微纤维相关蛋白2在结直肠癌中的表达及其对病人预后的影响

目的分析微纤维相关蛋白2(microfibril-associated protein 2,MFAP2)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达与预后的相关性。方法分别采用RT-qPCR和Western blot在检测MFAP2 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达水平;采用免疫组化技术检测MFAP2蛋白在65例CRC组织和相应癌旁组织中的表达水平,并分析其在癌组织中的表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果与正常的结直肠上皮细胞比较,MFAP2 mRNA和蛋白在CRC细胞中的表达水平均显著升高(P0.05);在CRC组织中,MFAP2 mRNA和蛋白的表达水平高于配对的癌旁组织(P0.05)。免疫组化检测结果显示,MFAP2蛋白在CRC组织中高表达,阳性率为60%,且MFAP2蛋白的高表达与肿瘤的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、脉管浸润、神经侵犯及TNM分期显著相关(P0.05)。生存分析显示,MFAP2高表达与CRC病人的不良预后显著相关(P0.05),进一步的单因素和多因素分析结果表明,MFAP2蛋白高表达是影响CRC病人预后的独立因素(HR=3.733,95%CI:1.509～9.229,P=0.004)。结论 MFAP2在CRC组织中上调表达,其高表达与病人的不良临床病理特征及预后密切相关,可能成为结直肠癌预后评估新标志物和潜在的治疗靶标。     

尿酸性肾病中医分型与氧化应激指标的相关性研究

目的：探讨尿酸性肾病中医分型与氧化应激相关性。方法：采用回顾性分析方法对2017年12月至2019年9月北京中医药大学第三附属医院收治的尿酸性肾病患者105例进行研究，选择同时期正常健康者105例作为对照，参考《中药新药临床研究指导原则》将105例尿酸性肾病和临床常见证型相结合，分成脾肾气虚18例、气阴两虚证19例、肝肾阴虚16例、阴阳两虚12例、湿热蕴结19例、瘀血阻滞17例、痰浊内阻13例，均在入院次日清晨空腹抽取静脉血，检测氧化应激氧化应激、肾功能损害指标，比较不同组别在氧化应激指标含量水平变化情况，比较中医分型和氧化应激、肾功能损害指标水平变化。结果：1）尿酸性肾病组总抗氧化能力（T-ACO）、晚期蛋白氧化物（AOPP）、血清丙二醇（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量水平分别为（19.45±3.42）U/mL、（42.45±3.53）μmol/L、（4.52±1.23）nmol/L、（76.78±5.64）U/mL，正常对照组则分别为（10.76±1.31）U/mL、（20.84±1.28）μmol/L、（2.13±0.76）nmol/L、（130.85±16.75）U/mL，尿酸性肾病组T-ACO、AOPP、MDA较正常对照组显著偏高，SOD显著偏低（P<0.05）。2）虚证中阴阳两虚证SOD含量上较其他证型均偏低，而MDA、T-AOC、AOPP、胱抑素C（CysC）、β2微球蛋白、尿微量白蛋白（UMALB）、蛋白尿发生率则较其他证型均偏高，差异均有统计学意义（P<0.05），实证中瘀血阻滞证SOD含量较其他证型均偏低，而MDA、T-AOC、AOPP则较其他证型均偏高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：尿酸性肾病中医分型的阴阳两虚证、瘀血阻滞证氧化应激水平、肾损害指标均显著升高，可结合该实验室检查进行临床干预。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

清热化瘀汤对急性脑出血患者血清hs-CRP、血浆S100β蛋白和NSE的影响

目的:探究清热化瘀汤联合依达拉奉对急性脑出血患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响。方法:选择2017年5月—2019年5月在我院神经内科就诊符合纳入标准的80例急性脑出血患者,随机分为联合组(40例)和依达拉奉组(40例),两组均给予基础治疗和依达拉奉静脉滴注治疗,联合组则在此基础上加用清热化瘀汤。观察并比较两组的临床疗效、神经功能缺损程度评分(NIHSS)、格拉斯哥昏迷评分(GCS)、hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量。结果:联合组的总有效率为95%(38/40),显著高于依达拉奉组的总有效率75%(30/40)(P<0.05)。治疗后,两组NIHSS评分降低,GCS评分升高,且联合组NIHSS评分明显低于依达拉奉组(P<0.05),GCS评分高于依达拉奉组(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及均脑血肿量均低于治疗前,且联合组hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量明显低于依达拉奉组(P<0.05)。结论:清热化瘀汤联合依达拉奉对急性脑出血患者具有良好的疗效,可显著改善其神经缺损,降低hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量。     

miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的机制研究

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的作用机制。方法:构建小鼠H22肝癌腹水模型。造模两周后处死小鼠并分离出脾脏组织，流式细胞术分析肝癌腹水组（MA组）与正常对照组（Control 组）小鼠脾脏Th9细胞表达水平。ELISA法检测脾脏IL-9表达水平。RT-PCR法检测脾脏miR-145表达水平。Western Blot法检测脾脏中PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α相关蛋白表达水平。分选小鼠脾脏CD4+T细胞，随机分为miR-145 mimics组和NC组，分别应用miR-145-5P mimics、阴性对照寡核苷酸（negative control，NC）进行转染，RT-PCR检测各组miR-145、HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达水平。结果:与Control 组相比，MA组Th9细胞及其细胞因子IL-9表达均升高（P<0.05），miR-145表达降低（P<0.05），p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α蛋白均升高（P<0.05）。与NC组相比，miR-145 mimics组miR-145显著升高，HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达下降。结论:肝癌腹水中Th9细胞升高可能与miR-145下降导致的PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α通路激活有关。