Toll样受体3抑制胰岛β细胞生长的分子机制研究

目的:探索Toll样受体3 (Toll-like receptor 3,TLR3)在调节大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞生长中的作用及其相关机制?方法:采用1%牛血清白蛋白(BSA)代替血清培养12 h使INS-1细胞同步化处于G0期?TLR3的特异性激动剂聚肌胞(polyinosinic-polycytidylic acid,PIC)激活TLR3,26S蛋白酶体抑制剂MG132抑制蛋白酶体活性?MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,实时定量RT-PCR?免疫印迹(Western blot)法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达?结果:和对照组相比,PIC呈剂量依赖性抑制INS-1细胞生长活力(P < 0.05);PIC能显著阻滞INS-1细胞周期于G1期(P < 0.05);PIC处理组Cyclin D1 的mRNA水平无明显变化(P > 0.05),但其蛋白水平显著下调(P < 0.05);给予蛋白酶体抑制剂MG132预处理能缓解此下调作用?结论:激活的TLR3可能通过蛋白酶体介导的Cyclin D1降解,导致胰岛β细胞G1期阻滞,从而抑制其增殖,参与机体胰岛β细胞整体功能障碍的调节?     

生物化学实验教学改革初探

实验教学是生物化学教学中的重要组成部分,如何提高教学质量是生化教育工作者面临的重要课题.南京医科大学生物化学与分子生物学系在实验内容、教学方式以及考核方法等几方面进行了教学改革,为提高医学院校生化实验教学质量进行了初步探索.     

抗Ⅱ型单纯疱疹病毒表面抗原gD单克隆抗体的制备及鉴定

制备抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(Simplex Herpes VirusⅡ,HSV-2)表面抗原gD的单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定。以基因工程重组制备纯化的HSV2-gD为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规融合制备杂交瘤细胞,通过HAT选择培养、有限稀释法获得单克隆细胞株,用间接ELISA法、Western blot方法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。获得了4株可稳定分泌抗HSV2-gD抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A11C6、1A11F10、4C9D5以及4C9E9,抗体的类型均为IgG1,轻链均为κ型,Western blot结果显示各单抗都可以特异性识别HSV2-gD。用杂交瘤细胞注射小鼠制备腹水,腹水内的抗体效价均大于1×10-5,腹水内的抗体经硫酸铵-辛酸分级沉淀和阴离子交换柱纯化,成功制备了纯度超过95%的高特异性抗体,抗体有较好的特异性。为进一步研究HSV2感染和临床上的预防、诊断及治疗提供了有力的工具。     

生物化学实验教学中学生科研能力的培养探讨

在教学过程中,利用多种方式培养学生的科研能力已成为高教改革的一个重要目标.在生物化学实验教学中,教师应注重对学生科学态度、创造性思维、批判精神和团队意识的培养,使生物化学实验教学扩展和补充理论教学的同时,也能够提高学生的科研能力.     

人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞亚群的分选及其干细胞特性分析

目的: 分选人肺腺癌细胞系(LAC)中SP细胞(side population cells)亚群并分析其具有的干细胞特性?方法:运用流式细胞荧光激活分选技术(FACS)分选LAC中SP细胞亚群和非SP细胞亚群,利用MTT?体外克隆形成和皮下移植瘤试验分析其体内?外增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期及细胞分化,RT-PCR方法检测其ATP结合盒转运蛋白(ABCG2)基因的表达情况?结果:流式细胞荧光激活分选结果显示:LAC中含有约1.88%的SP细胞亚群?MTT和体外克隆形成试验表明:SP细胞亚群的体外增殖能力显著强于非SP细胞亚群?同时,裸鼠皮下接种SP细胞亚群,其体内成瘤能力也要显著强于非SP细胞亚群?流式细胞仪分析结果表明:SP细胞亚群的G0/G1期比例显著高于非SP细胞(P < 0.05)?细胞分化实验结果表明:两个亚群中SP细胞比率分别为(1.46±0.08)%和(0.12±0.04)%?RT-PCR结果显示:ABCG2基因mRNA在SP细胞亚群中的表达水平是其在非SP细胞亚群中的3.3倍(P < 0.05)?结论:利用LAC中SP细胞亚群具有肺癌干细胞的特性,流式细胞荧光激活分选肺腺癌SP细胞亚群可能是分离肺腺癌干细胞的有效方法?     

