miR-17-5p 靶向MICB 减弱NK 细胞对肝癌细胞的毒性作用

目的:探讨miR-17-5p 在肝细胞癌(HCC)HepG2 细胞对NK 细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB 基因3忆UTR 序列、突变型MICB 基因3忆UTR 序列、miR-17-5p mimic 序列、miR-17-5p-NC 序列、anti-miR-17-5p 序列的质粒载体分别或共转染HCC HepG2 细胞,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p 对MICB 的调控作用。应用实时荧光定量PCR 或蛋白免疫印迹检测细胞或组织中miR-17-5p 及MICB mRNA 和蛋白表达情况。结果:淤与miR-17-5p-NC 组相比,miR-17-5p-mimic 组HepG2 细胞中miR-17-5p 表达水平显著升高,MICB mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与anti-miR-17-5p-NC 组相比,anti-miR-17-5p 组HepG2 细胞中miR-17-5p 表达水平均显著降低,MICB mRNA 和蛋白表达水平均显著增加(P<0’05)。与miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Wt 组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3’-UTR-Wt 组荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Mut 组与miR-17-mimic+MICB 3’-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。于与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p 在HCC 组织中的表达水平显著增加,而MICB 蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。miR-17-5p 和MICB 蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM 分期、分化程度等临床病理特征有关(P<0.05)。在HCC 肿瘤组织中miR-17-5p 与MICB 蛋白表达水平呈明显负相关(P<0.05)。 与miR-17-5p-NC 组相比,miR-17-5p-mimic 组MICB 蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与miR-17-5p-mimic+MICB 3’UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3’UTR-Wt 共转染组中NK 细胞毒性和MICB 蛋白表达水平均显著增加(P 均<0.05)。与anti-miR-17-5p-NC 组相比,anti-miR-17 组NK 细胞毒性和MICB 蛋白表达水平均显著增加(P 均<0.05)。 与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC 组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic 组细胞中MICB 表达水平显著降低(P<0.05)。在不同效靶比时,与Ctrl 组相比,丙戊酸钠组NK 细胞毒性显著增加(P<0.05)。与丙戊酸钠+miR-17-5p-NC 组相比,丙戊酸钠+miR-17-5p-mimic 组NK 细胞毒性显著降低(P<0.05)。结论:miR-17-5p 通过靶向MICB 降低HepG2 细胞对NK 细胞介导的细胞毒性敏感性,从而抑制NK 细胞对肝癌细胞的毒性。     

髓内固定和髓外固定治疗股骨转子间骨折围手术期失血量的比较

目的比较髓内固定和髓外固定治疗股骨转子间骨折围手术期失血量。方法回顾性分析了从2012年1月至2017年12月期间,我院骨科手术治疗股骨转子间骨折病例资料。共51例,其中男29例,女22例;年龄为41～91岁,平均72.8岁。根据股骨转子间骨折髓内固定和髓外固定手术方式的不同,分为髓内固定组和髓外固定组。其中髓内固定组40例,髓外固定组11例。收集患者一般资料和术前、术后的Hb、Hct,术中出血量、输血量等,计算并比较两组患者总失血量和隐性失血量。结果51例患者总失血量平均为(1 784.2±209.8)m L,隐性失血量平均为(1 580.0±215.4)m L,隐性失血量占总失血量的百分比为88.6%。髓内固定组的显性失血量(147.6±52.6)m L明显低于髓外固定组(410.5±137.8)m L,差异有统计学意义(0.05)。髓内固定组的隐性失血量为1 631.7±198.6mL,髓外固定组的隐性失血量为(1 391.9±169.2)m L,差异无统计学意义(0.05)。髓内固定组的总失血量也低于髓外固定组,但差异无统计学意义(0.05)。结论髓内固定和髓外固定治疗股骨转子间骨折围手术期的总失血量相似。股骨转子间骨折围手术期隐性失血量大,不容忽视。     

