CAR-T细胞治疗产品非临床药效学研究关注点

CAR-T细胞（Chimeric Antigen Receptor T Cells,CAR-T）是一种表达嵌合抗原受体的基因工程T细胞,也称"活的药物",可以增强基因工程T细胞的特异性,能够以MHC （主要组织相容性复合体,Major Histocompatibility Complex,MHC）非依赖性的方式高度靶向肿瘤抗原,是治疗肿瘤的一种新手段。最近,临床上使用CAR-T细胞治疗复发、难治性血液恶性肿瘤和多发性骨髓瘤取得了很好的疗效;同时,采用CAR-T细胞治疗实体瘤的研发也在积极开展。根据所构建的CAR-T细胞不同的适应证和作用原理,构建不同的动物肿瘤模型,研究CAR-T细胞在动物模型的抗肿瘤活性,可以对CAR-T细胞进行概念验证性研究并证明其体内药效学活性,为临床研究提供有力的数据支持。     

尿素遗传毒性评价研究

目的：评价尿素的遗传毒性风险。方法：Ames试验：采用TA98、TA100、TA1535、TA1537和 WP2 uvrA共5种菌株(有和无S9代谢活化)开展,尿素处理剂量为5000、1667、556和185 µg/皿,所有样本置37 ℃培养48 h后进行菌落计数;染色体畸变试验：CHL细胞分别与尿素作用6 h(有和无S9代谢活化)和24 h(无S9代谢活化),尿素处理浓度范围为0.16 ~2.50 mg/mL;细胞经秋水仙素处理后,收获并制片。每组观察100个中期分裂相细胞中含结构畸变和/或数目畸变的细胞数;小鼠骨髓微核试验：单次经口灌胃给予ICR小鼠10000、5000和2500 mg/kg尿素,并在给药24 h和48 h后取材。计数2000个嗜多染红细胞中含微核细胞率。结果：尿素处理组各菌回复突变菌落数与阴性对照组比较均未见明显增加;尿素导致的结构畸变率和数目畸变率与阴性对照组比较均无显著性差异(P＞0.05);给予尿素后24 h,各剂量组平均含微核嗜多染红细胞率与阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05),给予尿素后48 h,10000 mg/kg剂量组动物平均含微核嗜多染红细胞率与阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。结论：尿素浓度为5000 μg/皿及以下时无诱导细菌碱基突变作用,在无明显细胞毒性作用浓度条件下无诱导哺乳动物细胞染色体结构畸变作用,剂量为10000 mg/kg及以下时无诱导小鼠骨髓细胞染色体损伤作用。故尿素的整体遗传毒性评价结果为阴性。     

药物毒理学研究中体外替代试验研究现状及展望

药物的安全性和有效性是药物研发成功的决定因素,而药物毒性是终止药物研发的关键因素之一。相关监管指南和指导原则为利用动物进行毒理学研究及生物测试或其他相关试验制定了基本标准。动物体外替代试验不仅遵守了国际上提倡的“3R原则”,也符合毒理学学科发展、社会经济发展及新药研发的要求。动物体外替代试验已成为21世纪毒性测试的重要方向,毒性测试的重点将集中在敏感性终点的选择与评价、细胞-反应网络、高通量与中通量筛选方法的构建及应用、作用机制及作用模式、毒性通路以及系统生物学效应等方面,并且已获得药物研发领域广泛的支持和监管部门的认可,具有广阔的发展前景和重要的应用价值。     

重组抗CD52单克隆抗体的食蟹猴单次静脉注射毒性研究

目的：开展食蟹猴静脉注射重组抗CD52人源化单克隆抗体注射液单次给药毒性研究,考察动物体内耐受性、给药后出现的毒性反应及严重程度和药物毒性作用靶器官,评价其安全性。方法：首先应用流式细胞术检测方法,筛选出8只红细胞表面CD52抗原阴性食蟹猴,用于单次给药毒性研究。将动物随机分成4组,包括溶媒对照组和3、10、30 mg·kg^-1剂量组,每组2只,雌雄各半。采用静脉推注给药,给药1次。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每周称量1次体质量。分别在给药第2、 8、15 d采集动物外周血液进行临床病理检查,包括血液学(含凝血)、血清生化(含电解质)。分别在给药第2、6、8、15、21 d采集动物外周血液进行T淋巴细胞及亚群和B淋巴细胞的分类计数。于给药第 22 d解剖动物并进行大体病理学检查。结果：动物给药后,在10 mg·kg^-1和30 mg·kg^-1剂量下,会引起白细胞总数、淋巴细胞、单核细胞数量和比例、T淋巴细胞数量及其亚群细胞数量下降,这些变化与药物的免疫抑制作用相关。受试物还会引起血红蛋白浓度下降,网织红细胞数量和比例和总胆红素升高。 结论：给予食蟹猴单次静脉注射3、10、30 mg·kg^-1重组抗CD52人源化单克隆抗体注射液后,动物耐受良好,最大耐受量是30 mg·kg^-1。本研究的给药剂量以及与药物相关的毒性发现,为后续开展长期毒性研究提供了参考。     

纳米材料的神经毒性作用机制及评价方法

近年来,纳米材料在多种生物医学领域被广泛应用,其生物安全性也受到越来越多的关注。多种纳米材料可穿透血脑屏障进入中枢神经系统,产生神经毒性。本文讨论了纳米材料进入中枢神经系统的方式及因素;纳米材料的特异性以及非特异性的中枢神经毒性效应、外周神经毒性及其作用机制;并论述了国内外用于体内神经毒性、体外神经细胞培养模型的神经毒性以及替代的评价方法,为纳米材料的安全性评价及神经毒性探究提供参考。     

Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法的建立及应用

目的: 建立Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并应用于染料木黄酮(GEN)潜在致癌性的检测中。方法:建立Bhas 42细胞转化试验方法,比较细胞灶法和H2O2法对结果判定的影响。细胞灶法试验组在第21天直接固定染色。H2O2法试验组在细胞接种后第19天采用H2O2处理,染色并测定D(450)以确定细胞转化率。计算转化率以验证两种方法的相关性。并通过细胞生长试验选择适宜的GEN浓度进行细胞转化试验,H2O2法判定转化试验结果。结果:在细胞灶法中,启动试验3-甲基胆蒽(3-MCA)组、促癌试验佛波醇酯(TPA)组的转化灶个数分别与启动、促癌试验DMSO组相比明显升高(P2O2法中,启动试验3-MCA组、促癌试验TPA组的转化灶个数、D(450)分别与启动、促癌试验DMSO组相比均明显升高(PD(450)相对于阴性组有显著差异(P结论:成功建立了Bhas 42细胞转化试验的H2O2法并实现了高通量检测,该法进一步缩短了实验周期并提高了结果的客观性,适用于非遗传毒性致癌物的体外早期筛选。GEN在促癌试验中呈阳性,但在启动试验中呈阴性,提示其可能是非遗传毒性致癌物。     

GLP机构计算机化系统验证的生命周期及考虑要点

GLP机构中使用的计算机化系统必须符合良好实验室规范的要求,为确保实验数据真实、安全、可靠,不但要对计算机化系统验证开展生命周期管理,而且要对系统生命周期活动中涉及的人员的资质、职责和培训提出要求,确保从计算机化系统的概念、需求、设计、开发、发布、操作使用及维护,直至系统退役及存档的所有活动均符合GLP要求。简要介绍计算机化系统验证生命周期的概念、内容及主要任务,计算机化系统验证生命周期各阶段的需求及特殊的考虑要点,以期为我国GLP机构的计算机化系统开发、验证提供一定参考,进一步提高计算机化系统的使用效率,确保数据的准确性和可靠性,以加快我国GLP机构临床前药物安全性评价数据的国际认可。     

药物神经毒性评价体外模型的研究进展

神经毒性是药物安全性评价的重要方面。体外模型相比较体内动物实验在药物高通量筛选、分子机制研究、检测分析技术应用上具有显著优势。至今,研究和评价药物神经毒性的体外模型主要包括原代神经细胞培养、神经细胞系培养、诱导神经干细胞分化模型,三维细胞培养模型等。这些体外模型的复杂程度、对药物的敏感性及检测方法不尽相同。概述各种神经毒性体外模型的应用领域及研究进展,提出了神经毒性体外评价模型研究应用中存在的问题及今后的发展方向。     

我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展

目的：综述我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展。方法：介绍致癌试验常用转基因动物模型的构建、利用转基因动物模型开展致癌试验的优势、国际认可及国际监管机构新药申报中的应用、国内外致癌试验相关指导原则、我国开展基于转基因动物致癌试验面临的困境以及转基因动物模型构建的最新进展。结果与结论：基于转基因动物模型的致癌试验具有诸多优势也是目前国际趋势,在我国建立临床前药物致癌试验转基因动物模型非常必要。     

百格斯和乳酸依沙吖啶与碘伏换药敷料的临床疗效及细胞增殖毒性比较

目的 了解临床常用伤口抗菌敷料百格斯、乳酸依沙吖啶和碘伏对头面部感染伤口的疗效、成本以及细胞增殖毒性。方法 回顾性分析2013年7月-2014年4月北京同仁医院急诊外科收治的各种原因所致头面部皮肤裂伤清创缝合术后感染患者46例,根据采用的抗菌溶液不同,将患者分为百格斯组（16例）、碘伏组（15例）及乳酸依沙吖啶组（15例）,分别采用相应消毒剂进行换药。记录患者伤口愈合时间及治疗费用。将CHL（中国仓鼠成纤维肺细胞）接种于96孔板,分别稀释碘伏（0.000 5%～0.1%）、过氧化氢（0.002 5%～0.5%）、百格斯（0.1%～20%）及乳酸依沙吖啶（0.5%～100%）至8个不同浓度,加入培养基孵育6 h。用酶标仪在450 nm波长处检测各孔的吸光度(OD)值,以吸光率(%)=(OD待测组/OD对照组)×100%评估细胞增殖抑制率。结果 百格斯组、碘伏组和乳酸依沙吖啶组愈合时间、7 d愈合率及14 d愈合率比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。各组治疗费用比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中,碘伏组和乳酸依沙吖啶组治疗费用低于百格斯组,差异有统计学意义（P＜0.05）。孵育6 h后,细胞增殖抑制率为乳酸依沙吖啶（41.922%）＞百格斯（5.528%）＞过氧化氢（0.058%）＞碘伏（0.006%）。结论 与碘伏和乳酸依沙吖啶比较,应用百格斯对头面部感染伤口治愈时间和治愈率均未见显著差异,但治疗费用较高,细胞增殖毒性中等。患者可根据免疫力及经济水平,选择合理消毒剂。