Adipophilin通过PI3K/Akt通路促进细胞内脂质蓄积

目的:探讨adipophilin促进细胞内脂质蓄积的可能机制,为动脉粥样硬化的防治提供参考。方法:分别通过q PCR、Western blot和油红O染色观察氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)处理RAW264.7细胞不同时间后,细胞内Akt、p-Akt和adipophilin的蛋白水平及脂质蓄积情况;并检测PI3K/Akt抑制剂LY294002处理后,上述指标的变化;HEK293细胞过表达adipophilin后,检测Akt的活性;并用免疫共沉淀实验检测adipophilin与Akt之间的相互作用。结果:ox LDL处理细胞后,随着时间的延长,脂滴增多,Akt被活化,adipophilin表达增加,而LY294002处理则可抑制上述变化;过表达adipophilin后,p-Akt水平增高,但adipophilin与Akt之间未见直接相互作用。结论:Adipophilin可通过PI3K/Akt途径促进细胞内脂质蓄积,但可能不是通过直接相互关系发挥作用的。     

中性胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化

目的巨噬细胞来源的负荷有胆固醇酯的泡沫细胞是动脉粥样硬化的标志,并且细胞内胆固醇酯的水解反应是泡沫细胞形成的关键步骤,该反应由中性胆固醇酯水解酶催化。此外,中性胆固醇酯水解酶还调节胆固醇逆向转运,从而参与体内胆固醇的最终清除。为进一步明确动脉粥样硬化的形成,本文针对中性胆固醇酯水解酶的功能及其在动脉粥样硬化发生中的作用进行综述。     

脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄

目的探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)调控中性胆固醇酯水解酶(nCEH)表达进而介导脂质积蓄的作用机制。方法用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析技术(Western blot)分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量。结果 (1)高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组(P0.01),而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组(P0.01),Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达。(2)用100 nmol/L蛋白激酶Cδ(PKCδ)激动剂佛波酯(PMA)孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低(P0.05),而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素(Rottlerin)同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高(P0.05)。结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用。     

CalphostinC逆转泡沫细胞作用机制

目的Calphostin C是从Cladosporium chadosporioides分离出来的具有多醌结构、作用于蛋白激酶C（PKC）调节区的特异性抑制剂，目前主要应用于乳腺癌等多药耐药性的临床治疗。已有的资料显示PKC活性的改变可能参与了细胞内脂质的蓄积和外排．在动脉粥样硬化长期演变的进程中具有潜在的药物开发价值。     

Adipophilin真核表达载体的构建与表达分析

目的 构建能在真核细胞中表达的adipophilin表达质粒pcDNA3.1-HA-adi.方法 从培养的C57BL/6J小鼠血管平滑肌细胞提取总RNA,在PCR引物中加入HA序列,用RT-PCR及TOPO克隆技术得到HA-adi克隆栽体,测序后,把HA-adi定向插入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆住点.阳离子聚合物介导转染人THP-1巨噬细胞,用R.T-PCR及Western blot的方法检测目的 蛋白在细胞中的表达.结果 限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得HA-adi基因片段,HA-adi准确克隆入pcDNATM3.1/myc-His(-)-C的多克隆位点.转染THP-1巨噬细胞后,检测到目的 蛋白的表达.结论 成功构建pcDNA3.1-HA-adi,并在THP-1巨噬细胞中得到表达.     

消斑肽加速氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞凋亡

目的：我们已经发现消斑肽能逆转平滑肌源性的泡沫细胞,阻抑C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,对已形成的斑块有消退作用。本文主要探讨消斑肽的作用机制。方法：体外培养的猪主动脉平滑肌细胞,先与15 mg/L的氧化低密度脂蛋白孵育72 h,再与0.1 mg/L消斑肽孵育24 h,应用荧光染色技术、激光共聚焦显微技术和流式细胞术,观察消斑肽对平滑肌细胞的作用。结果：氧化低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞发生凋亡;消斑肽能加速氧化低密度脂蛋白诱导的细胞凋亡。结论：综合以前的实验,消斑肽可能是通过加速斑块中细胞的凋亡发挥抗动脉粥样硬化效果。     

