睡眠剥夺相关基因的筛选与生物信息学分析

目的 从分子水平揭示睡眠剥夺对小鼠大脑海马体的影响,为睡眠剥夺相关疾病的基础研究和临床治疗提供新思路。 方法 从基因表达综合数据库(GEO)中下载睡眠剥夺相关基因芯片数据集,利用Qlucore Omics Explorer（QOE）3.0 软件、String、Panther 等工具对睡眠剥夺差异基因进行生物信息学分析。 结果 在101个差异表达基因所编码的蛋白中,有45个存在蛋白与蛋白的相互作用关系;其中涉及主要的生物学通路包括促性腺激素 释放激素受体通路、肾上腺素和去肾上腺素生物合成通路、细胞凋亡信号通路、亨廷顿舞蹈病通路和帕金森病通路等;主要涉及的生物学过程包括代谢过程、生物调节过程、发育过程、细胞定位过程、免疫系统过程和细胞凋亡过程等。 结论 通过生物信息学分析睡眠剥夺相关芯片数据,提示睡眠剥夺能够影响大脑海马体的基因表达,对相关基因的分析可为下一步实验提供有价值的线索。     

乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步实验研究

目的 制备联合检测乙型、丁型肝炎病毒基因芯片并进行杂交验证。方法利用Primer 5.0软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计多对PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术，样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术，得到多个乙型、丁型肝炎病毒特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示，样品和乙型、丁型肝炎诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论利用PCR扩增产物制备乙型、丁型诊断基因芯片是一种快速、简便的实用方法，有着广阔的应用前景。另外，利用限制性显示技术标记样品可为进一步更多种肝炎病毒的混和检测奠定基础。     

5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响

目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。     

三例急性髓系白血病患者基因表达谱的演变

目的研究急性髓系白血病（AML）患者初诊与复发时的基因表达谱差异，探讨难治性AML的发病机制。方法应用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片，动态检测了3例AML-M2a患者初诊、复发时骨髓单个核细胞的基因表达谱差异。结果在检测的20173个基因中，有10个基因在3例患者初诊、复发时共同差异表达，其中7个基冈在复发时均共同上调，3个基因在复发时均表现下调。结论DAPKI等10个基因的表达变化可能与AML-M2a发病和复发有关，这些新基因的发现可能对早期诊断难治性AML具有重要价值，同时为难治性AML提供新的治疗靶点。     

靶向COL1A1基因的 shRNA对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

 目的：探讨抑制Ⅰ型胶原α1链（COL1A1）基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法：用已构建的pSilencer2.1-U6-COL1A1重组质粒转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对COL1A1基因表达的影响,MTT比色法测定细胞增殖的抑制情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果：RT-PCR及Western blotting结果证实重组质粒在mRNA和蛋白水平分别显著抑制COL1A1基因表达;pshRNA-COL1A1转染组细胞的增殖速度明显减慢且呈时间依赖关系;与对照组相比,pshRNA-COL1A1组细胞明显阻滞于G₀/G₁期,细胞凋亡率显著升高（P<0.05）,出现细胞质浓缩、核凝聚等凋亡形态学变化。结论：pshRNA-COL1A1能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,为以COL1A1为靶点的乳腺癌基因治疗提供实验依据。     

走近医学研究领域中的基因芯片技术

生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子（如寡核苷酸,基因片段, cDNA 片段或多肽、蛋白质）的微阵列。基因芯片是生物芯片的一种。随着人类基因组计划的提前完成。基因芯片技术在生命科学研究领域中有着广泛的应用,其具有高通量、多样化、自动化、反应微型化等突出特点。基因芯片技术已在基因功能表达、基因调控网络、疾病病理、临床诊断、药物开发及筛选等研究方面取得重大进展。本文简要介绍基因芯片技术的基本原理和种类,论述基因芯片技术在医学领域中的应用。     

梅毒螺旋体寡核苷酸芯片探针的设计及筛选

【目的】设计梅毒螺旋体寡核苷酸探针,筛选出适合芯片检测的高敏感性和特异性寡核苷酸探针。【方法】根据梅毒螺旋体特异基因设计寡核苷酸探针,人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。提取梅毒螺旋体的DNA,采用通用引物联合标记法进行标记,标记样品与芯片杂交,用芯片扫描仪检测杂交结果。【结果】设计出23条50 mer梅毒螺旋体寡核苷酸探针。标记样品与芯片杂交部分探针有较强的杂交信号,并筛选出符合要求的9条梅毒螺旋体寡核苷酸探针。【结论】以上方法能设计和筛选出敏感性和特异性较高的梅毒螺旋体寡核苷酸探针,可用于制备梅毒螺旋体寡核苷酸芯片。     

提升高校课堂教学效果的几点体会

课堂教学是教学活动的中心环节,课堂教学的高效与否直接影响着学生获得知识的多少.着重分析了影响高校课堂教学高效的四大因素:无序的课堂学习纪律、不良的课堂学习习惯、单调的课堂教学手段以及乏味的课堂教学技巧等,对课堂教学效果所带来的负面影响,并有针对性地提出相应的解决方法:双重管理,创造轻松有序的课堂氛围,培养良好的学习习惯,增加课堂师生互动,运用多种教学技巧和手段,从而达到有效提升课堂教学效果的目的.