免疫组织化学指标在心脏淀粉样变性分型中的应用价值北大核心CSCD

目的探讨免疫组织化学指标在心脏淀粉样变性分型中的意义和价值。方法收集中国医学科学院阜外医院1990年1月至2017年4月临床怀疑淀粉样变性的病例,行心内膜心肌活检组织和心脏移植的受体心脏,经组织学检查和刚果红染色为阳性的病例,免疫组织化学方法检测常见淀粉样物质包括甲状腺转运蛋白（TTR）,免疫球蛋白λ轻链、κ轻链,载脂蛋白（Apo）AⅠ、Apo AⅡ、Apo AⅣ,淀粉样物质A（AA）和β2微球蛋白在心肌活检组织中的表达。淀粉样物质的分布方式分为弥漫性细胞周间质沉积、分散性细胞周间质沉积、结节状间质沉积、心内膜沉积、动脉沉积和静脉沉积,比较不同淀粉样物质分布方式的差异。结果共有19例患者的20份心肌组织应用免疫组织化学方法检测到淀粉样物质沉积,另外2例虽然刚果红染色阳性但应用现有抗体未检测到淀粉样物质,根据淀粉样物质的表达方式将19例分为3种,第1种（5例）：心肌间质仅检测到一种淀粉样物质。第2种（6例）：心肌间质检测到多种淀粉样物质,但其中一种淀粉样物质表达强度强,其余较弱或一种淀粉样物质与伴侣蛋白（Apo AⅣ）共表达。第3种（8例）：心肌间质有多种淀粉样物质沉积而且表达强度均相同。前两组病例可以进行分型,分别为AL-λ、ATTR、AL-κ和AApo AⅠ型淀粉样变性。第3种表达方式因为特异性差无法进行分型,需要进行质谱或基因分析。淀粉样物质呈细胞周分布者多发生在免疫球蛋白轻链型淀粉样变性（包括AL-λ和AL-κ）,较少发生于ATTR型。6例淀粉样物质在血管沉积,4例为ATTR型,2例为AL和TTR共同阳性而无法分型者。免疫组织化学方法对心脏淀粉样变性分型成功比例为11/19。结论采用免疫组织化学方法用于心脏淀粉样变性分型时可以结合淀粉样物质的表达和分布方式、有无伴侣蛋白并结合患者其他器官的受累情况和实验室检查,可以作为心脏淀粉样变性的初步分型工具。     

反向扩散法检测皮肤癣菌对伊曲康唑的敏感性

目的：探讨皮肤癣菌的药的敏感试验新方法。方法：建立反向扩散法，将抗真菌药物伊曲康唑稀释成不同浓度加入固体培养基中，用定量取材器从沙保罗琼脂上切取须癣毛癣菌和犬小孢子菌的菌落，种子药物培养基中，并采用抑制率行回归分析。结果：药的培养基药物浓度越高，受试菌株生长菌落越小。接种标本的大小与菌落直径的大小呈正相关。接种标本取靠近菌落中央或边缘部位，对菌落大小基本没有影响。结论：反向扩散法具有可靠、迅速和重复性较好等特点。     

人类白细胞抗原A表达沉默对大鼠脑内人细胞移植排斥反应的调节

背景：移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用。用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用，但尚未见相关体内研究报道。 目的：拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞。再将其移植到帕金森大鼠纹状体．观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节。 设计．时间及地点：细胞基因工程体内实验．于2005—09／2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成。材料：清洁级12周龄雌性SD大鼠33只，用于建立帕金森动物模型。原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎，由北京京北医院提供，293T为贴壁依赖型成上皮样细胞。慢病毒载体系统由psicoR，pCMV—VSV—G和psPAX2三质粒组成，为美国Addgene公司产品。携带HLA—A2厂cDNA的pcDNA I／Amp—HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠。 方法：以携带HLA—A2 cDNA的pcDNA I／Amp—HLA质粒为模板PCR扩增HLA—A2 cDNA编码区序列．构建人类自细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP—Flag-HLA，转染293T细胞。用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA 4个待选靶点序列．分别起始于编码区的第257，350．833，251位碱基，构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体。用带有Flag标签的人类白细胞抗躁AcDNA表达载体转染293T细胞后，再进行不同靶点病毒直接感染。33只帕金森模型大鼠随机分为2组，实验组大鼠纹状体植入人类白细胞抗原A小分子干扰RNA病毒感染的人胚肺成纤维细胞．对照组植入带有小分子干扰RNA对照序列和绿色荧光蛋白病毒感染的人胚肺成纤维细胞。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测脑内移植物人类白细胞抗原A、CD4和CD8的表达，用抗人细胞核的阳性表达评价移植细胞的存活情况。 结果：与对照组比较，实验组移植后4d、2周时人类白细胞抗原A阳性细胞均较少（t=3．301，2．631，P〈0．01，0．05）．6周时无明显变化；CD4阳性细胞仅移植后6周明显减少（t=2．269．P〈0．05）：移植后4dCD8阳性细胞无明显变化，2周及6周时明显减少（t=2．333．P〈0．05）：抗人细胞核阳性细胞仅移植后2周明显减少（t=2．952，P〈0．05）。 结论：人类白细胞抗原A表达敲减可以抑制移植排斥反应。但并不能显著延长移植物的存活时间。     

