表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖诱导的AD模型小鼠Aβ生成作用的研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠β淀粉样肽(Amyloid-βpeptide,Aβ)生成作用的影响。方法:将60只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、VE阳性组、EGCG低剂量组、EGCG中剂量组、EGCG高剂量组,每组10只。注射D-半乳糖建立AD小鼠模型后,对照组和模型组灌胃等量双蒸水;VE阳性组每天灌胃5.6%VE 1次;EGCG低、中、高剂量组分别按每天2 mg/kg灌胃0.04%EGCG、4 mg/kg灌胃0.08%EGCG和6 mg/kg灌胃0.12%EGCG 1次;持续给药28天后通过避暗试验和Morris水迷宫试验观察小鼠动物行为学变化;ELISA法检测小鼠脑匀浆中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Aβ水平;苏木精-伊红(HE)染色观察海马内神经元的变化。结果:EGCG能明显延长AD模型小鼠跳台潜伏期、减少跳台错误次数、缩短通过迷宫的时间和减少进入盲端的错误次数;且能显著减轻D-半乳糖诱导的AD模型小鼠海马神经元的损伤及降低其脑内IL-6、TNF-α和Aβ表达水平,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:EGCG可能通过降低D-半乳糖诱导的AD模型小鼠脑内Aβ的含量,来抑制神经细胞凋亡,从而改善学习记忆障碍。     

三漆方中2种成分提取工艺的优化

目的优化三漆方中表儿茶素和没食子酸的提取工艺。方法在单因素试验基础上,以料液比、提取时间、乙醇体积分数为影响因素,表儿茶素、没食子酸含有量的综合评分为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺。结果最佳条件为料液比1∶9,提取时间1.5 h,乙醇体积分数75%,表儿茶素、没食子酸含有量分别为1.847 2、0.469 9 mg/g,综合评分93.834 4。结论该方法稳定可靠,可用于提取三漆方中表儿茶素和没食子酸。     

表没食子酸酯诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨表没食子酸酯（EGCG）对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：SKOV3细胞分为4组,即阴性对照组（以正常培养液培养）、EGCG低浓度组（1 μmol/L EGCG）、EGCG中浓度组（10 μmol/L EGCG）和EGCG高浓度组（100 μmol/L EGCG）。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率,Hoechs染色观察细胞核凋亡,电镜观查细胞形态,蛋白质印迹（Western blot）检测Caspase-3表达。结果：细胞增殖抑制实验结果显示,EGCG低、中、高浓度组SKOV3细胞的增殖率为（81.33±3.71）%、（67.00±7.21）%和（54.67±3.84）%,与阴性对照组（101.00±3.06）%比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。Hoechst33258染色结果显示,EGCG低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为（16.77±2.48）%、（24.33±3.70）%和（39.67±4.11）%,与阴性对照组[（2.00±1.45）%]相比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。电镜观察结果显示,随着EGCG作用浓度的增加,SKOV3细胞超微结构损害程度逐渐明显。此外,EGCG可以升高Caspase-3表达水平。结论：EGCG通过增强Caspase-3表达诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。     

高效液相色谱法同时测定赤芍中没食子酸、没食子酸丙酯和柚皮素的含量

目的: 建立一种同时测定赤芍中没食子酸、没食子酸丙酯和柚皮素三种活性成分的高效液相色谱方法。方法: 采用ODS-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相采用甲醇-0.1%乙酸水溶液,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;检测波长为270 nm,柱温30 ℃。结果： 没食子酸、没食子酸丙酯、柚皮素分别在5~250 μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系（R²>0.999）。检测方法有良好的精密度和回收率。测定1 g赤芍生药中含有没食子酸、没食子酸丙酯、柚皮素分别为1.867、0.561和0.093 mg。结论： 建立的高效液相色谱法能同时准确测定赤芍中没食子酸、没食子酸丙酯、柚皮素三个活性成分的含量,稳定可靠,可用于赤芍药材的质量控制。     

EGCG对富亮氨酸重复激酶2活性的影响及其作用机制

目的: 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin 3 gallate, EGCG)对富亮氨酸重复激酶2(leucine rich repeat kinase 2, LRRK2)活性的影响及其分子机制。方法: 选用Ddc LRRK2 G2019S品系果蝇,分为7组,对照组用标准玉米培养基饲养,各实验组果蝇分别用含LRRK2抑制剂GW5074、N 乙酰半胱氨酸（NAC）及浓度为0.1、1、10和100 μmol/L的EGCG加药培养基饲养,检测并统计果蝇生命周期和运动能力,筛选出药物作用的最佳浓度与最适时间点;用蛋白质印迹法检测果蝇脑组织中p LRRK2、p p38 MAPK、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2, Nrf2)、p ERK1/2和酪氨酸羟化酶(TH)等蛋白的表达。结果： 与对照组相比,10 μmol/L EGCG延长果蝇寿命、改善果蝇运动能力的效果最为突出,1 μmol/L EGCG效果较好(P<0.05);各组果蝇第5周时行为学变化最显著(均P<0.05);与对照组相比,10 μmol/L 和1 μmol/L EGCG组Nrf2、p ERK1/2、TH表达均明显增加(均P<0.05),p LRRK2、p p38 MAPK表达明显降低(P<0.05)。 结论： EGCG可能通过Keap1 Nrf2 ARE、MAPK等信号通路有效抑制LRRK2激酶活性。     

