新生儿Rh血型不合溶血病基因诊断及治疗进展

新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn,HDN)是由于母婴血型不合引起的同族免疫性溶血,发生于胎儿期及新生儿早期。临床中以ABO血型不合最为常见,其次为Rh血型不合。但是Rh血型不合溶血病较ABO血型不合溶血病更为严重,其起病早,进展快,溶血程度重,易出现高胆红素血症及胆红素脑病,遗留神经系统后遗症,故应引起重视。现对新生儿Rh血型不合溶血病的基因诊断及治疗进展综述如下。     

应用D21S11、D21S1440和Penta D短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的 探讨应用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)诊断唐氏综合征(Down's syndrome,DS)的可行性,为建立一种快速、准确诊断DS的技术提供依据.方法 用定量荧光聚合酶链反应扩增719份样本(包括外周血389例、羊水282例和绒毛48例)21号染色体上D21S11、D21S1440和Penta D STR基因座,通过对扩增产物条带的分析达到诊断DS的目的.结果 核型正常的652份样本中,635份表现为荧光强度为1∶1的2条带或1条带,17例表现3条带,为假阳性.67份DS样本均得到了诊断,53份样本出现1∶1∶1的3条带(峰),14份样本出现2:1的2条带(峰).D21S11、D21S1440和PentaD STR基因座诊断DS的灵敏度和特异度分别为76.12％和98.62％、71.64％和98.93％、89.55％和99.85％.联合应用3个基因座诊断DS的灵敏度为100％(67/67),特异度为97.39％(635/652).结论 用定量荧光聚合酶链反应扩增STR基因座具有灵敏度高、特异度强、简便、快速等优点,在临床上有广阔的应用前景,是大规模产前筛查DS的理想工具.     

常见遗传代谢性肝病的基因诊断进展

肝脏是人体进行物质代谢的主要器官,由于各种遗传缺陷引起的代谢通路异常都可以导致遗传代谢性肝病的发生。遗传代谢性肝病种类繁多,单一病种患病率低,但总体发病率较高、有家族聚集的特点,除肝脏外的任何器官、系统均可以同时受累,如果不能得到及时的诊断和治疗常导致早期夭折或终     

口腔黏膜组织癌变趋势的判别

目的建立口腔黏膜组织癌变趋势的判别方法,为临床肿瘤或疑似癌变组织的早期诊断奠定研究基础。方法采用RT-PCR技术检测口腔正常组织、口腔黏膜白斑病组织（oral leukoplakia,OLK）和口腔鳞状细胞癌（oralsquamous cell carcinoma,OSCC）组织的肿瘤相关基因（NF-1,ACP-2,BCL-2,CLK-3,FKBP-8,SOCS-3,XRCC-1,CTNNB-1,GDF-15）表达水平,采用Fisher判别分析建立口腔黏膜组织癌变趋势大小的基因诊断方法,采用Cross-validated（a）法对本判别方法进行评价。结果 ACP-2,BCL-2及SOCS-3 3个基因的表达水平在3种组织间逐渐降低（P〈0.05）,而NF-1,CLK-3,FKBP-8,XRCC-1,CTNNB-1及GDF-15 6个基因的表达水平在3种组织间逐渐升高（P〈0.05）;口腔黏膜组织癌变趋势的判别公式：Y1=-16.811＋0.477 XNF-1＋0.540 XACP-2-0.543 XCTNNB-1-0.089 XSOCS-3;Y2=-35.832＋0.073 XNF-1-0.074 XACP-2＋0.306 XCTNNB-1＋0.191 XSOCS-3;判别界值〉8.6513可判定为无癌变,0.1117～8.6513为轻度癌变组织,〈0.1117为癌变组织;采用Cross-validated（a）法进行评价,总判别符合率为100%;交互判别符合率为100%,灵敏度为100%,特异度为100%。结论本研究建立了口腔黏膜组织癌变趋势判别公式,有助于其基因诊断方法的建立。     