生物化学实验教学中学术道德培养的探讨

学术道德问题影响国家未来科技发展.目前,不良学术道德风气已经波及学校本科教学课堂,特别是在生物化学实验课中.针对生化实验课中抄袭伪造数据比较严重的现象,提出了在实验课中培养正确学术道德的具体方法,包括加强学生的思想道德教育,端正实验态度;严格实验过程管理,养成良好的实验习惯;改革实验内容,减少实验抄袭伪造的可能性.     

miR-196a调控HOXA5对人胃癌细胞MGC-803侵袭转移的影响及机制研究

目的 检测miR-196a在人胃癌组织及细胞系中的表达,探讨抑制或过表达miR-196a对胃癌细胞侵袭转移能力的影响,以及其可能作用的靶基因。方法 通过实时定量PCR技术检测胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors或mimics抑制或上调其表达,并通过定量PCR检测转染效率。利用划痕迁移实验、Transwell侵袭实验和MTT实验检测上调或下调miR-196a水平对MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响。采用生物信息学及Western blotting方法验证miR-196a对靶基因HOXA5的调控机制。结果 相对于正常胃黏膜组织及细胞,胃癌组织和细胞系中miR-196a的表达水平显著上调（上调约28倍,P＜0.01）,MGC-803细胞中转染miR-196a inhibitors或mimics能显著抑制（下降了53％,P＜0.01）或上调（上调约8倍,P＜0.01）miR-196a表达水平。抑制miR-196a表达能降低MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力,而上调其表达则相反。miR-196a能够负性调控HOXA5的表达。结论 胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达上调可能通过抑制HOXA5的表达显著提高胃癌细胞的侵袭转移能力,促进胃癌的发生、发展。     

人类癌症中长链非编码RNA与miRNA相互作用的研究进展

人类基因组中大部分为非编码区,转录产生非编码RNA（ncRNA）。这些ncRNA可以在表观遗传学水平及转录后水平调控癌基因和抑癌基因的表达,影响肿瘤的发生和发展,是肿瘤诊断、治疗及预后判断的潜在靶标。微小RNA（miRNA） 和长链非编码RNA（lncRNA） 是ncRNA的两个重要分类。其中,lncRNA通过多种机制在不同水平进行基因表达调控,发挥其生物学功能,这些机制包括基因印迹、染色质重塑、细胞周期调控、选择性剪接、mRNA降解和翻译调控等。近年来,miRNA和lncRNA在癌症发生发展中相互作用的分子机制引起了人们的注意。本文主要就这两者在癌症发生发展过程中的相互作用机制及研究方法进行综述。     

棕榈酰化转移酶9调控非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭及相关机制研究

目的：探讨棕榈酰化转移酶 9（zinc finger DHHC-type containing 9,ZDHHC9）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及预后,及ZDHHC9对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法：通过NCBI GEC 数据库和基于基因表达水平值的交互式分析平台（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）数据库分析ZDHHC9在 NSCLC中的表达及其与患者预后之间的关系。利用实时定量 PCR（Real-time qPCR）检测正常支气管上皮细胞系（16HBE）及 NSCLC细胞系（A549、H1299、H1703）的表达情况。在H1703和A549细胞系中敲降ZDHHC9,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell和划痕实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测相关蛋白水平变化。结果：GEO和GEPIA数据库生物信息技术分析结果显示,ZDHHC9 在 NSCLC 组织中较癌旁组织显著升高,并且 ZDHHC9 表达量与患者的无病生存率相关（P < 0.01）。敲降 ZDHHC9 后,H1703 和 A549 细胞增殖活力显著下降,同时侵袭和迁移能力受到抑制,并且敲降 ZDHHC9 降低 NSCLC细胞脂肪酸合成关键酶的表达水平。结论：ZDHHC9可能通过调控NSCLC细胞脂肪酸合成促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。     

巢蛋白的研究进展

巢蛋白(nestin)归为第Ⅳ类中间丝蛋白，分布在细胞浆内。参与细胞骨架的构成。巢蛋白在神经系统、胰腺、心肌、骨骼肌、牙齿、肾上腺、睾丸、胃肠基质肿瘤均有分布，且在组织中的表达有时间顺序性。巢蛋白的功能与维持前体细胞正常的形态结构有关，也可与其他中间丝蛋白共聚组装成中间丝发挥细胞骨架的作用。巢蛋白是神经干细胞和祖细胞的标