下颈椎前路椎弓根螺钉内固定技术的研究进展

与传统前路和后路手术相比,下颈椎前路椎弓根螺钉内固定技术（anterior transpedicular screw fixation．ATPS）具有较好的生物力学优势、相对安全等特点,仅通过一次前路手术可解决减压和重建两个问题。但是由于ATPS采用了较为特殊的解剖通道,临床上暂无专门用于前路椎弓根螺钉置钉的配套内固定系统,下颈椎ATPS技术的适应证相对较窄,尚不能替代传统前路和后路手术方法。如何精确置钉以及ATPS相关内固定器械的开发是目前研究的热点及未来发展方向。     

成人卵巢原发Wilms瘤合并畸胎瘤成分1例并文献复习

目的 探讨成人卵巢原发Wilms瘤合并畸胎瘤成分的临床病理学特征、诊断、鉴别诊断。方法 观察成人卵巢原发Wilms瘤合并畸胎瘤成分的临床特点,采用免疫组化EnVision两步法检测WT1、PAX8、CKpan、desmin、S-100、Ki-67等的表达,分析Wilms瘤及畸胎瘤成分治疗的敏感性,并复习相关文献。结果 患者右侧卵巢大小8 cm×8 cm×7 cm,包膜较脆伴破裂。肿瘤由胚芽、上皮及间叶3种成分组成,以未分化胚芽为主,见幼稚小管及分化型腺管,局灶间质呈横纹肌形态。胚芽成分强表达WT1,而分化型上皮和间质成分均不表达。上皮表达CKpan及PAX8,横纹肌分化细胞表达desmin,软骨成分表达S-100。胚芽成分Ki-67增殖指数约60%。患者术后6、9、12个月CT示盆腹腔多发结节,右下腹壁和脐旁结节。病理诊断为转移性Wilms瘤,以胚芽成分为主;术后辅以化疗(顺铂+依托泊苷+博来霉素,长春新碱+更生霉素+环磷酰胺)。结论 成人卵巢原发Wilms瘤发生率极低,合并畸胎瘤成分的病例诊断具有复杂性及挑战性,需明确各成分占比,指导临床精准治疗。     

阿尔茨海默病患者静息态下磁共振成像对小脑功能评估价值

【目的】应用静息态功能磁共振成像技术(fMRI)观察阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者,轻度认知功能障碍(mild cognition impairment,MCI)和正常人静息态下小脑齿状核功能连接改变的差异。【方法】对19例 AD 患者,16例 MCI 患者及19例正常对照者在静息态下行 fMRI 检查。以双侧齿状核为感兴趣区,对功能连接的相关系数进行双样本 t 检验,比较不同组别小脑功能连接改变的差异。【结果】AD 组小脑齿状核与左缘上回/顶下小叶、右豆状核、左顶下小叶、双侧前额叶功能连接低于正常对照组,而右颞下回、双侧枕下回、右小脑前叶、右颞中回、右中央前回、左中央后回功能连接高于正常对照组(P <0.05,AlphaSim校正)。【结论】静息态下 AD 及 MCI 患者小脑齿状核功能连接的改变提示小脑在 AD 及 MCI 发病过程中起重要作用。     

血小板激活因子对大鼠脑损伤的实验研究

目的研究血小板激活因子(platelet-activatingfactor,PAF)在缺血性脑损伤中的致病作用。方法将PAF或含0.25%的牛血清白蛋白(BSA)生理盐水注入大鼠右侧颈总动脉,检测给药后即刻和40min的平均动脉压(MAP)和脑血流(CBF);用干湿重量法检测给药侧大鼠脑水含量变化;观察大鼠脑组织病理学改变。结果给药后即刻和40min对照组与PAF组MAP、CBF比较,两3者差异均显著(P<0.05)。两组脑组织水含量相比(P<0.01),差异也十分显著。对照组神经组织结构、毛细血管均未见异常改变。PAF组光镜下仅见小血管周围间隙扩张。电镜下皮层超微结构变化明显。结论PAF在诱发大鼠系统性低血压的同时降低脑血流,破坏血脑屏障,损伤神经细胞和其他神经组织。