群体病例管理数据库的开发研究——含样品管理的新型医学病例信息管理系统

针对当前病例临床信息与样品管理存在交叉需求的空缺,开发一种将临床信息与样品管理相结合的医学病例信息管理系统。以MS SQL Server 2000建立数据库,以Visual C++6.0开发基于Client/Server模式的客户端应用程序,以实现对病例资料及相关样品信息的录入、浏览、查询选择、分级统计、样品管理及自动生成病例信息综合文档等功能,从而达到按科研所需对群体病例资料及其样品的管理。该系统有助于提高临床科研工作的效率、质量及管理水平,为医学病例及样品信息的综合动态管理提供了新的技术平台。     

血浆循环DNA水平与颅脑损伤严重程度的关系

目的 探讨脑外伤患者的严重程度与血浆循环DNA水平的关系.方法 40例颅脑损伤患者按照格拉斯哥昏迷分级(GCS)评分分为轻度12例、中度17例和重度11例,分别采集其受伤48 h内静脉血和30例正常人静脉血各2 ml,提取血浆循环DNA,采用双重荧光定量PCR技术检测血浆DNA水平.结果 颅脑损伤组显著高于对照组且颅脑损伤轻度组、中度组和重度组之间差异有统计学意义(P<0.05);血浆循环DNA水平与GCS评分呈负相关(r=-0.887,P=0.036).结论 血浆循环DNA水平不但对于诊断颅脑损伤有一定诊断价值,而且与其损伤严重程度显著相关.     

结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

Alu-PCR用于非小细胞肺癌手术患者预后的研究

目的建立Alu—PCRDNA指纹分析方法，研究癌组织DNA指纹改变在临床非小细胞肺癌患者手术预后中的意义。方法收集24例临床确诊非小细胞肺癌患者手术切除之新鲜肿瘤组织和距离肿瘤边缘5cm以上之正常肺组织，以及7例非肿瘤肺组织和10例正常体检者的外周血白细胞。用酚／氯仿抽提法提取其DNA，以Alu特异性引物，扩增Alu序列之间的基因组，得到肿瘤和正常组织的DNA指纹，并对患者手术后随访，观察DNA指纹的改变在患者预后中的意义。结果实验中7例正常肺组织（非肿瘤）和10例正常体检者外周白细胞，用Alu—PCR方法所产生的DNA指纹条带呈单态性，作为指纹分析中的正常对照；24例肺癌临床标本中，有12例肿瘤组织DNA指纹与正常组织指纹有差别，占50％，表现为DNA条带的缺失、增加和条带强度的差异。未能获得能提示患者预后情况的特异性的指纹条带；DNA指纹有改变的患者（10例）术后1年死亡率（80％）显著高于DNA指纹未改变者（9例）术后1年死亡率（22．2％）（Χ^2=6．343，P=0．023）。结论采用Alu—PCR方法所得到的临床非小细胞肺癌肿瘤组织的DNA指纹改变是多样性的，未能发现提示预后的特异性的指纹条带；Alu—PCR指纹分析提示，DNA指纹有改变的患者预后比没有改变的患者预后差。     

氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(Ox-LDL mcAb)。方法以Ox-LDL为抗原,免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞,用protein A柱亲和层析法纯化腹水中mcAb,用ELISA,western- blot等鉴定其生物学活性。结果获得2株能稳定分泌Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞(6E9D,7G3C),均为IgG1亚型;染色体数目为100-106条;腹水效价为105;western-blot分析和ELISA检测证实2株mcAb均与Ox-LDL有较高的特异性。结论本实验成功制备了2株抗Ox-LDL特异性的mcAb,可用于Ox-LDL免疫检测方法的建立。     

