游离兔耳软骨移植修复广泛气管前壁缺损的研究

目的　探讨用游离兔耳廓软骨修复广泛气管前壁缺损的可行性 ,并观察自体移植与异体移植的差异。方法　取新西兰大耳白兔 2 0只 ,分为自体移植组 (n=10 )与异体移植组 (n=10 ) ,取右耳游离耳廓软骨行自体或异体移植修复 8～ 10环气管前壁缺损 ,术后 1、2、4、8和 12周每组分别处死 1～ 2只行内窥镜检查、生物力学测试及组织学观察。结果　 18只兔存活 ,内窥镜发现气管狭窄不明显 ,以瘢痕增生为主。生物力学测试发现 ,移植软骨单位最大应力在 0、4、8、12周分别为 2 .5 4± 0 .19、1.31± 0 .2 1、1.72± 0 .2 2和 1.96± 0 .0 8k Pa/ mm .组织学观察发现移植软骨部分发生变性和坏死 ,但存活软骨、新生软骨在术后 12周时分别占 6 2 .0 %± 3.45 %、6 5 .8%± 9.48%(自体移植组 ) ,6 0 .1%± 3.98%、5 5 .2 %± 7.5 7% (异体移植组 )。自体移植与异体移植的炎性反应差异不大 ,免疫排斥反应较轻。结论　游离耳软骨可用来修复广泛的气管前壁缺损 ,也可用作同种移植     

人端粒酶逆转录酶真核表达质粒转染人成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究

目的　　分析人端粒酶逆转录酶 (h TERT)真核表达质粒 p GRN14 5转染人成纤维细胞的生物学特性。方法　体外分离培养小儿包皮成纤维细胞 ,脂质体法将构建的 p GRN14 5转染人成纤维细胞 ,经潮霉素 B筛选 ,扩增培养阳性克隆。 RT- PCR法、TRAP- PCR法分析细胞端粒酶活性。流式细胞术检测细胞增殖周期及细胞凋亡率 ,对转染后细胞行染色体核型分析及免疫组织化学法检测胶原分泌能力。结果　转染后培养的人成纤维细胞形态与转染前相比无明显改变 ,转染细胞稳定地表达端粒酶活性 ,流式细胞术分析转染前后成纤维细胞的增殖周期无明显改变 ,细胞凋亡率较转染前降低。经 p GRN14 5转染的人成纤维细胞保持正常的二倍体核型 ,具有正常分泌 、 型胶原的能力。结论　 p GRN14 5转染的人成纤维细胞稳定地表达端粒酶活性 ,细胞寿命明显延长。初步证实了用这种方法建立组织工程标准化种子细胞系的可行性     

动态应变下肌腱细胞三维培养的初步研究

目的　研究三维培养条件下机械应变对肌腱细胞形态、排列、增殖及代谢的影响。方法　采用自行研制的动态应变三维细胞培养装置 ,将机械应变作用于肌腱细胞 -支架材料复合物。结果　机械应变对肌腱细胞分裂、DNA合成和代谢的影响与应变作用的强度、频率、周期及作用时间有关。采用特定的应变 (10 %伸长、0 .2Hz、每小时作用 15分钟 )作用 48小时 ,加载组肌腱细胞数和 3H标记的胸腺嘧啶核苷掺入量都明显高于对照组(P<0 .0 5 ) ;在应变作用下 ,其细胞形态呈扁平形 ,沿应变方向延伸 ;机械应变还引起 型胶原合成增加 (P<0 .0 5 )。结论　周期性机械应变直接作用于肌腱细胞可以刺激其生长 ,这对于应用机械应变促进组织工程化肌腱的构建具有重要应用价值。     

ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖特性及端粒酶活性分析

目的 分析体外长期传代ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖能力及端粒酶活性。方法 选用连续传代培养的第40代、第70代、第75代转化人胚腱细胞,免疫组化染色观察细胞分泌胶原类型,比较细胞生长曲线,并行染色体核型分析,流式细胞术检测细胞增殖周期,提取细胞总RNA,RT－PCR二步法检测细胞我端粒酶逆转录酶mRNA表达。结果 转化人胚腱细胞传代至70代以后,细胞形态发生改变,出现复制哀老现象。细胞具有正常分泌Ⅰ型胶原的能力,转化人胚腱细胞染色体呈异倍性（2n=94）。转化人胚腱细胞无人端粒酶逆转录酶mRNA特异扩增带,无端粒酶活性表达。结论 单纯SV40转染不能使人胚腱细胞永生化,同时也说明转化人胚腱细胞无恶性转化倾向。     

组织工程学研究现状及前景

１９世纪 ４０年代现代外科学奠基以来,对外科病的治疗主要采用病变组织切除及重建术。自体组织移植是以牺牲健康组织为代价的,虽然临床效果满意,但增加了病人的创伤,且供区极为有限;有血供的同种异体组织移植尚少有成功的报道。为挽救生命的同种异体器官移植随着对移植免疫研究的深入,目前已有心、肺、肝、肾等实质器官移植长期成活的报道。然而供器官的严重不足,使不少病人在等待器官移植中死亡。２１世纪８０年代,由Ｌａｎｇｅｒ和Ｖａ－ｃａｎｔｉ提出的组织工程学是利用工程学和生命科学的原理和技术,在体外预先构建一个有生…     

