TaqMan MGB Real-time RT-PCR 检测西尼罗病毒方法的建立

目的建立一种灵敏、特异、高效的西尼罗病毒（West Nilevirus，WNV）感染诊断和流行病学调查的实验室检测方法。方法用C6／36细胞培养WNV并用Vero细胞蚀斑法滴定病毒浓度；根据wNVC蛋白基因组保守序列，设计一套特异性引物和TaqManMGB探针，用细胞培养病毒液进行方法的条件优化；用不同病毒评价方法的特异性，用系列浓度病毒稀释液和染毒蚊子评价方法的灵敏性。结果建立的TaqManMGBReal-timeRT-PCR方法可检出低于0．01PFU的WNVRNA，并可检出只含3只染毒蚊的标本；用该方法检测4种血清型登革病毒标准毒株、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒均为阴性。结论新建TaqManMGBReal-timeRT—PCR方法具有极高的特异性和灵敏性，是实验室早期诊断WNV感染和调查媒介携带WNV情况的理想方法。     

广东省2008-2015年诺如病毒感染暴发的危险因素分析

目的 研究2008-2015年广东省诺如病毒感染暴发疫情的危险因素,为诺如病毒感染的预防控制工作提供参考依据。方法 通过"突发公共卫生事件报告管理信息系统"收集2008年1月1日至2015年12月31日广东省报告的诺如病毒感染暴发疫情资料,并进行流行病学分析。采用RT-PCR 方法对2012-2015年73起诺如病毒感染暴发疫情的372份阳性标本进行基因测序亚型分析。结果 2008-2015年广东省共报告96起诺如病毒感染暴发疫情,其中2013-2015年共报告80起（占83.3%,80/96）。暴发地点在学校的占全部疫情的85.4%（82/96）;传播途径为食源性传播占40.6%（39/96）,接触传播占24.0%（23/96）,水源性传播占7.3%（8/96）。基因测序亚型分析显示, 2012-2013年的暴发主要由GⅡ.4/Sydney2012型诺如病毒感染引起（占30.0%,6/20）,2014-2015年的暴发主要由GⅡ.17型诺如病毒感染引起（占62.3%,33/53）。结论 食源性和接触传播及新出现的2种诺如病毒变异株GⅡ.4/Sydney2012变异株和GⅡ.17是引起广东省诺如病毒感染暴发的主要原因。     

广东省流行麻疹野病毒的核蛋白基因序列分析

广东省 2 0 0 0～ 2 0 0 1年分离到 7株麻疹病毒 ,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出该 7株麻疹病毒核蛋白 (N)基因碳末端 5 90个核苷酸。其中碳末端 45 0个核苷酸的序列测定和分析提示 ,该 7株病毒为麻疹野病毒H1基因型。 7株病毒之间核苷酸同源性为 96 .7%～ 10 0 0 %,和其它基因型相比 ,碳末端 45 0个核苷酸水平变异可达 12 0 %,提示氨基酸水平上的变异在 12 .4%。     

Vero-E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒敏感性的研究

目的 研究Vero—E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒的敏感性，为该病的病原学研究、诊断和疫苗制备奠定基础。方法 用Vero—E6、MDCK及293细胞对广东省部分SARS病人的咽拭子标本进行分离培养，并对分离物使用电镜、间接免疫荧光(IFA)及荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)的方法分别检测细胞和(或)培养上清波中的病毒含量。结果 感染SARS病人的咽拭子标本后，Vero—E6细胞出现病变(CPE)最早，电镜中可观察到Vero—E6细胞中大量的病毒颗粒，IFA试验感染病毒的Vero—E6细胞与SAPS病人的恢复期血清呈强阳性反应，FQ—PCR结果显示Vero—E6感染细胞内的病毒含量10^8拷贝／ml，高于293细胞(10^6拷贝／ml)及：MDCK(104拷贝／ml)。结论 三种细胞对SARS相关病毒的敏感性不同，Vero—E6是SARS相关病毒最敏感的宿主细胞。     

广东省1996年AFP病例及其密切接触者病原学监测分析

1996年广东省报告的急性驰缓性麻痹（AFP）病例263例，报告率为1．39／十万。其中216例采集了合格双份粪便标本，合格率为82．13％。有218例AFP病例采集了密切接触者粪便标本1031份。以上标本均进行了病毒分离。现将1996年263例AFP病例及密切接触者的粪标本的病原学监测结果分析如下：l材料与方法1．l资料来源来自于全省各市（区）的脊灰专报系统。l．2AFP病例及密切接触者的标本由报告App病例的医疗或卫生防疫部门采集、冷藏送省脊灰实验室。1．3细胞与诊断血清Hep－2、RD传代细胞和标准脊灰1、11、Ill型血清由国家脊灰实验室提供。…     