广西南宁市婚检人群珠蛋白生成障碍性贫血筛查现况分析

目的 调查广西南宁市开展免费婚检以来自愿接受珠蛋白生成障碍性贫血筛查的现况.方法 用血红蛋白电泳法联合血细胞分析仪检测红细胞平均体积(MCV)和红细胞平均血红蛋白含量(MCH),同时进行红细胞渗透脆性试验,对所有受检对象进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查;同时用多重聚合酶链反应(PCR)和反向斑点杂交法(RDB)对部分筛查结果异常者进行珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断.结果 在7 896例受检者中,共筛查出1 432例异常,占18.14％.有166例接受珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断,占筛查异常者的11.59％;经基因诊断,排除珠蛋白生成障碍性贫血29例,占17.47％,确诊137例,占82.53％;其中,α珠蛋白生成障碍性贫血94例,占68.61％;β珠蛋白生成障碍性贫血42例,占30.66％;a复合β珠蛋白生成障碍性贫血1例,占0.73％.结论 广西南宁市免费婚检人群珠蛋白生成障碍性贫血筛查检出率较高,接受珠蛋白生成障碍性贫血基因检测比率较低,需加大宣传力度,进行婚育指导,对优生优育工作,提高人口素质有重要意义.     

云南德宏地区傣族人群珠蛋白生成障碍性贫血社区群体筛查和基因诊断结果分析

目的 了解该地区傣族人群珠蛋白生成障碍性贫血(Thal)患病率和基因缺失突变类型.方法 对710例傣族人群进行红细胞指数、微量血红蛋白(Hb)电泳、HbA2定量检测初筛,以聚合酶链发应(PCR)和反向点杂交技术鉴定β-Thal基因突变类型,以跨跃断裂位点PCR(GAP-PCR)技术和凝胶电泳鉴定α-Thal基因缺失类型.结果 α-和β-Thal检出率分别为25.35%(180/710)、14.51%(103/710),β-Thal复合α-Thal检出率为29.13%(30/103).结论 该地区傣族人群Thal检出率较高,应积极制订有效的干预和控制措施,降低Thal患儿的出生率.     

应用三联PCR技术产前诊断假性肥大型进行性肌营养不良的研究

目的通过对两例散发的BMD家系中的先证者和胎儿进行DMD基因和SRY基因分析,拟建立一种快速、准确、适用于临床的DMD/BMD的产前基因诊断方法。方法提取羊水细胞基因组DNA,通过检测SRY基因鉴定胎儿性别,以多重PCR方法对DMD基因缺失热区的18个外显子进行基因缺失的筛查,结合4对STR引物(内含子44、45、49、50)进行短串联重复序列多态性连锁分析(STR-PCR),分析结果经DNA测序验证。结果 SRY基因分析结果显示家系1胎儿为女性,家系2胎儿为男性,与超声诊断结果一致。两例BMD先证者均未检测到18个外显子的缺失,两家系的母亲及家系1的女性胎儿均为BMD基因STR-49位点杂合子,家系2的男性胎儿为BMD。同时发现了STR45、STR50的非常见基因型。结论应用SRY基因检测胎儿性别及多重PCR方法对DMD基因外显子缺失的检测,结合STR-PCR技术检出非缺失型携带者并行产前诊断,此三联PCR方法具有快速、简便、直观可靠的特点,特异性高,实验可操作性强,适用于临床推广应用。     

南宁地区14096例儿童地中海贫血筛查与基因诊断分析

目的了解南宁地区儿童地中海贫血（TM）发生情况、基因突变类型及频率。方法通过全血细胞分析、血清铁蛋白检测对南宁地区14096例儿童进行TM初步筛查,对筛查结果阳性者进行α—TM或（和）β—TM基因突变检测。结果初步筛查阳性2594例,阳性率18．40％,进一步经基因分析确诊TM1878例,检出率13．32％,其中α—TM和β-TM分别为1161例（8．24％）和855例（6．07％）,其中包括α—TM合并β—TM138例（0．98％）,中间型、重型TM334例（2．37％）。检出α-TM基因型共22种,以- -．＊^sea／αα为主,占49．79％;β—TM基因型共28种,以CD41-42（-TCTT）／N和CD17（A→T）／N为主,分别占40．70％和25．73％。6种α-等位基因1410个,以--^sea为主,突变率为2．84％;10种β-突变位点967个,以CD41-42（-TCTT）和CD17（A→T）为主,突变率为1．59％和0．98％。结论南宁地区儿童TM发生率高,TM基因突变类型多,应加强育龄人群及新生儿期TM筛查,以降低TM相关出生缺陷率,早期干预治疗。     