没食子酸对小鼠骨髓细胞的辐射防护作用

目的 探讨没食子酸(gallic acid,GA)对小鼠骨髓细胞的辐射防护作用.方法 将健康雄性ICR小鼠随机分为生理盐水对照组、GA对照组、4个X线照射组和4个GA保护组,每组10只.X线照射组和生理盐水对照组给予0.01 mL/g生理盐水灌胃,GA对照组和GA保护组给予200 mg/kg的GA(20 mg/mL)灌...     

扫日劳清肺止咳胶囊中没食子酸的测定及超声提取工艺的优化

目的 测定扫日劳清肺止咳胶囊中的没食子酸并优化其超声提取工艺。方法 采用Hypersil BDS C₁₈色谱柱,以甲醇-乙腈-0.1%磷酸(5:5:90)为流动相,在260 nm处测定扫日劳清肺止咳胶囊中的没食子酸。以没食子酸的含量为评价指标、甲醇溶液为溶剂,通过单因素试验和正交试验测定甲醇浓度、超声温度、固液比、超声时间等因素的影响,确定最优提取条件。结果 最佳提取工艺为：甲醇浓度70%、超声温度50℃、固液比1:80、超声时间10 min; 4.04～40.4μg·mL^-1没食子酸与峰面积具良好的线性关系(r=0.9999),扫日劳清肺止咳胶囊中没食子酸的平均含量为4.83 mg·g^-1。结论 优化后的超声提取条件简便可行,没食子酸的提取含量高,测定结果准确。     

色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞的影响

目的 观察几种色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞形态及功能的影响.方法 体外培养正常表皮黑素细胞,分别加入合适浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、氢醌(HQ)、烟酰胺(NAA)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和维生素C磷酸酯镁(AP-Mg)干预细胞72h,测定酪氨酸酶活性和黑素生成量.用黑素体相关蛋白单克隆抗体(NKI-beteb)染色鉴定黑素细胞,观察并摄片.结果 3mmol/L EGCG,0.5mmol/L HQ,6mmol/L AP-Mg与黑素细胞共同孵育72h后,其细胞酪氨酸酶活性及黑素生成受到抑制,但只有EGCG组细胞形态发生变化;50nmol/L α-MSH干预后,细胞酪氨酸酶活性及黑素生成显著增加,形态改变较显著.1mg/mL NAA组细胞酪氨酸酶活性无改变,而黑素生成减少,细胞异形化.结论 EGCG,HQ,NAA,AP-Mg和α-MSH对黑素细胞都有显著的影响,虽然作用于黑素细胞的机制有所不同,但也有一些相似的地方,其具体机理有待于进一步研究.     

茶黄素复合物中单体对照品的制备研究

目的 研究茶黄素复合物和单体的对照品分离制备.方法 AB-8树脂吸附茶黄素,乙醇梯度洗脱得茶黄素复合物,进一步用半制备液相色谱分离茶黄素单体.结果 AB-8大孔树脂进行吸附,20%、30%、40%、50%、60%乙醇溶液梯度洗脱.洗脱速度为2 BV/h,制得质量分数80%的茶黄素复合物.以制备色谱进一步分离获得质量分数90%以上茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3'-没食子酸酯和茶黄素-3,3'-双没食子酸酯,以及质量分数大于70%的茶黄素的单体.结论 大孔吸附树脂和制备色谱结合可以从茶黄素复合物中获得比较理想的单体对照品.     

HPLC法测定不同采收期猴耳环中没食子酸的含量

目的:考察猴耳环的最佳采收时期.方法: 采用HPLC法测定不同采收期猴耳环中没食子酸的含量,以Hypersil C18为色谱柱,以水-甲醇-乙腈(450∶50∶1)用冰醋酸调至pH 3.0为流动相,检测波长为270 nm,流速为1.0 mL/min.结果: 没食子酸平均回收率为98.86%,RSD为1.57%.结论: 该方法灵敏、准确,重现性好,能有效控制猴耳环药材的质量,为选择其最佳采收期提供了可靠依据.