中国人群中肾上腺素α2A受体基因SNP的分布及其对基因表达的影响

目的：在中国人群肾上腺素α2A受体(α2A-AR)基因中搜寻单核苷酸多态性(SNP)并研究其对基因表达的影响。方法：对α2A-AR基因进行序列分析，搜寻SNP。从全血中提取基因组DNA，扩增包含G／C多态性位点的239bpDNA片段。利用PCR-RFLP方法对中国北方人群α2A-AR基因-1296bp位点SNP进行基因分型。利用凝胶阻滞方法研究含G／C的390bp DNA片段与细胞核提取物的结合。结果：在中国北方人群α2A-AR基因中共发现2处SNP。-1296位SNP等位基因G、C频率分别为0．61和0．39，基因型GC,，C,C，CC频率分别为0．34，0．54，0．13。EMSA结果表明，细胞核提取物与-1296bp为C的DNA片段可特异性结合。结论：中国北方人群啦α2A-AR基因中存在2处SNP，调控区(-1296位)SNP等位基因为C的DNA片段可与特异性蛋白质结合，可能通过这一机制影响基因表达。     

多媒体技术在研究生医学分子生物学教学中的应用

研究生分子生物学理论教学重在及时反映前沿动态，而教材相对滞后；实验教学受条件所限，研究生不易全面掌握各项实验技术。针对这些问题，我们在教学中利用多媒体技术，不断更新并增加教学内容，实现网络教学；利用其直观、生动特点，将教学内容化难为易；培养学生全面掌握实验技术。提高分析问题、解决问题的能力。     

IκB-α基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的：克隆ＩκＢ－α基因，构建ＩκＢ－α的真核表达载体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＩκＢ－α的ｃＤＮＡ，然后将其克隆入真核表达载体ｐＳｈｕｔｔｌｅ，并转入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果：通过ＰＣＲ和重组质粒酶切分析等方法，筛选出重组阳性克隆。结论：此重组质粒可用于真核表达等进一步研究。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白B胞外区基因片段的克隆、表达及初步鉴定

构建单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV1gB)胞外区基因片段的重组原核表达质粒,并获得HSV1gB胞外区基因的表达.选用真核和原核细胞均偏爱的密码子,化学合成含信号肽序列的HSV1gB蛋白胞外区基因序列,用PCR方法扩增编码HSV1gB胞外区1～696 aa的基因,利用DNA重组技术将其定向插入到原核表达载体pGEX4T-2上,转化大肠杆菌TG1菌株,经IPTG诱导表达及SDS-PAGE鉴定分析.SDS-PAGE检测显示,表达的HSV1gB/GST 融合蛋白分子质量为96 ku.利用亲和层析方法,纯化获得了表达的目的蛋白.ELISA结果表明表达产物具有较好的抗原性和特异性.可溶性重组HSV1gB蛋白的表达成功为单纯疱疹病毒亚单位疫苗的研究奠定了基础.     

大鼠胚胎发育后期胰腺中Mesothelin的表达

目的: 探讨大鼠胰腺胚胎发育后期胰岛形成及β细胞功能完善相关的基因表达调控. 方法:采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)对孕15.5(E15.5)和E18.5胰腺进行基因转录水平分析并用RT-PCR验证基因在大鼠胰腺E12.5,E15.5,E18.5,初生和成年这五个不同发育时期的表达情况. 结果:在差异或特异表达的基因中与胰腺细胞分化相关的转录因子和信号分子表达均下调,而与胰岛结构形成及β细胞代谢功能完善相关的基因表达上调,其中细胞黏附分子Mesothelin是在E18.5特异表达的基因,RT-PCR亦显示Mesothelin在大鼠胰腺胚胎发育后期特异性高表达. 结论: Mesothelin可能对胰岛结构的形成和功能的完善及维持有重要作用.     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制、环氧化酶-2表达的影响和化疗敏感性

目的：探讨环氧化酶（COX）-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对肺癌A549细胞的增殖抑制、COX-2表达和化疗敏感性的影响。方法：用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTY法）检测塞来昔布单药及联合顺铂（DDP）对COX-2高表达的人肺腺癌细胞A549的增殖抑制，流式细胞术分析塞来昔布联合DDP对细胞周期及细胞凋亡的影响,Westernblot法分析不同浓度塞来昔布干预后对A549细胞内COX-2蛋白表达的影响。结果：MTT法检测显示，塞来昔布（0-100μmol／L）对肺腺癌A549细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应。联合用药组与单药组相比差异有显著性（P〈0．001）。流式细胞术分析显示，塞来昔布12．5μmol／L与25μmol／L联合DDP0．5ms／L时，A549细胞明显阻滞于c,o-Gl期，S期细胞比例减少，联合用药组的凋亡率明显高于单药组（P〈0．001）。Westem blot法分析显示，塞来昔布浓度超过50μmol／L时，COX-2蛋白的表达受到了抑制。结论：塞来昔布的抗肿瘤作用机制涉及到COX．2依赖性途径。塞来昔布能增加DDP的化疗敏感性，塞来昔布与DDP联用对人肺腺癌A549细胞有明显协同抗肿瘤效应，该作用可能是通过增强对A549细胞的增殖抑制、诱导凋亡来实现的。     

长链非编码RNA：非小细胞肺癌研究的一个新领域

肺癌的发病率和死亡率位居各种肿瘤之首,其中非小细胞肺癌（NSCLC）占80％～85％,主要包括肺鳞癌和肺腺癌。尽管近年在肿瘤研究上有很大突破,NSCLC的治疗效果仍不佳且预后差,其5年生存率仅17％。因此,深入研究NSCLC发生发展的机制对NSCLC早期诊断、预防和治疗有重要意义。越来越多的研究证明,长链非编码RNA（LncRNA）参与了NSCLC的发病进程,与细胞侵袭转移、增殖、凋亡和耐药性密切相关。本文探讨了NSCLC中LncRNA的最新研究进展,旨在为NSCLC的诊断和治疗提供新的思路。     

PGE2与糖尿病胰岛β细胞功能障碍

在1型糖尿病和2型糖尿病病程中,会发生胰岛β细胞功能障碍,表现为分泌胰岛素的能力降低.这一病理过程的中心环节之一便是细胞因子,如白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等对胰岛β细胞的毒性作用,导致这一毒性作用的重要物质基础是环氧化酶2(COX-2)催化的产物前列腺素2(PGE2)这一炎症介质.     

应激状态下环加氧酶-2基因表达调控的研究进展

环加氧酶-2是体内催化花生四烯酸合成前列腺素的关键酶。它在细胞因子、有丝分裂原、生长因子等诱导刺激下可以大量表达,并在炎症和肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。近年来的研究表明,应激状态下,环加氧酶-2转录增强和(或)mRNA稳定性增强,导致其蛋白表达量增加及产物前列腺素增多,从而引起机体一系列的生理和病理反应。     

PBL教学模式下结合多媒体的生物化学课程设计

生物化学是医学院校学生就学期间一门非常重要的基础科目,为适应现代医学教育发展,提高教学质量,培养学生综合素质,有必要在教学方法上进行改革.探讨了在医学生物化学的教学中,结合现有的多媒体教学法,将以问题为基础的PBL教学模式应用在生物化学学科的课程设计,为医学生物化学教学方法的改革提供一定的理论依据.