用轴型额鼻皮瓣修复面斜裂

为了修复面斜裂,设计以内眦血管分支为蒂的额鼻部轴型皮瓣,向下旋转推进移转,使鼻翼复位。鼻腔粘膜缺损另以鼻唇沟瓣为衬里。临床应用4例,获得较好效果,且方法简便有效。     

NO-1886对高糖高脂饲料喂养新西兰兔糖代谢的影响

合成药NO-1886是脂蛋白脂肪酶(LPL)的激动剂，能降低血浆甘油三酯(TG)并升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平。我们曾发现NO-1886还具有降低血糖的作用。本研究主要观察NO-1886对糖尿病兔胰岛素抵抗及β-细胞功能方面的影响。用高糖高脂饲料诱导，使新西兰兔血浆葡萄糖升高，发生胰岛素抵抗。在高糖高脂饲料中添加1％NO-1886进行治疗。结果：发现NO-1886可抑制血清葡萄糖升高，经糖耐量和胰岛素敏感性试验检测，NO-1886可保护胰岛素的急性相分泌，增强胰岛素对葡萄糖的清除能力。研究结果提示NO-1886具有改善胰岛素抵抗、降低血糖的作用。     

饮食诱发Ⅱ型糖尿病动物模型的研究

摄入过多的营养和过度肥胖是诱发Ⅱ型糖尿病的重要因素。大量流行病学资料显示Ⅱ型糖尿病的发生、发展与营养过剩有关。我们用高脂高蔗糖饲料喂养贵州小香猪 3个月 ,并对其空腹血糖、胰岛素和脂质水平进行检测 ,发现这种饲料可以引起猪体重的增加 ,且出现严重的高血糖症和高脂血症。1　材料和方法贵州小香猪 15头 (雄∶雌 =8∶7) ,3～ 4月龄 ,购自第三军医大学实验动物学部。按体重分为 2组 ,正常对照组 5头 ,喂以普通猪饲料 ;实验组 10头 ,喂以高脂高蔗糖 (含 37%蔗糖 ,10 %猪油 )饲料 ,共喂养 3个月。每月末称体重 ,并从禁食过夜的小香猪…     

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸降低乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶活性

目的：已经发现随着细胞内胆固醇酯的积聚，脂肪分化相关蛋白的表达明显增加。本文进一步探讨脂肪分化相关蛋白干预细胞内胆固醇代谢的作用位点。 方法： Ox-LDL组为80 mg/L 氧化低密度脂蛋白与C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育，Ox-LDL+antisense组另加1 mmol/L脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸，在不同的时点取样，共观察4 d。使用荧光分光光度计观察细胞内胆固醇酯的改变；使用脂肪分化相关蛋白抗体间标法结合流式细胞术，观察脂肪分化相关蛋白表达量的变化；使用Ox-r［CL-3H］LDL和液体闪烁计数器观察细胞对氧化低密度脂蛋白摄入量的变化，并同时测定乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性。 结果： 72 h后，Ox-LDL+antisense组细胞内胆固醇酯（19.9±1.9）mg/g protein显著低于Ox-LDL组（46.6±3.4）mg/g protein。4 d观察期间，脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量两组细胞都增加，从12 h时点开始，Ox-LDL组大于Ox-LDL+antisense组，在4 d时点，Ox-LDL组明显高于Ox-LDL+antisense组。两组细胞摄入Ox-r［CL-3H］LDL的量逐渐增加，但是，Ox-LDL+antisense组摄入量从1 d后明显低于Ox-LDL组，在2 d和4 d时点，两组差别仍有显著性。乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性从6 h到2 d表现为增加，在2 d时点，两组比较差别显著，Ox-LDL+antisense组的活性明显低于Ox-LDL组。但从2 d到4 d，乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性稳定。ACAT的活性与脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量相关分析表明，Ox-LDL组R2＝0.6176 （P＜0.05），Ox-LDL+antisense组R2＝0.8212（P＜0.05）。 结论： 抑制脂肪分化相关蛋白表达能引起细胞摄入外源性脂蛋白减少和乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性降低，提示脂肪分化相关蛋白与脂滴的代谢功能密切相关，且乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶有可能是其潜在的位点。