、42～48aa、58～67aa,与人的基因同源性为90％。结论成功克隆了FSHRn基因片段并构建了pcDNA3．1／FHSRn真核表达重组质粒;FSHRn具有良好的抗原性．FSHRn蛋白可作为良好的动物候选疫苗,为此段蛋白的深入研究和人类男性避孕疫苗的研制打下基础。     

中国汉族人群2型糖尿病易感性相关基因多态性

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的发病与多个基因累加效应及多种环境因素相关.已在中国汉族人群中研究过的与T2DM易感性相关的基因多态性包括:全基因组相关研究中的CDKAL1、CDKN2A/B、SLC30A8、IGF2BP2、HHEX、FTO 以及KCNQ1基因;脂联素基因;核呼吸因子基因;葡萄糖激酶基因;肿瘤坏死因子α基因等.探索这些易感基因可以为人类治疗T2DM起到极大的推动作用.但至今已明确的基因依然很少,国内外的研究结果不尽相同,尚需进一步地深入研究.     

microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移?侵袭及增殖能力的影响

目的:研究 microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移?侵袭能力与增殖能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异;应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证;划痕实验检测 miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响?结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P < 0.05);与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P < 0.05);利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8 ± 2.7)%(P < 0.01)及(73.25 ± 4.4)%(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?     

PKR抑制胰岛β细胞生长的机制研究

目的:探讨PKR激活诱导的胰岛β细胞生长抑制及其相关分子机制?方法:采用PKR激动剂BEPP处理INS-1细胞,MTT法检测其对细胞活力的影响;EdU荧光标记结合流式细胞术测定胰岛β细胞增殖及细胞周期变化;免疫印迹技术评价PKR下游信号分子eIF2α蛋白及其磷酸化水平变化,并检测细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达?结果:MTT显示BEPP呈剂量和时间依赖性抑制INS-1细胞生长活力(P < 0.05);EdU荧光标记显示细胞增殖显著下降;流式细胞术表明BEPP处理组G1期细胞比例明显升高,而S期细胞比例显著下降(P < 0.05);Western blot结果表明:BEPP能下调eIF2α磷酸化而不是其蛋白水平,同时伴随cyclin D1蛋白含量显著降低(P < 0.05)?结论:PKR激活剂BEPP能诱导eIF2α磷酸化,阻断蛋白合成,且通过下调cyclin D1蛋白水平,诱导胰岛β细胞G1期阻滞,抑制其增殖,从而导致机体胰岛β细胞整体功能的失代偿和2型糖尿病的发生?     

小鼠PNPLA7敲降重组腺病毒的构建及其生物学功能的初步研究

目的：构建小鼠PNPLA7基因的敲降重组腺病毒,检测PNPLA7敲降重组腺病毒对小鼠肝脏PNPLA7蛋白的敲降效率及对肝脏甘油三酯含量的影响。方法：将对照siNC以及敲降PNPLA7的siRNA设计为shRNA并插入到pshuttle-CMV-silence穿梭质粒中,挑选克隆并测序鉴定,测序成功后将质粒进行PmeⅠ线性化,转入含有腺病毒骨架pAdeasy的BJ5183感受态细胞中进行同源重组,重组成功后的质粒经PacⅠ线性化转染293A细胞进行腺病毒包装,得到Ad-shNC对照腺病毒以及Ad-shPNPLA7敲降腺病毒。通过尾静脉注射腺病毒7 d后根据免疫印迹实验检测小鼠肝脏中PNPLA7敲降效率,同时利用Folch提脂方法提取并检测小鼠肝脏中甘油三酯含量。结果：成功获得对照腺病毒Ad-shNC以及敲降腺病毒Ad-shPNPLA7。通过尾静脉注射进行小鼠肝脏PNPLA7敲降,结果显示Ad-shPNPLA7腺病毒可成功降低PNPLA7的蛋白表达,敲降PNPLA7后引起肝脏甘油三酯含量上调。结论：小鼠PNPLA7的敲降腺病毒构建成功,敲降PNPLA7引起肝脏中甘油三酯含量升高。     

脂肪组织中自噬影响肥胖发病机制的研究进展

肥胖是由于脂肪细胞体积增大和数量增生而引起的脂肪组织异常或过度堆积导致的一种慢性代谢性疾病，由环境因素和遗传因素共同决定。近年来，自噬在调控脂肪细胞数量、脂肪生成和白色脂肪棕色化等过程中的作用引起了广泛关注。文章就脂肪组织中3种不同类型的自噬对脂肪生成、白色脂肪棕色化和脂肪代谢等过程的影响进行系统性总结回顾，旨在阐明自噬对脂肪组织功能及肥胖的影响，进而为肥胖的预防和治疗提供潜在靶点。