细胞黏附基础与肌腱组织工程

细胞黏附是组织工程学中一个基础而非常重要的问题 ,纤连蛋白和整合素受体是细胞黏附中最重要的结构 ,同时成纤维细胞还通过表面受体直接与基质中的 I型胶原结合 ,另外成纤维细胞也可通过表面受体与纤层蛋白结合等而使细胞黏附。本文综合了近几年来国外的有关文献 ,详细阐述了纤连蛋白和整合素的结构及功能。介绍肌腱组织中与细胞黏附有关的结构。提出组织工程学产品保存过程中细胞与细胞外基质间黏附力的影响尚无文献报道 ,研究细胞与细胞外基质之间的黏附 ,寻找对其不影响或影响很小的保存方法是我们需要解决的一个重要课题。细胞黏附的深入研究对组织工程领域可望有良好的应用前景     

聚合物表面生物修饰对肌腱细胞黏附特性的影响

为了探讨增强肌腱细胞与聚合物材料黏附力学特性的措施 ,采用生物可降解聚合物—乳酸与羟基乙酸共聚物 85 / 15 ,制成透光的薄膜 ,在膜表面裱衬聚赖氨酸的基础上 ,表面裱衬细胞外基质 ( I型胶原蛋白、纤维粘连蛋白 ,以及相应的抗体 )和生长因子 (类胰岛素生长因子 1) ,接种转化人胚肌腱细胞后 ,利用微吸管实验技术测定转化人胚肌腱细胞与聚合物薄膜的黏附力。结果显示 :在聚合物薄膜表面裱衬纤维粘连蛋白或 I型胶原蛋白 ,可明显提高转化人胚肌腱细胞与聚合物薄膜的黏附力 ( P<0 .0 5 ) ,但若在此基础上进一步分别复合裱衬纤维粘连蛋白抗体或 I型胶原蛋白抗体 ,则引起转化人胚肌腱细胞与聚合物薄膜的黏附力明显下降 ( P<0 .0 5 ) ;肌腱细胞对聚合物薄膜的黏附力与细胞外基质蛋白 (纤维粘连蛋白或 I型胶原蛋白 )的裱衬浓度有很好的依赖性 ;I型胶原蛋白和纤维粘连蛋白介导转化人胚肌腱细胞与聚合物薄膜的特异性黏附作用 ;二者复合裱衬浓度达到一定比例时 ,可产生协同作用 ,增强黏附效果 ;这种特异性黏附作用可被相应的抗体分子所抑制 ;生长因子对转化人胚肌腱细胞有明显的促黏附作用。提示 ,材料表面生物修饰可促进转化人胚肌腱细胞与聚合物的黏附作用 ,这对构建组织工程化肌腱具有重要的指导意义     

组织工程化肌腱修复鸡趾屈肌腱缺损的生物力学特性研究

组织工程化肌腱植入体内修复的肌腱其抗拉强度达不到正常肌腱的数值。为探讨这一问题的原因，我们选择罗曼雏鸡足趾屈肌腱细胞与可降解聚羟基乙酸筛网体外复合培养构建组织工程化肌腱。用此工程化肌腱修复20只罗曼鸡第二趾深屈肌腱0．5～0．8cm缺损。术后第2、4、6、8周取材，测定样品中材料的重量、羟脯氨酸含量及抗拉强度等力学特性指标。结果显示，植入2、4、6、8周，支架材料重量下降很快，至第8周基本降解；修复的肌腱中代表胶原合成总量的羟脯氨酸含量随时间增加，但变化不明显；修复的肌腱断裂能量和抗拉强度均随时间呈一先降低后逐渐增大的变化，抗拉强度在第8周才达到正常肌腱的23％。结果提示，植入的组织工程化肌腱在其材料迅速降解的同时，胶原生成量并不多，二者出现明显的不匹配，导致修复的肌腱抗拉强度低。     

一种改进型动态应变三维细胞培养装置的研制

介绍了一种用于组织工程研究的改进型动态应变细胞培养装置,针对原有的旧设备,分别从控制单元的硬件和软件设计、机械单元结构及细胞培养单元的结构三方面进行改进和升级,新装置使用范围广、可控精度高、操作简单。     

培养软骨同生长板的比较研究

目的：探讨培养软骨用作生长板移植替代物的可行性。方法：自1月龄兔分离软骨细胞、离心管培养2周形成软骨。切取6周龄兔胫骨生长板，与培养软骨进行组织学、胰岛素样生长因子I型受体α链（IGF－I Ra)免疫组织化学、^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR)掺入率检测和电镜观察。结果：培养软骨具有一定的骺软骨组织学结构，缺乏典型的生长板软骨细胞柱状排列。培养软骨和生长板IGF－IRa免疫组织化学染色均为阳性。培养软骨^3H-TdR掺入率显著高于生长板（P＜0．01）。培养软骨中细胞外基质结构疏松，5％软骨细胞呈现凋亡。结论：培养软骨具有一些与生长板相似的性质，可能成为生长板的移植替代物。