重庆市永川地区青少年耳聋患者耳聋基因热点突变筛查分析

目的筛查重庆市永川地区非综合征型青少年耳聋患者中我国耳聋基因热点突变,初步了解该地区耳聋基因热点突变谱系及发生频率。方法收集重庆市永川区特殊教育学校的永川籍非综合征型青少年耳聋患者60例,经监护人知情同意,抽取外周静脉全血并提取基因组DNA,应用晶芯R九项遗传性耳聋检测试剂盒(微阵列芯片)检测中国人群中常见的4个耳聋基因的9个突变位点,包括GJB2(235delC、176del16、299delAT和35delG)、SLC26A4(IVS7-2A>G、2168A>G)、线粒体12SrRNA(1494C>T、1555A>G)、GJB3(538C>T)。结果 60例受检者全部为重度或极重度非综合征型耳聋,共检出耳聋基因突变22例,其中GJB2235delC纯合突变型2例;GJB2235delC/176del16复合杂合突变型1例;GJB2235delC/299delAT复合杂合突变型1例;GJB2235delC杂合突变型8例;GJB2299delAT纯合突变型1例;GJB235delG/SLC26A4IVS7-2A>G复合杂合突变型1例;SLC26A4IVS7-2A>G杂合突变型2例;线粒体12SrRNA1555A>G均质型突变型6例。60例受检者中47号与55号为亲兄妹,后续统计仅纳入先证者,所以只将47号纳入统计,样本总量计为59例。59例耳聋患者中我国耳聋基因热点突变的携带率是37.29%(22/59),其中GJB2基因突变是该人群首要的致病因素,携带率为23.73%(14/59),线粒体12SrRNA基因突变检出率为10.17%(6/59),高于SLC26A4基因的5.08%(3/59),未检出GJB3基因突变。结论重庆市永川地区非综合征型青少年耳聋患者耳聋基因突变携带率较高,对该地区耳聋患者及高危人群进行耳聋基因突变的筛查是防控永川地区遗传性耳聋的首要步骤,在此基因诊断的基础上再结合用药指导、产前诊断、临床干预可有效减少该地区耳聋的发生。     

白癜风皮损组织中黑素细胞谱系特异性标记基因检测

目的针尖皮肤切削术结合逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检9n,4白癜风皮损组织中黑素细胞谱系特异性标记基因的表达,旨在预测治疗后白癜风皮损出现毛囊复色的可能性。方法选取6例就诊于武汉大学人民医院皮肤科静止期白癜风患者和4例健康志愿者,用针尖皮肤切削术对受试者白斑的中心、近边缘和周边“正常皮肤”处活检,抽提组织总RNA,用RT—PCR技术测定标本中多巴色素异构酶（Dct）,酪氨酸酶（Tyr）和管家基因β-肌动蛋白（ACTB）mRNA的表达。结果（1）用针尖皮肤切削术获取不同大小（3mg和7mg）的组织标本并与负压吸疱法采集的表皮片进行比较,结果显示针头切削术获取7mg组织,经研磨异硫氰酸胍-苯flff（Triz01）法抽提总RNA,能在正常皮肤组织中检测到3种基因表达。同时对10例针尖皮肤切削术后的局部伤口愈合进行了追踪随访,1个月后10例均正常愈合,未见瘢痕形成。（2）白癜风皮损黑素细胞谱系特异性标记基因检测：皮损中心区检测出3种模式,即Dct＋Tvr-ACTB＋,Dct—Tyr-ACTB＋和Dct＋Tyr＋ACTB＋。对1例检测结果“Dct＋Tyr-ACTB＋”的患者施以308nm准分子光照射2次,皮损即出现毛囊复色。结论针尖皮肤切削术结合RT—PCR技术检测白癜风皮损组织中黑素细胞谱系标记基因表达,是一种有价值的预测白癜风皮损可能出现毛囊复色的微创准确方法。