石蜡油辅助男性患者导尿管插管的临床应用

目的:探讨石蜡油辅助男性患者导尿管插管的应用价值。方法:620例行导尿管插管的患者按照入院时间不同分为观察组(n=338例)与对照组(n=282例),对照组患者将导尿管浸润石蜡油后插管,观察组患者采用无菌注射器抽吸3ml无菌石蜡油注入男性尿道内,后将导尿管浸润石蜡油插管,比较两组患者的插管反应、一次性插管成功率、尿道损伤及插管操作时间。结果:观察组插管轻度反应255例(71.2%),中度插管反应70例(16.0),重度插管反应13例(2.4);对照组插管轻度反应58例(20.6%),中度插管反应164例(58.2%),重度插管反应60例(21.2%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组的一次性插管成功率分别为(95.0%vs70.2%),尿道损伤率为(0.59%vs3.90%),插管操作时间分别为(12.46±2.13 minmin vs16.84±1.50),两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:石蜡油通过全程润滑男性患者尿道,使尿道插管更加顺利,有效地降低插管反应、尿道损伤率,提升一次性插管成功率,减少插管操作时间。     

大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,间歇加药方法将不同浓度0,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L甲状旁腺激素作用于大鼠成骨细胞(0mol/L作为空白对照组),经碱性磷酸酶染色及钙结节茜素红染色证实培养的成骨细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖能力,蛋白免疫印迹测定护骨素的分泌量。结果:①成骨细胞的形态变化:倒置相差显微镜下可见培养的成骨细胞呈短梭形、三角形和多边形。碱性磷酸酶染色光镜下可见成骨细胞胞浆中分布特征性蓝紫色细颗粒;成骨细胞的钙结节在镜下可见部分细胞聚集一起呈"集落状"生长。②成骨细胞增殖率:10-6～10-9mol/L浓度甲状旁腺激素对成骨细胞增殖均显示刺激作用,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05),增殖率以10-8mol/L甲状旁腺激素组最高。③成骨细胞护骨素的表达:甲状旁腺激素下调成骨细胞中护骨素的分泌,与空白对照组相比,10-6mol/L甲状旁腺激素组抑制作用最明显(P<0.01),无显著剂量依赖性。结论:甲状旁腺激素对体外培养成骨细胞的增殖具有明显促进作用,通过下调成骨细胞中护骨素的分泌,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

胎儿先天性心脏病的超声筛选分析

目的　探讨超声在筛选胎儿心血管异常中的应用价值。方法　采用彩色多普勒超声检查 7166例16～ 42周胎儿心脏 ,产前超声诊断的复杂心内畸形与胎儿尸解或分娩后超声复查对照。结果　①产前超声发现46例胎儿心血管异常 ,异常率为 6.42‰ ,其中复杂性先心病 10例经引产后尸解证实。复杂性先心病多合并体表畸形或多系统畸形。②单纯室间隔缺损 2 0例 ,其中 10例因合并其他畸形引产尸解证实 ,4例产后证实 ,6例室间隔缺损 <5mm者为超声漏诊。③单纯房间隔缺损 6例 ,其中 4例合并巴氏水肿及多系统畸形 ,引产证实。④卵圆孔过大 10例 ,2例产后证实为房间隔缺损 ,8例正常。⑤超声发现心包积液 8例 ,心律失常 9例。结论　胎儿心脏异常并非少见 ,超声及早确诊利于优生     

