广东省传染性非典型肺炎病原体的分离鉴定及检测结果分析

目的 对引起广东省传染性非典型肺炎(SARS)的病原体进行分离鉴定，并分析各市首发病例、死亡病例、各个阶段病例的检测情况，为该病的诊断和防治提供依据。方法 对2003年1～5月份采自广州、肇庆、江门、汕头、中山、河源、珠海等地的SARS病例的咽拭子、咽漱液等标本，用Vero—E6、Vero、MDCK、Hep—2、传代人胚肺5种细胞进行分离培养，并使用电镜、间接免疫荧光(IFA)、PCR及基因序列测定等方法对分离物进行鉴定，应用ELISA、荧光定量PCR等技术分别对各个阶段SARS病例的血清及咽拭子等标本进行检测。结果 5种细胞接种上述病人咽拭子标本后，均有部分出现细胞病变，电镜观察可找到冠状病毒样颗粒。分离物扩增出冠状病毒特异基因片断。分离物与病人恢复期血清抗体发生特异性反应。1～5月的病例标本SARS冠状病毒PCR阳性率分别为100．00％(2／2)、76．19％(16／21)、71．74％(33／46)、20．00％(18／90)、6．36％(11／173)；SARS冠状病毒抗体IgG阳性率分别为100．00％(2／2)、78．57％(11／14)、58．33％(14／24)、30．3％(10／33)、12．50％(9／72)。河源、佛山、肇庆、中山、东莞、珠海六市首发病例均检测出SARS冠状病毒I弗抗体。10个死亡病例中8例检测出SARS冠状病毒基因或相关抗体。结论 SARS冠状病毒是引起本次广东省SARS流行的主要病原体；不同时期SARS冠状病毒特异基因片断和抗体的检出率明显不同。     

Hep-2细胞在严重急性呼吸综合征病原学检测中的应用研究

目的 应用人咽喉上皮癌细胞(Hep-2)对严重急性呼吸综合征(SARS)病例标本进行病原体检测与研究，为该病的预防与控制提供依据。方法 采用Hep-2细胞培养法，对2003年l～2月广东省收集的SARS病例的咽拭子等标本分离致病病原体，并应用电镜形态学、逆转录．多聚酶链反应(RT-PCR)扩增部分基因进行序列分析，并对分离的病原体进行研究。结果 132例SARS病例的3l份咽拭子、100份痰液和l份尸检肺组织标本中有73份标本致单层细胞出现“蚀斑病变”，细胞病变阳性率为55．3％，其中48h阳性率为36．4％。采用巢式PCR(Nested-PCR)对其中25份出现“蚀斑病变”细胞培养物进行检测，能扩增出冠状病毒的特异片段；对中2-18、中2-19等6份Nested-PCR产物进行基因序列分析，结果 显示其核苷酸序列与国内外公布的结果一致，氨基酸序列与已知的人或动物冠状病毒的同源性在58％～76％之间。通过电镜在SARS病例标本(中2-10)病变细胞及l份尸检肺组织标本中观察到衣原体样颗粒和病毒样颗粒。结论 从接种SARS病例标本的Hep-2细胞病变培养物中证实有冠状病毒。     

一例输入性非典型肺炎患者病原体的分离鉴定及其变异性研究

目的 对一例输入性非典型肺炎病例的病原体进行分离鉴定，研究其变异情况，为该病的诊断和防治提供依据。方法 用Vero E6细胞对病人的咽拭标本进行分离培养，并对分离物使用电镜、间接免疫荧光(IFA)、巢式PCR及S基因核苷酸序列测定等方法进行分析。结果 在该病人的咽拭标本中，成功地分离到一株冠状病毒(R69)，将部分S基因测序并与不同地区非典型肺炎病人分离株进行比较，表明分离到的毒株为一种新型冠状病毒。结论 目前存在冠状病毒的变异株，病毒核苷酸序列与广东省原发性SABS病人分离到的冠状病毒有所不同。     

严重急性呼吸综合征病毒的形态与发生

将SARS患者的咽拭子感染Vero E6细胞,用电子显微技术等对SARS病毒进行了研究.结果表明新分离到的病毒粒子没带囊膜时直径大多约50nm,带有囊膜的直径约100 nm.通过RT-PCR等证明该病毒是新的冠状病毒.这些病毒可与SARS康复患者的血清呈强烈的阳性反应,表明此新的冠状病毒是引起SARS主要病原之一.文中还对病毒的发生机制和细胞中的分布进行了探讨.