一种新的颗粒白细胞粘弹性模型的理论和实验探讨

提出了描述颗粒白细胞粘弹性的三参数粘膜模型,采用用微管吸吮实验技术,将此模型用于大鼠单个颗粒白细胞粘弹研究,结果表明用三参数粘性模型能较好地描述颗粒白细胞发生小变形的粘弹性特征,克服了惯用的标准固体模型描述颗粒白细胞发生小变形时初始变形为弹性响应的假设。     

骨骼肌肉系统组织工程学研究

组织工程学是近十多年提出的新概念。它是应用生命科学和工程学的方法、原理和技术,在体外构建有生物活性的组织,植入体内,修复组织缺损、重建功能;或作为一种体外装置,暂时替代器官功能,达到提高生存质量,延长生命活动的目的。它的科学意义不仅在于为解除病人痛苦提供了一种新的治疗方法,更重要的是提出了复制“组织”、“器官”的新思想,因此组织工程学一经提出,即受到各国科学家、政府、企业界的极大重视。我们在国家科学技术部、国家自然科学基金委员会、卫生部及美国中华医学基金会等多项基金资助下,从1992年开始,在骨骼肌肉系统领域,对骨、软骨、肌腱、周围神经、肌肉等进行了组织工程学研究,现将研究情况报道如下。     

生物衍生骨复合成骨细胞体内异位成骨研究

目的探讨生物衍生骨支架材料复合成骨细胞体内植入的成骨作用,了解其用于骨组织工程支架材料的可行性.方法将经物理、化学方法处理制得的复合型完全脱蛋白骨(CFDB)、部分脱蛋白骨(PDPB)、部分脱钙骨(PDCB)3种生物衍生骨支架材料分别与人胚骨膜成骨细胞体外复合培养1周后,植入裸鼠背部肌肉内作为实验组(30只),以单纯材料植入为对照组(30只),经大体观察、碱性磷酸酶活性测定、常规组织学检查及植入物成骨的定量判断,观测细胞-材料复合物的成骨作用.结果组织学检查证明,实验组3种材料皆有成骨作用,并随植入时间的延长,新骨形成增多;成骨含量分析表明,术后4周和8周,CFDB组组织学评分分别为2.90±0.57和4.60±0.70,显著优于其他实验组.对照组无成骨现象.结论生物衍生骨支架材料可作为骨组织工程支架材料,成骨能力以CFDB为最好.     

不同灭菌法对组织工程支架降解性和力学特性的影响

目的　研究不同灭菌方法对组织工程聚合物支架的灭菌效果以及灭菌处理对聚合物支架降解性和力学特性的影响。方法　选择聚合物支架PGA编织网和PLGA纤维 ,经环氧乙烷、紫外线、75 %酒精浸泡和γ射线照射 4种方法灭菌后 ,用细菌培养检测灭菌效果 ;用粘度法测定聚合物粘度 ,以观察聚合物的降解性 ;用拉伸实验测定聚合物支架的力学特性。结果　经 4种方法灭菌后 ,聚合物支架PGA编织网细菌检测均为阴性 ,都可达到灭菌目的。辐射剂量为 15kGy的γ射线照射和紫外线照射灭菌都可导致PLGA粘度下降 ,且均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,即这两种灭菌方法使PLGA的降解明显 ;相反 ,75 %酒精和环氧乙烷灭菌对PL GA粘度下降的影响没有显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,即降解不明显。各种灭菌方法处理后支架的断裂伸长率差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;经 15kGy的γ射线照射和紫外线灭菌后 ,支架的最大载荷、断裂能量及抗拉强度均降低 ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;经环氧乙烷和酒精浸泡灭菌方法处理的支架其最大载荷、断裂能量、抗拉强度均无明显改变 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　环氧乙烷和酒精浸泡灭菌对支架降解性和力学特性影响均较小 ,是可降解聚合物支架较理想的灭菌方法。     

