阻断泛素-蛋白酶体通路诱导PC12细胞死亡和泛素阳性包涵体生成

目的探讨泛素蛋白酶体通路的功能障碍对于多巴胺能细胞的活力以及胞质内包涵体生成的影响。方法应用蛋白酶体抑制剂lactacystin(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)处理PC12细胞24h,MTT方法检测细胞活力,WesternBlot方法测定细胞内泛素化蛋白质水平,免疫荧光细胞化学染色观察泛素免疫阳性包涵体的生成。结果经5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/Llactacystin处理24h后,PC12细胞的活力显著降低(细胞存活率分别为81.5%±3.6%、75.4%±2.4%、70.2%±2.7%和60.4%±3.9%),呈现剂量依赖性。WesternBlot证实对照组细胞内未检测到相对高分子质量的泛素化蛋白质;随着lactacystin作用浓度的增加,细胞内相对高分子质量泛素化蛋白质的含量逐渐增高。免疫荧光染色显示对照组中仅有极少数细胞内含有泛素阳性包涵体;20μmol/Llactacystin处理组中含有泛素阳性包涵体的细胞数目显著增多(P<0.01)。结论泛素蛋白酶体通路的功能缺失能诱导多巴胺能细胞死亡,造成细胞内泛素化蛋白质积聚,促进胞质内泛素阳性包涵体的生成,可能在帕金森病黑质多巴胺能神经元变性死亡和Lewy小体形成中发挥重要作用。     

重组人纤溶酶原Kringle 5的体内药代动力学及应用价值

目的 研究纤溶酶原Kringle 5体内药代动力学及其显像和治疗价值.方法 应用基因工程技术重组人纤溶酶原Kringle5(rhK5),Iodogen法和直接法分别制备123I-rhK5、131I-rhK5和99mTc-rhK5.MTT比色法检测rhK5、125I-rhK5和99mTc-rhK5的活性.应用3p87程序分析125I-rhK5的药代动力学.制作肺癌移植瘤裸鼠模型,按3.7 MBq经尾静脉注射99mTc-rhK5,于不同时间点观察显像情况.按7.4 MBq经尾静脉注射131I-rhK,观察肿瘤生长及其微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,同时设立单纯rhK5蛋白治疗组和阴性对照组进行比较分析.结果 125I-rhK5、131I-rhK5和99mTc-rhK5的标记率分别为86%、84%、90%,放化纯度均＞90%;活性检测发现,标记与未标记rhK5之间无显著差异;125I-rhK5经尾静脉单剂量给药后,选择二室模型拟合药-时曲线,分布相半衰期(T1/2(a))为(0.31±0.03)h,清除相半衰期(T1/2(β))为(14.48±0.73)h,药-时曲线下面积(AUC)为(436.58±34.60)ng·mL-1·h-1.注射99mTc-rhK5后1 h可见放射性浓聚,4 h显像更趋清晰,肿瘤部位呈"热区".与rhK5蛋白治疗组和阴性对照组比较,131I-rhK5治疗组肿瘤生长明显受到抑制(抑瘤率为34.14%),且MVD和VEGF表达显著减少.结论 核素标记rhK5进行肿瘤显像和治疗是可行的.rhK5体内应用每天注射1次即可,为体内用药提供了实验依据.     

川崎病误诊1例分析

患儿,男,2岁,因发热7d入院.患儿于7d前无明显诱因出现发热,呈间歇性,体温在38～40℃之问,但无咳嗽、气促、呕吐、腹泻等症状,5d前曾出现一过性皮疹,口唇黏膜干燥,唇皲裂.     

臂丛神经麻醉下中医肩关节松解治疗肩周炎

目的:采用臂丛神经麻醉下治疗肩周炎。方法:60例患肩周炎的患者在肌间沟臂丛麻醉下通过中医手法松解关节粘连,然后将消炎药和神经滋养药注入关节腔,术后配合功能锻炼。结果:大多数患者经治疗后效果满意,病情明显改善。结论:采用臂丛麻醉下进行肩关节炎的治疗,病人无痛苦,疗效确切,值得推广。     

重组人纤溶酶原Kringle 5的125Ⅰ标记及其体内代谢

目的:探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle 5(K5)的生物学活性及其体内药代动力学.方法:采用基因工程方法制备重组人纤溶酶原Kringle 5(rhK5),以小剂量Iodogen多次重复标记法标记rhK5,细胞增殖抑制试验和亲和力试验检测125Ⅰ-rhK5活性,并研究其在大鼠体内的药代动力学.结果:125Ⅰ-rhK5的标记率为86%,放射化学纯度为96%.细胞增殖抑制试验表明,125Ⅰ-rhK5的生物活性与未标记rhK5相当.大鼠单次股静脉注射2vg125Ⅰ-rhK5后,血药浓度-时间曲线符合两室模型,T1/2α为(0.31±0.03)h,T1/2β为(14.48±0.73)h,AUC为(436.58±34.6)ng·h·ml-1.结论:小荆量10dogen多次重复125Ⅰ标记不影响rhK5的生物学活性.125Ⅰ-rhK5大鼠体内单次静脉注射的药代动力学符合两室模型,半衰期约为1 5h.125Ⅰ-rhK5为肿瘤的显像和靶向治疗奠定了基础.     