一氧化氮外源性供体L-arginine对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的:一氧化氮在维持机体多个系统的生理功能中起重要作用,许多慢性疾病可造成一氧化氮产生减少,此时一氧化氮供体是一种必要的补充。观察一氧化氮外源性供体L-arginine对体外培养破骨细胞增殖及骨吸收功能的影响。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。选择出生1d的清洁级SD大鼠乳鼠,采用骨髓诱导法体外培养破骨细胞,培养液内分别加入0.3,0.6,1.0g/L不同浓度的L-arginine,并以等体积三蒸水作为对照。培养7d后,以抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目、形态,MIAS-2000图像分析仪检测骨片上骨吸收陷窝的数目和面积,并用扫描电镜观察不同浓度L-arginine对骨吸收陷窝的影响。结果:①破骨细胞的一般形态:破骨细胞较其他细胞大,形态不规则,呈油煎蛋形、长条形、腊肠形或漏斗形等,细胞内可见几个至几十个核不等。抗酒石酸酸性磷酸酶染色酶活性部分酒红色,颗粒状。②抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数:各组破骨细胞数目随着L-arginine浓度增加而减少(P<0.05)。③骨吸收陷窝的面积和数目:骨片培养7d,吸收陷窝计数的结果显示,0.3g/L以上浓度L-arginine对破骨细胞吸收功能均有明显抑制作用,并呈剂量相关性。0.3g/LL-arginine组陷窝面积为对照组的91%(P<0.05),0.6g/LL-arginine组为对照组的80%(P<0.05),1.0g/LL-arginine组为对照组的69%(P<0.01)。结论:采用骨髓诱导法培养的破骨细胞数量多、纯度高,且具有明显的骨吸收功能。L-arginine抑制破骨细胞增殖,抑制破骨细胞骨吸收功能,并呈剂量相关性。     

猕猴组织工程化骨构建及其修复异体骨缺损的放射学评估

目的 用生物衍生骨材料和同种异体骨髓基质干细胞( MSCs)构建组织工程化骨并从放射学评估其植入猕猴体内修复长骨大段骨缺损的效果. 方法 于猕猴胫骨结节抽取 MSCs并使诱导分化为成骨样细胞,培养后与人源生物衍生骨材料体外复合构成组织工程化骨,植入 15只异体猕猴桥接桡骨 2.5 cm节段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料桥接对侧同样大小骨缺损作为对照组 ;另取 2只猕猴双侧桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组.术后 3, 6, 12周时双侧前臂正侧位摄 X线片,空白组于术后 12, 24周摄 X线片,用放射影像学评分和图像分析 X线阻射影比较骨缺损的修复情况. 结果 实验组骨缺损放射影像学评分以及新生骨痂的密度在 3, 6, 12周均优于对照组.空白组术后 24周骨缺损均无愈合. 结论 生物衍生材料和同种异体 MSCs构建组织工程化骨植入猕猴桥接大段骨缺损可使骨缺损达较快修复.     

以脱细胞牛软骨基质为支架体外构建组织工程软骨的实验研究

目的以脱细胞牛软骨基质（acellular cartilaginous matrix,ACM）作支架体外构建组织工程软骨,了解其作为软骨组织工程支架的可行性。方法 2003年1月-2005年12月联合应用冻干-反复冻融-酶消化法对牛软骨基质行脱细胞处理。将体外培养扩增的2～5代兔软骨细胞接种在材料上,体外培养3周,观察软骨细胞在支架材料上的生长分布情况。结果软骨细胞在制备的ACM上可较好地黏附生长,并且分泌大量Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖;但软骨细胞不能长入ACM内部,只能在表层生长,少量软骨细胞分布在ACM孔隙中。结论 ACM支架材料具有良好的细胞相容性和活性,并且能促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型。     

可乐丽菲露SEBOND应用于Beagles犬直接盖髓术的组织学评价

目的　将可乐丽菲露SE BOND用于beagles犬直接盖髓术后,进行组织学分级评价。方法　选择6只bea- gles犬共130颗健康牙齿,在颊面制备Ⅴ类洞并在洞底作人工穿髓孔,然后分为2组,实验组以可乐丽菲露SE BOND 盖髓,对照组以氢氧化钙盖髓。所有实验牙齿分别在盖髓后的第7、30、90天拔除,并进行组织学评价。结果　病理 学评价显示,在7 d的观察期内2组的牙髓均呈轻度到中度的炎性反应,可乐丽菲露SE BOND组的炎性反应较氢氧 化钙组轻,但其差别没有统计学意义。在30 d和90 d的观察期内2组均无明显的炎性反应,而牙本质桥的形成在 氢氧化钙组显著多于可乐丽菲露SE BOND组,其差别有统计学意义(P<0·05)。结论　可乐丽菲露SE BOND对牙 髓的刺激性较小,但诱导牙本质形成的能力较氢氧化钙弱。     

脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分，观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱，获取髓核，0．2％Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组（A组）及脊索细胞、软骨样细胞（1：1）共培养组（B组）。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况，测定两组原代及传代细胞成活率，MTT法测定两组第2代细胞增殖曲线，并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察，原代脊索细胞直径10～15gm，胞浆内富含大小不等的囊泡；原代软骨样细胞直径4～6gm，胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89．0％～95．3％，B组为91_3％～96．3％，各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。A组细胞培养3～4d进入对数生长期，B组细胞培养2d后进入对数生长期；培养4d后，B组细胞增殖能力高于A组，差异有统计学意义（P〈0．05）。A组3代以内细胞表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原，B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持；脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。     

成骨细胞条件培养液对BMSCs诱导分化作用研究

目的 探讨大鼠成骨细胞条件培养液对同种大鼠BMSCs的成骨诱导分化作用,为骨组织工程种子细胞的获得寻找一种新方法 . 方法 健康1周龄SD大鼠10只,雌雄不限,体重20～30 g,采用贴壁法和酶消化法分别获得BMSCs和成骨细胞,并进行鉴定.无菌条件收集第1～5代成骨细胞培养液上清,与完全培养基1:1混合,制备成骨细胞条件培养液,与第2代BMSCs共培养为诱导组,相同代次BMSCs与完全培养液共培养为对照组.倒置相差显微镜下观察共培养后BMSCs形态变化,MTT法检测BMSCs生长情况,免疫组织化学染色检测共培养后BMSCs的ALP、Col Ⅰ、骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白的表达,采用RT-PCR检测Col Ⅰ、OCN mRNA的表达. 结果 诱导组共培养7 d BMSCs体积变大,细胞由长梭形展开为扁平形和多边形,并带有突起;9 d细胞呈集落状生长.细胞生长曲线示BMSCs数量随培养时间延长而增加,对照组增殖能力较诱导组强;诱导培养4～7 d,对照组细胞数量与诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05).诱导组培养12 d,ALP染色呈阳性表达;18 d 出现钙结节;21 d Col Ⅰ和OCN呈阳性表达;对照组均呈阴性表达.RT-PCR检测示诱导组培养21 d有Col Ⅰ、OCN mRNA表达,对照组未见表达. 结论 体外大鼠成骨细胞条件培养液有明显的诱导同种大鼠BMSCs向成骨样细胞分化的作用.     

上皮细胞条件培养液对BMSCs分化的影响

目的 探讨上皮细胞条件培养液(epithelial cell conditioned medium,ECCM)体外诱导犬BMSCs向上皮细胞分化的可行性.方法 成年健康雄性比格犬1只,体重10 kg.于犬髂后上棘采用骨髓穿刺法取骨髓5 mL,分离培养BMSCs.取犬口腔黏膜下组织,剪成约4 mm×4 mm大小,制备ECCM.取第2代BMSCs以2×104个/孔细胞密度接种,实验组于ECCM中培养,对照组于低糖DMEM完全培养基中培养.观察两组细胞形态特征,MTT法绘制生长曲线,诱导培养21 d免疫组织化学染色鉴定上皮细胞特异性标志物--细胞角蛋白19(cytokeratinl9,CK-19)和细胞角蛋白AE1/AE3,透射电镜观察细胞超微结构.结果 倒置相差显微镜下见两组细胞均呈长梭形,均匀分布,折光性较强,增殖迅速.两组细胞生长曲线均呈"S"形,实验组生长曲线较对照组右移,提示ECCM对细胞增殖有抑制作用.实验组CK-19和细胞角蛋白AE1/AE3免疫组织化学染色均呈阳性反应,对照组呈阴性.透射电镜下实验组细胞胞浆内可见紧密连接.结论 ECCM体外有诱导同种BMSCs向上皮细胞分化的作用.