以生物衍生材料为支架的组织工程骨移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的检测体外构建的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化，对移植组织进行组织学观察，探讨以生物衍生材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞，经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体骨为支架材料于体外构建。将健康新西兰白兔48只制成1cm长桡骨缺损模型后，随机分成A～D4组，每组12只，分别用部分脱钙冻干骨（partial demineralized freeze—dried bone，PDFDB）、组织工程骨、自体骨、同种异体骨植入兔桡骨节段性缺损。术后1、2、4周取材，用流式细胞仪检测4种材料移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化；通过常规组织学检测观察2、4、8、12周时4种材料的成骨作用。结果B组术后2周材料孔隙内有成骨细胞和成软骨细胞，可见骨、软骨混合性新生物形成，周边分布有破骨细胞，部分网架呈蚕食状被破坏吸收。术后4周，形成的新生骨过渡为编织骨。A、B组材料植入后1、2周外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞较术前明显升高（P〈0．05）；术后4周CD4^＋T细胞较术前轻度偏高，但无统计学差异（P〉0．05）。C组术后CD4^＋和CD8^＋T细胞升高不明显（P〉0．05）。D组术后1、2、4周外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞较术前及其他各组同期均明显增高（P〈.．05）。结论PDFDB为支架材料构建的细胞一材料复合物移植后外周血T淋巴细胞增高，但不影响其良好的修复骨缺损能力，生物衍生骨可作为支架材料应用于骨组织工程研究。     

可塑形组织工程骨修复兔颅骨缺损的组织学及力学研究

目的探讨用藻酸钙凝胶、成骨细胞和骨粉复合构建可塑形组织工程骨修复兔颅骨缺损后,体内成骨的组织学及生物力学特征。方法28只日本大耳白兔,随机分为A组(16只)、B组(8只)和C组(4只)。制备兔颅骨左右两侧直径1cm的骨膜-颅骨全层缺损,左侧用藻酸钙凝胶-成骨细胞-骨粉填补修复为A1组(n=16);右侧用藻酸钙凝胶-骨粉填补修复为A2组(n=16);B组骨缺损不作处理,为空白对照组(n=16);C组为正常组。术后6周和12周时,行大体观察及组织学观察;12周时行生物力学测试。结果术后6、12周时,A1组:颅骨缺损基本被硬组织所修复,镜下见材料已大部分被骨组织替代,成骨面积为40.92%±19.36%;A2组:材料部分被骨组织替代,成骨面积为18.51%±6.01%;B组:颅骨缺损边缘可见硬组织形成,镜下见修复组织以致密纤维组织为主,成骨面积为12.72%±9.46%。术后12周,生物力学测试修复组织能耐受的最大压力载荷,A1组37.33±2.95N;A2组30.59±4.65N;B组29.5±2.05N;C组41.55±2.52N;A1组明显大于A2组和B组(P<0.05)。最大载荷时应变位移,A1组1.05±0.20mm;A2组1.35±0.44mm;B组1.57±0.31mm;C组0.95±0.17mm;A1组小于B组(P<0.05)。载荷/应变比值,A1组35.82±6.48N/mm;A2组24.95±12.40N/mm;B组19.90±5.47N/mm;C组47.57±11.22N/mm;A1组大于B组(P<     

复方倍他米松对合并糖尿病及关节僵硬的退变性肩袖撕裂肌腱细胞影响的研究

目的明确复方倍他米松（compound betamethasone,BT）对合并糖尿病及肩关节僵硬的退变性肩袖撕裂肌腱细胞的影响,为下一步临床用药提供参考。 方法采集糖尿病合并肩关节僵硬的退变性肩袖撕裂需要接受手术患者的肩袖肌腱组织完成肌腱细胞培养,于特定时间点使用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）测定细胞增殖情况,并绘制增殖曲线。采用常规培养基（对照组）、BT与含10%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）低糖杜贝克改良培养基（dubelcco's modified eagle medium,DMEM）按照体积比配制成带药培养基：高浓度组（V_BT:V_DMEM=1:10）、低浓度组（V_BT:V_DMEM=1:20）共3种培养基,将其分别单次作用于P₃代肌腱细胞24 h,而后在指定的时间点评估细胞形态、凋亡和活性。 结果P₀代糖尿病肌腱细胞增殖传代至P₃代需要6 ~ 7周,细胞形态随细胞数量的增加而逐渐变为梭形。普通光学显微镜下观察显示两组细胞用药后8 ~ 12 h细胞形态明显改变,24 h镜下观察及活力检测发现肌腱细胞大量坏死脱落,而后剩余细胞明显缩小、变圆,细胞增殖能力陷于停滞状态,高浓度组细胞形态变化更加明显;用药后7 ~ 12 d增殖能力开始逐渐恢复,细胞形态于21 d恢复至用药前状态。用药后24 h流式细胞凋亡分析显示两组凋亡率存在统计学差异,高浓度组>低浓度组,P<0.05。 结论合并糖尿病及肩关节僵硬的退变性肩袖撕裂肌腱细胞增殖速度缓慢,BT对此类肌腱细胞具有明显的细胞毒性,其造成的损害尽管可逆,但需要较长时间。     

