应用多重PCR和MLPA技术检测DMD患者和携带者的基因突变及产前诊断

目的 应用多重PCR和多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术检测Duchenne/Becker肌营养不良症(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者、携带者并应用于产前诊断.方法 首先采用多重PCR对临床诊断为DMD/BMD的患者检测DMD基因的26个外显子,未查到缺失突变者和可能的携带者采用MLPA检测全部79个外显子是否有缺失或重复突变.对产前诊断病例,用PCR法检测缺失突变,用MLPA法检测重复突变.结果 多重PCR对22例患者的DMD基因的26个外显子检测.13例有缺失突变.未查到常见缺失突变的9例患者经MLPA检测DMD基因的全部79个外显子,3例为重复突变、1例为单个第18外显子缺失、其他5例未查到缺失和重复突变.16例携带者中,3例有家族史,其中2例检出突变;13例为检测到突变的散发病例患儿的母亲,有8例检测到突变.产前诊断9个胎儿(其中双胎1例),2例胎儿有突变,引产后核实无误;7例胎儿未检测到突变,现均已分娩.结论 多重PCR可检出92.86%的缺失突变并可用于缺失突变的产前诊断,因其简便、可靠、价廉可作为临床上DMD/BMD基因诊断的初选.MLPA可用于多重PCR未检测到缺失突变的患者及携带者的检查.     

应用多重PCR和MLPA技术检测DMD患者和携带者的基因突变及产前诊断

目的 应用多重PCR和多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术检测Duchenne/Becker肌营养不良症(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者、携带者并应用于产前诊断.方法 首先采用多重PCR对临床诊断为DMD/BMD的患者检测DMD基因的26个外显子,未查到缺失突变者和可能的携带者采用MLPA检测全部79个外显子是否有缺失或重复突变.对产前诊断病例,用PCR法检测缺失突变,用MLPA法检测重复突变.结果 多重PCR对22例患者的DMD基因的26个外显子检测.13例有缺失突变.未查到常见缺失突变的9例患者经MLPA检测DMD基因的全部79个外显子,3例为重复突变、1例为单个第18外显子缺失、其他5例未查到缺失和重复突变.16例携带者中,3例有家族史,其中2例检出突变;13例为检测到突变的散发病例患儿的母亲,有8例检测到突变.产前诊断9个胎儿(其中双胎1例),2例胎儿有突变,引产后核实无误;7例胎儿未检测到突变,现均已分娩.结论 多重PCR可检出92.86%的缺失突变并可用于缺失突变的产前诊断,因其简便、可靠、价廉可作为临床上DMD/BMD基因诊断的初选.MLPA可用于多重PCR未检测到缺失突变的患者及携带者的检查.     

美欧医学遗传学专科和相关专职体系的发展及其对医疗保健的影响北大核心CSCD

人类医学遗传学知识的积累以及对遗传性疾病的诊断、预防和治疗的需求催生了医学遗传学这一全新的医学专科和相关遗传咨询师及遗传技师的专职体系。本文首先介绍了美国医学遗传学专科对于高级临床遗传医师和遗传检测检验师的培训体系及中级遗传咨询师及初级遗传技师的培训方法,同时概述了这一规范的三级教育体系对培训基地、课程、学历和核心能力的要求以及各级专业人才的构成和数量,然后简要介绍了欧盟和加拿大的医学遗传学专科建设和发展现状,最后总结了美国医学遗传学会在遗传和基因组医学诊断治疗规范的制定和在遗传检测监管中的主导地位、对遗传性疾病临床服务和科研转化的促进作用、及对提高医疗卫生从业人员和公众遗传学知识的重要影响。美国医学遗传专科是通过系统转化基础科研和建立专业资质来发展新型医学专科的范例,它对中国遗传和基因组医学的战略性、前瞻性和创新性发展提供了一个参考模式。     

