高密度脂蛋白及其亚型氧化修饰后对人脐静脉内皮细胞损伤及TFPI-1表达的影响

目的观察PPARδ激动剂GW501516对HUVECPAI-1和tPA表达的影响。方法不同浓度GW501516(0、10、25、50、100nmol/L)处理HUVEC36h,用Rea1-timePCR和Western blotting分别检测组织型纤溶酶原激活物,细胞纤溶酶原激活物抑制剂1的mRNA和蛋白的表达,再用50nmol/LGW501516分别处理HUVEC不同时间(0、12、24、36、48h和72h),用Rea1-timePCR和Western blotting分别检测组织型纤溶酶原激活物,细胞纤溶酶原激活物抑制剂1mRNA和蛋白的表达。并?...     

3种动物模型与人动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的建立并比较不同动物模型动脉粥样硬化（As）病变的病理形态学特征。方法用高脂饮食喂养建立小型猪、新西兰兔、载脂蛋白（Apo）E-/-小鼠As模型。苏丹Ⅳ染色检测血管As病变大体形态,HE染色进行显微形态学分析。结果3种动物模型都在主动脉弓处病变最明显,其中小型猪较新西兰兔和ApoE-/-小鼠在腹主动脉的病变更加明显。显微形态学分析发现,3种动物模型与人As病变都存在着一定的差异。结论动物模型As病变在不同研究中能一定程度上代表人类As病变,并不能完全代替人类病变。     

SDF-1α基因与绿色荧光蛋白融合载体的构建及亚细胞定位

目的构建SDF-1α基因与绿色荧光蛋白的融合蛋白表达载体，进而观察SDF-1α基因编码蛋白在细胞内的定位情况。方法用EcoRI内切酶从pMD-T18一SDF-1α重组载体中酶切分离SDF-1α基因的完整ORF，构建pEGFP-C1-SDF-1α的融合表达载体，脂质体转染COS-7细胞，并在荧光显微镜下观察表达的融合蛋白。结果SDF-1α基因在COS-7细胞中高效表达，激光共聚焦的结果显示，SDF-1α基因定位在细胞质内。结论成功构建了pEGFP-C1-SDF-1α的融合表达载体，SDF-1α基因主要在细胞质中表达。     

肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

目的　检测大鼠腹腔肥大细胞(mastcell,MC)对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。方法　SD大鼠体重约2 0 0g ,雌雄不限,供采集MC和原代培养平滑肌细胞(smoothmusclecell,SMC)。采用梯度密度离心分离MC ,提取MC上清液(含MC释放的各种炎症介质)。用MC上清液和氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)处理SMC ,实验分四组:对照组SMC在5mL含10 %小牛血清的DMEM中培养4 8h ;oxLDL组SMC在5mL含10 %小牛血清的DMEM中(含oxLDL ,终浓度为10 0mg L)培养4 8h ;MC上清液组SMC在5mL含10 %小牛血清的MC上清液(由含1×10 6 个MC的细胞悬液提取)中培养4 8h ;MC上清液+ox LDL组SMC在5mL含10 %小牛血清的MC上清液(由含1×10 6 个MC的细胞悬液提取)中(含oxLDL ,终浓度为10 0mg L)培养4 8h。采用油红O染色检测SMC泡沫化。RT PCR检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达,PCR引物序列Ⅰ型胶原为5′GACACTGAACCCTTTGTAATG 3′和5′GTGAAACTCCCGTCTGCT 3′,扩增片段长度为399bp ;Ⅲ型胶原引物序列为5′AGCGGAGAATACTGGGTT 3′和5′TGTAATGTTCTGGGAGGC 3′,扩增片段长度为2 88bp ;内参照采用βactin ,引物序列为5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3′和5′CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3′,扩增片段长度为5 4 8bp。免疫细胞化学染色检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达。结果　油红O染色显示MC上清液可加速SMC泡沫化。RT PCR结果发现,与对照组SMC相比,用oxLDL或MC上清液分别单独处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达均降低,用oxLDL和MC上清液同时处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达降低更明显。免疫细胞化学染色显示,对照组SMC细胞浆内有大量棕色颗粒,颗粒粗大而染色深,说明对照组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达为强阳性;用oxLDL或MC上清液分别单独处理SMC 8h后,细胞浆内棕色颗粒少而染色浅,说明Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达均明显降低;用oxLDL和MC上清液同时处理SMC 4 8h后,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达降低更明显。结论　MC在体外抑制SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原表达,并且能协同oxLDL对Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的抑制作用。因此MC释放的炎症介质也许参与了动脉粥样斑块纤维帽的重构。     