杆状病毒介导内耳基因治疗的实验研究

目的探讨重组杆状病毒作为内耳基因治疗载体的可行性及其转染特点。方法应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,建立新生大鼠耳蜗Corti器体外模型,加入携带报告基因的病毒悬液,观察外源基因表达情况,并将其通过圆窗直接显微注射进入豚鼠内耳,观察杆状病毒在体内的转染特点。结果Bac-GFP联合丁酸钠可以高效转染毛细胞和螺旋神经节细胞,但并没有改变Corti器的正常结构。体内试验显示杆状病毒可以忠实和长效转染螺旋神经节细胞,而未被补体系统灭活。结论实验证实杆状病毒有希望成为内耳基因治疗的新型载体。     

人源性纤溶酶原Kringle5基因杆状病毒表达载体构建及蛋白表达纯化

目的构建重组人源性纤溶酶原Kringle 5(rhK5)杆状病毒表达载体并进行真核表达。方法采用bac-to-bac杆状病毒表达系统制备杆状病毒Bacmid-rhK5,感染草地贪夜蛾卵巢细胞sf21昆虫细胞,经Western blot确定rhK5在sf21细胞中的表达方式和表达量。用血管内皮细胞抑制实验检测纯化蛋白活性。结果杆状病毒表达载体pFastBac HTB-rhK5构建成功,Western blot检测发现,rhK5在sf21细胞中呈胞内表达,纯化后重组蛋白的产量约为90μg/L。血管内皮细胞抑制实验显示,半数有效剂量(ED50)为4μg/mL。结论rhK5杆状病毒表达载体于悬浮培养的sf21细胞中高效表达,为大量表达更接近天然的具有生物学活性的rhK5蛋白奠定了基础。     

现代核医学技术的挑战和机遇

核医学是核素(同位素)及其相关技术在疾病诊断、治疗和研究上应用的学科.上世纪60年代开创时期,沿用苏联命名为放射医学,包括同位素应用、放射病防治和放射卫生三方面内容.由于放射性核素(同位素)在医学上的应用发展迅速,同位素应用从放射医学分离出来,改称核医学,接着各医学院校开设核医学专业课,各医院建立独立的核医学科,学科迅速成长.我校自1960年3月3日在瑞金医院首先建立新专业,随后各医院相继成立独立的科室,至今已有45周年,为临床医学的发展做出了重要贡献.     

18F-FDG PET延迟显像在肿瘤诊断中的价值

目的探讨双时相18F-FDG PET显像图像、标准摄取值(SUV)及储留指数(RI%)在恶性肿瘤诊断中的价值.方法对104例疑患恶性肿瘤者及59例体检者进行18F-FDG PET全身扫描,有局灶性代谢增高的患者经饮水、进食后3 h进行延迟显像,用勾划感兴趣区方法计算两次显像的SUV,并计算18F-FDG的RI%.随访其手术病理结果、治疗转归及再次CT/MR检查结果,综合比较18F-FDG及RI%对恶性肿瘤诊断的应用效果.结果56例患者40 min显像有局灶性代谢增高病灶;经3 h延迟显像后发现病灶形态发生较大改变或病灶消失,综合分析为生理性代谢增高.其余107例共发现128个可疑病灶,以在40 min时SUV≥3为标准,判断恶性诊断的灵敏度、特异性、准确性分别为80.3%、90.7%、84.2%;以18F-FDG在病灶中的RI%≥10%作为标准,灵敏度、特异性、准确性分别为72.8%、78.9%、80.3%.结合以上两项标准,恶性肿瘤诊断灵敏度、特异性、准确性分别为100%、98.4%、98.4%.结论3 h延迟显像对肿瘤诊断有辅助作用,结合应用最大SUV及RI%两项指标可提高诊断准确率.     

受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的 检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率。方法 人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联,盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物,对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β－半乳糖苷酶和人肿瘤坏死因子α基因转移。结果 检测到外源基因表达;转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高。结论 受体介导基因转移具有良好的靶向性,但表达效率低。