荧光定量PCR检测鼻咽部脱落细胞内EBV-DNA

目的 建立荧光定量PCR（FQ－PCR）检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法。方法 以患者鼻咽部脱落细胞内DNA作为样本，以EB病毒基因序列中EBNA1（核抗原1）基因片段作为扩增的靶DNA，同时从人β－珠蛋白DNA片段作为内参照，合成了两对引物，并设计了两个特异的荧光探针，优化了FQ－PCR反应体系，同时对这两个片段进行扩增，每一标本得到两个Ct值；CtE和Ctβ，得到单位细胞EB病毒的相对量。结果 临床标本29例中，阳性22例，阴性7例，临床资料证实阳性者全部为鼻咽癌（NPC），阴性者全部为非鼻咽癌。结论 建立的FQ－PCR检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法，能反映单位细胞病毒的复制情况，可用于NPC的筛查，并可能应用于该病的风险评估和疗效观察。     

胰岛素样生长因子I对A549细胞和淋巴细胞IGF—I受体mRNA表达调控的研究

目的 研究肺腺癌细胞株A549和淋巴细胞在外源性胰岛素样生长因子I（IGF－I）作用下,各自IGF－I受体（IGF－I R）mRNA的表达情况。方法 采用多重RT－PCR对IGF－I RmRNA进行半定量检测,研究0,5,20,80,160,320ng/ml不同浓度的重组人胰岛素样生长因子I(rIGF-I)及在某一特定浓度下作用不同时间对培养的A549细胞和淋巴细胞IGF-I RmRNA表达的影响。结果 当IGF－I增加至20ng/ml以上,淋巴细胞IGF－I RmRNA的表达显著降低,而A549细胞IGF－I RmRNA的表达未见明显改变。结论 外源性IGF－I不能显著降低肺腺癌细胞IGF－I R的转录水平,提示IGF－I R在肺腺癌的恶性增2殖过程中可能起重要作用。     

甲基化特异性基因扩增检测过程中的质量控制

目的构建adenomatous polyposis coli(APC)基因启动子1A的甲基化阳性质粒标准品,对甲基化特异性基因扩增(meth-ylation specific PCR,MSP)的检测灵敏度进行质量控制.方法对脐血淋巴细胞DNA转甲基并化学修饰,制备甲基化阳性和阴性模板,MSP后获得目的片段,克隆到pMD18-T质粒载体,测序筛选阳性和阴性质粒标准品,紫外分光法对标准品定量,对10倍梯度稀释的质粒进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR来获得弱阳性质控品,对36份组织样本进行MSP检测.结果将MSP后电泳能显示的质粒(105拷贝/ml)作为弱阳性质控品.在加入弱阳性质控品后,2例阴性的样本最终定为阳性;11例未定结果的样本最终7例定为阳性,4例定为阴性.36例样本无质控品前的甲基化阳性率为25%,有质控品后的阳性率为50%,两次结果差异显著(P=0.001).结论构建了携带甲基化阳性的APC基因启动子的质粒标准品并制备了低拷贝的弱阳性质控品,可以对MSP检测灵敏度进行质量控制,降低了检测的假阴性率.     

Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、ALL中的应用

摘要：目的：探讨Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、ALL中的应用价值。 方法：研究对象为1 500例健康体检者,110例IM、ALL、CLL及其他原因致外周血淋巴细胞升高患者。用Sysmex XE-2100血液分析仪检测血常规,统计Lymph-X和Lymph-Y参数并分析。 结果：健康体检者Lymph-X和Lymph-Y值与患者年龄、性别及淋巴细胞计数无相关性,参考区间分别为765.3~809.8、624.4~731.4。IM组的Lymph-X和Lymph-Y值分别为871.6±49.3和810.1±153.7,ALL组分别为885.8±70.4和884.9±244.4,明显高于对照组、CLL组以及淋巴细胞升高的其他疾病组（P<0.05）。当Lymph-X为839,Lymph-Y为755时,诊断IM的敏感性为94.4%,特异性为75.0%;当Lymph-X为836,Lymph-Y为792时,诊断ALL的敏感性为93.4%,特异性为75.2%。 结论：参数Lymph-X和Lymph-Y可用于IM、ALL的筛查。