珠江河口水体霍乱弧菌监测及菌株毒力基因分布特征

目的 了解珠江河口水体中O1群和O139群霍乱弧菌的分布状况,分析菌株的分子特征和毒力基因特征.方法 对2009年1月至2010年12月从珠江河口水体中分离的59株O1群和10株O139群霍乱弧菌,采用聚合酶链反应(PCR)方法体外检测ctxA、tcpA、ace、zot、tcpl,hlyA、toxR和ompU等毒力相关基因,并进行毒力相关基因分型分析,对限制性内切酶Not Ⅰ消化后的基因组DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,采用BioNumerics软件分析图谱,得到菌株带型相似性的聚类分析树状图.结果 2009-2010年共采集1 152份水体标本,分离得到O1/O139群霍乱弧菌69株,其中O1群埃尔托霍乱弧菌59株(小川型18株,稻叶型41株),O139群霍乱弧菌10株.PCR检测69株菌ctxA全部阴性,hlyA和toxR全部阳性,基因分型可分成9个型.稻叶型菌株中,34.15％(14/41)为hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpⅠ+型;小川型菌株中,66.67％(12/18)为hlyA+toxR+型;O139群菌株中,70％(7/10)为hlyA+ toxR+型.PFGE分型发现,O139群菌株PFGE相似度为69.9％～ 95.5％;O1群菌株相似度为72.8％～ 100.0％,可分成3个聚类.结论 在霍乱流行间歇期,该地区外环境水体中O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株广泛存在,基因型别多样.     

广东省传染性非典型肺炎病原体的分离鉴定及检测结果分析

目的 对引起广东省传染性非典型肺炎(SARS)的病原体进行分离鉴定，并分析各市首发病例、死亡病例、各个阶段病例的检测情况，为该病的诊断和防治提供依据。方法 对2003年1～5月份采自广州、肇庆、江门、汕头、中山、河源、珠海等地的SARS病例的咽拭子、咽漱液等标本，用Vero—E6、Vero、MDCK、Hep—2、传代人胚肺5种细胞进行分离培养，并使用电镜、间接免疫荧光(IFA)、PCR及基因序列测定等方法对分离物进行鉴定，应用ELISA、荧光定量PCR等技术分别对各个阶段SARS病例的血清及咽拭子等标本进行检测。结果 5种细胞接种上述病人咽拭子标本后，均有部分出现细胞病变，电镜观察可找到冠状病毒样颗粒。分离物扩增出冠状病毒特异基因片断。分离物与病人恢复期血清抗体发生特异性反应。1～5月的病例标本SARS冠状病毒PCR阳性率分别为100．00％(2／2)、76．19％(16／21)、71．74％(33／46)、20．00％(18／90)、6．36％(11／173)；SARS冠状病毒抗体IgG阳性率分别为100．00％(2／2)、78．57％(11／14)、58．33％(14／24)、30．3％(10／33)、12．50％(9／72)。河源、佛山、肇庆、中山、东莞、珠海六市首发病例均检测出SARS冠状病毒I弗抗体。10个死亡病例中8例检测出SARS冠状病毒基因或相关抗体。结论 SARS冠状病毒是引起本次广东省SARS流行的主要病原体；不同时期SARS冠状病毒特异基因片断和抗体的检出率明显不同。     

1990～1996年广东省白喉疫情及免疫监测情况分析

１９９０～１９９６年广东省白喉疫情及免疫监测情况分析广东省卫生防疫站（广州５１０３００）朱展鹰彭志红柯昌文自１９８７年实施计划免疫以来，我省已控制了白喉的大流行，但随着经济发展流动人口聚增，一些城市先后出现病例，我省８０年代末及９０年代出现过由民工引...     

广东地区人禽流感H5N1毒株的核蛋白基因变异和进化

目的通过对人禽流感H5N1毒株核蛋白（NP）基因序列的变异分析，揭示毒株NP基因变异与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株NP基因序列，采用DNAStar5．0软件对检索的人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列进行比对和分析；并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果1997--2006年45株毒株胛基因核苷酸序列同源性分成3类，1997--1998年毒株为第1类，2004--2005年毒株为第2类，2003年毒株和2006年毒株为第3类；NP基因35个氨基酸位点全部置换，占7．03％（35／498）；2003—2006年H5N1毒株通过氨基酸第430位（1〈430T）位点的置换，增加一个糖基化位点（NGT430-432；GD—01—06毒株第370位发生N3加S变异；增加一个糖基化位点（NES368.370）。同义变异中，NP基因Ks（同义变异速度）值为2．03×10^-5～2．55×10^-5核苷酸／d，Ka（错义变异速度）值为1．58×10^-6～3．10×10^-6核苷酸／d，检验发现进化无明显选择性压力存在。结论1997--1998年毒株、2004--2005年毒株、2003年毒株和2006年毒株NP基因核苷酸有差异；2003--2006年人禽流感H5N1毒株NP基因增加一个糖蛋白位点、GD-01—06毒株再增加一个糖蛋白位点可能改变毒株抗原性。人禽流感H5N1毒株在自然界变异频繁，随着其自然进化，H5N1毒株具有人．人传播能力的概率较大。     

广东省1996年急性弛缓性麻痹病例流行病学分析及监测系统评价

AFP监测系统的建立和应用是消灭脊髓灰质炎(下简称脊灰)的重要措施。我省自1991年建立脊灰专报系统，1994年全面实施急性弛缓性麻痹(AFP)监测工作以来，已形成了一个覆盖全省的监测网络，AFP监测系统的敏感性、及时性和完整性得到改善和提高。现将我省1996年AFP病例进行流行病学分析并对监测系统评价如下：