紫外分光光度法检测人血清苯妥英的含量

苯妥英是一种常甩的抗癫痫和抗心律失常药物,它的有效治疗血浓度一般为10～20μg/ml,超过此范围时,会产生中毒现象。由于个体的差异性,相同剂量而血浓度可不一样。为了确保用药安全,宜在用药期间,经常检测血中苯妥英的含量进行监护。 苯妥英在碱性高锰酸钾溶液中被氧化成二苯酮后,用环已烷提取,在247nm处测出吸收值后进行运算。其具体操作步骤是:取病人血清1.0(或1.5)ml,置于2ml pH6.8的磷酸盐缓冲液中,用二氯甲烷10ml提取二次,合并提取液,加入7N NaOH7ml,摇匀,分离出碱液,加热除去残留的二氯甲烷,然后加饱和KMnO_4溶液2ml,摇匀密塞,于80℃水浴加热15～25分钟,取出冷至室温,加入2.5ml环己烷提取,在247nm处测出提取液吸收值y,苯妥英浓度t在1～30μg/ml血清时,与y的回归方程为y=0.02061x 0.003163,r=0.9999,回收率为98.32％±0.58％,cu％为0.59％。     

人类染色体C带异态性定量研究——男性不育与Yqh~+关系探讨

对80例不育男性和30例正常生育男性及12例Yqh~+携带者家系作了染色体C带异态性定量研究。用显微图象测量仪微机控制半自动描迹测量1、9、16和Y染色体的qh/16p相对长度比率。不育组和生育组1qh~+和9qh~+群体频率接近;两组Yqh/16p众数均为3级;两组Yqh~+频率(16.25％和26.67％)虽有差异,但与不育表型(睾丸大小、无精、少精等)并无正相关。12例家系男性Yqh~+携带者都能生育(不育男性Yqh~+先证者除外),表明Yqh~+并不直接导致男性不育。     

老年人“隐匿性”发热

某些临床研究表明,感染引起的发热反应在老年人有所降低,但均未说明测量体温的部位。据说老年人的体温低于年轻人,平均口腔温度为35.84～     

泰必利在正常人体内的药物动力学及相对生物利用度

本文阐述了用高效液相色谱法测定静脉推注泰必利与正常人口服泰必利水溶液的药物动力学结果。口服该药的血浓度及尿浓度数据按线性一室模型处理;静脉推注数据按线性二室模型处理。该药国产原料相对于法国原料的生物利用度为96％,它在尿中以原形排泄的百分率为81％,国产泰必利与法国产品的药物动力学参数基本一致。     

瞬时甲基化气相色谱法测定苯妥英和扑痫酮的体液浓度

本文报道用瞬时甲基化气相色谱法,在改装的国产100型气相色谱仪上,分离和测定体液中同时存在的苯妥英(DPH)和扑痫酮(PD)或其中的一种药物。在血样中应用本法的最低检测浓度DPH为1μg/ml;PD为2μg/ml。用甲基苯妥英(M-DPH)作内标,DPH的线性范围为2～50μg/ml,r=0.9973,方法回收率为99.95～105.4％,天内精密度CV(％)<1.71％,天间精密度CV(％)<2.33％;PD的线性范围为4～40μg/ml,r=0.9975,方法回收率为98.90～103.9％,CV(％)<6.49％。用本法测定DPH的血药浓度和分光光度法比较,r=0.9824,测定值y(uv)=0.02964+0.9074x(GLC)。用本法监测37例DPH的血清样品,多数样品的血药浓度低于10μg/ml,测定值和临床反应基本一致。用本法也能测定药物的唾液浓度,从而计算病人的DPH血浆蛋白结合率,测定7例的结果为91.03±3.06％,与文献报道的89～93％相一致。     

23例糖尿病足临床分析

1997年 3月～ 2 0 0 0年 9月我院内分泌科收治的糖尿病足 2 3例 ,现报告如下。根据ＷＨＯ　 1985年糖尿病诊断标准确诊的糖尿病伴糖尿病足患者 2 3例 ,男 15例 ,女 8例 ,年龄 35～ 82岁 ,平均6 7岁。均为Ⅱ型糖尿病患者 ,病程 0～ 2 0年 ,平均 7年。临床表现 :患肢疼痛 11例 ,占 47 8% ;患肢感觉丧失 4例 ,占17 4% ;足背动脉搏动减弱或消失 19例 ,占 82 6 % ;干性坏疽 2例 ,占 8 7% ;湿性坏疽 6例 ,占 2 6 1% ;余均合并不同程度的局部感染 ,占 6 5 2 % ;发热 3例 ,占 13 %。白细胞总数及 /或中性粒细胞百分比增高 10例 ,占 43 5 %。伴高…