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目的在原核表达系统中对乙型脑炎病毒包膜糖蛋白(E蛋白)的B区多肽抗原进行高效表达、纯化及血清学评价。方法利用PCR技术从乙脑减毒活疫苗中扩增编码B区的DNA片段,酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3)并表达B区多肽抗原,表达产物经液相层析纯化;用乙脑病人血清对纯化后的B区多肽抗原进行评价。结果重组质粒pET22b-JEB经双酶切,其插入的外源基因片段为372 bp,与预期DNA片段大小一致。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约16kD的外源基因蛋白带,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA血清学评价,表明重组B区多肽抗原具有较高的灵敏性及特异性。结论成功构建了表达载体pET22b-JEB,在原核系统中表达的B区多肽抗原具有良好的血清学检测价值。 相似文献
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不同抗原性甲3 (H3N2) 亚型流感病毒的鉴定及分子生物学研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:对不能用当年标准血清进行鉴定的甲3(H3N2)亚型流感病毒进行抗原性分析及分子生物学研究。方法:用交互血凝抑制试验对毒株进行抗原性分析,提取病毒RNA,用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HA1(血凝素重链区)基因片段,产物纯化后测序并分析结果。结果:发现两株从鸡胚分离到的甲3(H3N2)亚型“D”相毒株与2株从MDCK细胞分离到的“0”相毒株抗原性已明显不同;其中1999年分离的“D”相与“0”相2毒株的抗原比大于256,氨基酸序列同源性为93%,抗原决定簇A区和B区氨基酸位点相差分别为50%及35%;受体结合部位(RBS)有6个氨基酸位点发生变异(左侧壁1个、前壁3个、右壁2个)。结论:人群中存在没有发生“0”相变异的甲(H3N2)亚型“D”相毒株,其抗原性与当前流行的“O”相变异株已明显不同,提示今后在鉴定甲3(H3N2)亚型毒株时,需根据毒株的来源和相特性选择适合的标准血清进行鉴定。 相似文献
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目的 明确广东省登革热流行因素。探讨预防控制对策。方法 调查分析1990-2000年登革热病例的分布特征和流行因素,测定登革Ⅰ型病毒地方分离株E/NS1基因片段核苷酸序列。结果 1990-2000年间,广东省共报告登革热病例9747例,死亡3例。年发病率在0/10万-9.75/10万之间,平均为1.27/10万。流行多呈爆发,疫情涉及13个市(占全省21个市的61.9%)。主要集中在广州,潮州,肇庆和佛山市,呈现高度集中而相对分散特点,敏月均有登革热病例报告,其中1-6月份为散发输入病例,7-12月份为流行期,男性:女性为1.04:1,所有年龄组均易感,四个型别的登革病毒均发生过流行,同一地区不同年份可流行不同型别病毒,同一年份不同地区也可流行不同型别病毒,广东省12株登革Ⅰ型病毒地方分离株E/NS1基因片段核苷酸序列,显示广东省登革Ⅰ型代表毒株可分为两个基因亚型。临床表现以典型登革热为主,广东省存在有利于登革热流行的自然因素和社会因素。结论 广东省登革热疫情同国外登革热流行程度相关联。流行呈输入性流行的特征,至今仍无证据表明已成为地方性疾病。 相似文献
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广东省SARS流行株M基因序列分析 总被引:3,自引:2,他引:1
目的:测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列,通过分析该基因序列的变异情况,初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法:提取病毒RNA,用M基因特异引物进行RT-PCR,将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果:13份标本M基因核苷酸序列同源性很高,为99.7%~100%,M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异,1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C),3株203位变化为无义突变。结论:M基因核苷酸序列变异不大,初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基,但氨基酸序列相同;从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。 相似文献
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目的 鉴定斑点热群立克次体广东分离株GDFK58-2000和GDFK59-2000种属类型。方法 用PCR方法扩增GDFK58-2000和GDFK59-2000的OmpA基因起始部位533bp片段,克隆于pMD18-T载体并进行测序,测序结果与Genbank中其它斑点热群立克次体相应基因片段的核苷酸进行比较,用DNASTAR软件分析结果。结果 GDFK58-2000、GDFK59-2000和西伯利亚立克次体之间的核苷酸同源性为99.6%-99.8%,推断的氨基酸同源性为99.6%-99.8%,常用于分类鉴定的酶切位点完全一致。结论 两株广东分离株属于斑点热群立克次体的西伯利亚立克次体种。 相似文献
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广东省传染性非典型肺炎病原体的分离鉴定及检测结果分析 总被引:4,自引:1,他引:3
黄吉城 林锦炎 万卓越 郑焕英 陈秋霞 张欣 李晖 郑夔 鄢心革 方苓 周惠琼 江立敏 钟豪杰 黄平 陈经雕 刁丽梅 张万里 谢韶英 柯昌文 张勤奋 崔金明 黄小俊 张景强 《华南预防医学》2003,29(3):29-31,T001
目的 对引起广东省传染性非典型肺炎(SARS)的病原体进行分离鉴定,并分析各市首发病例、死亡病例、各个阶段病例的检测情况,为该病的诊断和防治提供依据。方法 对2003年1~5月份采自广州、肇庆、江门、汕头、中山、河源、珠海等地的SARS病例的咽拭子、咽漱液等标本,用Vero—E6、Vero、MDCK、Hep—2、传代人胚肺5种细胞进行分离培养,并使用电镜、间接免疫荧光(IFA)、PCR及基因序列测定等方法对分离物进行鉴定,应用ELISA、荧光定量PCR等技术分别对各个阶段SARS病例的血清及咽拭子等标本进行检测。结果 5种细胞接种上述病人咽拭子标本后,均有部分出现细胞病变,电镜观察可找到冠状病毒样颗粒。分离物扩增出冠状病毒特异基因片断。分离物与病人恢复期血清抗体发生特异性反应。1~5月的病例标本SARS冠状病毒PCR阳性率分别为100.00%(2/2)、76.19%(16/21)、71.74%(33/46)、20.00%(18/90)、6.36%(11/173);SARS冠状病毒抗体IgG阳性率分别为100.00%(2/2)、78.57%(11/14)、58.33%(14/24)、30.3%(10/33)、12.50%(9/72)。河源、佛山、肇庆、中山、东莞、珠海六市首发病例均检测出SARS冠状病毒I弗抗体。10个死亡病例中8例检测出SARS冠状病毒基因或相关抗体。结论 SARS冠状病毒是引起本次广东省SARS流行的主要病原体;不同时期SARS冠状病毒特异基因片断和抗体的检出率明显不同。 相似文献