血管内皮生长因子在内皮细胞的稳定表达促进一氧化氮分泌

目的：建立稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系，研究转染后对内皮细胞生长和一氧化氮分泌的影响。方法：将真核表达载体PCD2－VEGF121，用阳离脂质介导，转染人脐静内皮细胞系细胞，分别用RT－PCR、免疫组化，Miles实验检测血管内皮生长因子的转录，蛋白质的表达及其生长物学活性，检测转染后内皮细胞生长状况和培养基中一氧化氮水平，结果：RT－PCR检测出了转录血内皮生长因子的稳定转染细胞克隆，该单克隆细胞的免疫组化检测血管内皮生长因子蛋白质表达结果呈阳性，Miles实验表明其表达产物具有生物学活性，而作为对照的转空白质粒细胞和未转染细胞上述实验结果皆为阴性；转染后内皮细胞生长明显加快，一氧化氮水平在48h和72h时明显增高，结论：成功建立了稳定表达血管内皮生长因子的内皮细胞系，血管内皮生长因子转染可促进内皮细胞生长和一氧化氮分泌。     

肺炎衣原体感染与动脉粥样硬化

自1988年提出肺炎衣原体与动脉粥样硬化相关以来,大量学者从临床检测、动物实验、细胞分子水平证实了肺炎衣原体与动脉粥样硬化的相关性,但是最近的三个大规模临床试验结果都表明,针对肺炎衣原体的抗生素治疗未能取得治疗冠心病的良好疗效,这一方面有试验本身设计方面的原因,另一方面也促使我们有必要重新认识肺炎衣原体感染在动脉粥样硬化发病机制中的作用.本文拟结合最新的临床试验结果重新温习一下肺炎衣原体感染与动脉粥样硬化的研究历程.     

局部狭窄血管远心端流场数值模拟和PIV测定

目的观察局部狭窄远心端的流场分布,以便探讨动脉粥样硬化好发区的流场特征。方法数值模拟局部狭窄远心端流场以及剪切应力的分布,粒子图象速度场仪(PIV)测定局部狭窄远心端流场分布。结果数值模拟结果表明局部狭窄远心端流场紊乱,有明显的涡流和二次流形成,并且形成局部的低剪切应力区域,PIV测定的结果证实局部狭窄远心端流场紊乱。结论局部狭窄远心端的流场分布及其特征有利于动脉粥样硬化病变的形成和发展。     

脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。     

氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒

目的　观察氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)诱导大鼠腹腔肥大细胞 (MC)脱颗粒。方法　SD大鼠体重约 2 0 0g ,雌雄不限 ,供采集MC。采用梯度密度离心分光光度仪检测细胞上清液和细胞裂解液组胺含量 ,计算组胺释放率 ,寻求oxLDL致MC脱颗粒的最佳浓度。用最佳浓度的oxLDL处理MC进行实验 ,将分离提纯的MC于含 10 %小牛血清和 10 0g LoxLDL的DMEM中培养 4 8h。通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色、透射电镜观察肥大细胞脱颗粒状态。结果　oxLDL浓度依次为 0、5 0、10 0及 2 0 0g L时 ,肥大细胞组胺释放率逐渐增高 ,分别为 4 .38%± 1.5 8% ,39.98%± 2 .2 1% ,5 2 .99%± 1.13% ,71.70 %± 3.0 2 %。以 10 0mg LoxLDL处理MC后 ,倒置显微镜观察发现对照组MC多数呈半贴壁生长 ,细胞为球形 ,形态完整 ,边界清晰 ,细胞浆内有大量透亮粗大颗粒 ,有部分细胞贴壁较牢 ,呈梭形 ;处理组MC有较多细胞形态不规则 ,边界不清 ,有颗粒释放到细胞外。甲苯胺蓝染色显示 ,处理组有较多MC脱颗粒 ,细胞膜不完整 ,细胞内颗粒稀疏 ,而细胞周围有数量不等的紫红色颗粒 ;对照组仅有少部分MC脱颗粒 ,细胞呈球形 ,细胞膜完整 ,细胞核染成蓝色 ,细胞浆内有大量紫红色的粗大颗粒 ,颗粒电子密度高 ;处理组MC形态不规则 ,细胞浆内颗粒稀疏 ,多数颗粒