组织工程肌腱细胞研究模型的构建：SD大鼠尾腱细胞可行吗？

背景：目前常用的动物肌腱研究模型(比如兔,罗曼鸡等)的培养方法存在周期长,细胞获取量少等不足,往往成为制约肌腱组织工程实验研究进程的瓶颈。 目的：希望建立SD大鼠鼠尾肌腱细胞培养流程,以期用较短时间获取大量种子细胞,为更高的工程化肌腱构造研究创造模型构建条件。 设计、时间及地点：对比观察,于2006-02/11在四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。 材料：7~10 d SD大鼠2只用于获取鼠尾腱细胞;第4代人包皮成纤维细胞由四川大学华西医院干细胞与组织工程研究室提供。 方法：选用SD乳鼠,无菌条件下抽取尾腱,体积分数为10%的小牛血清+DF培养基悬浮组织块培养法获得鼠尾肌腱原代细胞,将第3代细胞与人包皮成纤维细胞为对照,行Ⅰ,Ⅲ型胶原免疫细胞化学染色,染色结果用image-pro plus 5.02行吸光度测量,并做统计分析。 主要观察指标：SD大鼠尾腱细胞免疫细胞化学染色结果及染色吸光度测量结果。 结果：第2代SD大鼠尾腱细胞Ⅰ型胶原染色呈阳性,Ⅲ型胶原染色呈阴性;人成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学皆呈阳性。尾腱细胞和人成纤维细胞Ⅰ型胶原表达吸光度值均明显高于Ⅲ型胶原(P < 0.05)。两种细胞Ⅲ型胶原表达吸光度值与空白对照之间差异无显著性意义 (P > 0.05)。 结论：SD乳鼠尾腱源细胞符合肌腱细胞的生物学特性。采用组织块悬浮培养可以在短期内大量获取原代或传代尾腱细胞。     

皮下浅刺法止痛效果观察

皮下浅刺法止痛效果观察秦廷武（邯郸市陶瓷公司医院０５６２００）杨向红（邯郸市中医院内三科０５６００１）在《灵枢·官针篇》中毛刺、扬刺、半刺等针法的启发下，运用皮下浅刺法治疗各种原因引起的疼痛，如内脏绞痛、局部肌痛、神经性头痛等取得了良好疗效。现将此法...     

表面改性及微沟槽技术对肌腱细胞生长与取向的影响

利用光刻技术制作微格式模板,微接触转印法制作微沟槽PDMS表面,微流道技术裱衬不同浓度的Ⅰ型胶原于微沟槽表面上,比较其对细胞生长形态及生长取向的影响.对照组为未裱衬胶原的微沟槽、平板PDMS及裱衬胶原的平板PDMS.种植SD大鼠肌腱细胞在材料上,于37℃孵箱中培养48 h.采用MTT比色法测定不同浓度的胶原对肌腱细胞的生长增殖的影响.通过倒置相差显微镜、扫描电镜、荧光显微镜观察细胞生长的形态,取向情况.结果显示:Ⅰ型胶原修饰的PDMS微沟槽材料比未裱衬胶原的对照组具有明显的促细胞生长的作用(P＜0.05),并且随着胶原浓度的增加作用越明显.有微沟槽表面的材料对细胞的生长形态和生长取向有明显影响.提示,Ⅰ型胶原修饰的微沟槽材料不仅能规范肌腱细胞的生长取向,而且能促进肌腱细胞的生长,从而得到理想的细胞生长形态,该结果对工程化肌腱的构建有重要的指导意义.